النهج الخلفي نصف دائري قناة لإيصال الجينات الإذن الداخلية في الماوس الأطفال حديثي الولادة
Summary
في هذه الدراسة، يصف لنا النهج الخلفي نصف دائري القناة كوسيلة موثوق بها لإيصال الجينات الإذن الداخلية في الفئران حديثي الولادة. ونحن تبين أن إيصال الجينات عبر قناة نصف دائري الخلفي قادرة على نتخلل الإذن الداخلية كاملة.
Abstract
ويوفر العلاج الجيني الإذن الداخلية وعدا كبيرا كعلاج محتمل لفقدان السمع، والدوخة. واحدة من العوامل الحاسمة في نجاح العلاج الجيني الإذن الداخلية هو إيجاد طريقة تسليم التي تؤدي إلى الكفاءة توصيل متسقة من أنواع الخلايا المستهدفة مع التقليل من فقدان السمع. أننا في هذه الدراسة، وصف النهج الخلفي نصف دائري قناة كوسيلة فعالة لإيصال الجينات الإذن الداخلية في الفئران حديثي الولادة. ونحن تبين أن إيصال الجينات عبر قناة نصف دائري الخلفي قادرة على نتخلل الإذن الداخلية كاملة. تحديد القناة نصف دائري الخلفي التشريحية سهلة، فضلا عن التلاعب بالحد الأدنى من العظم الصدغي المطلوبة، نهج جعل هذه الجراحة خياراً جذاباً لإيصال الجينات الإذن الداخلية.
Introduction
العلاج الجيني الإذن الداخلية حقل التطور السريع للتحقيق. أنه طبق في نماذج مختلفة من الحيوانات لمكافحة مؤقت والصدمة الضوضاء و فقدان السمع الوراثي1. أظهرت دراسات أجريت مؤخرا عدة الانتعاش وظيفية للسمع وتوازن وظائف في الفئران المسخ بعد الإذن الداخلية الجينات العلاج تسليم2،3،4،،من56، 7-من أهم العوامل في تحديد نجاح العلاج الجيني الإذن الداخلية هو النهج الجراحية المستخدمة للوصول إلى الإذن الداخلية. ومن الناحية المثالية، سيكون من السهل لتنفيذ النهج الجراحية والمعالم التشريحية التي ستكون متسقة وسهلة لتحديد وتوصيل الناتجة من أنواع الخلايا المستهدفة ستكون مرتفعة.
في دراسة أجريت مؤخرا، واظهرنا أن عندما تم حقن العلاج الجيني الفيروسي من خلال قناة نصف دائري الخلفي الماوس مركزتين المسخ (نموذج من فقدان السمع، واختلال وظيفي الدهليزية)، كفاءة توصيل لخلايا الشعر حسية كان ينظر إليه في الدهليزية الأجهزة، وكذلك كما هو الحال في القوقعة5. كفاءة عالية لتوصيل الحسية الشعر خلية أسفر عن تحسن الوظائف السمعية والدهليزيه في هذه الفئران المسخ.
في هذه المقالة، يصف لنا بالتفصيل النهج الخلفي نصف دائري قناة الوصول إلى الإذن الداخلية الماوس الولدان.
Protocol
Representative Results
Discussion
وقد وصف العديد من الطرق الجراحية الوصول إلى القوارض الداخلية الأذنين. كوتشليوستومي والنهج في إطار جولة هي الأكثر استخداماً للوصول إلى القوقعة، حين الخلفي نصف دائري القناة والنهج endolymphatic sac تستخدم عادة للوصول إلى أجهزة الدهليزية1. في دراسة أجريت مؤخرا، واظهرنا أن القناة نصف د?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا العمل الأموال من نيدكد شعبة من داخلية البحوث/NIH (DC000082-02 إلى W.W.C.)، وكذلك DC000081 للتصوير الأساسية والمتقدمة. ونحن ممتنون لموظفي مرفق الحيوان نيدكد لرعاية الحيوانات لدينا.
Materials
| Operating microscope | Zeiss | OPMI Pico ENT microscope. Other dissection microscopes would also work. | |
| Micro-forcepts | Fine Science Tools | 11251-10, 11295-51 | #5 and #55 Dumont |
| Micro-scissors | Fine Science Tools | 15002-08 | |
| Nanoliter2000 microinjector | World Precision Instruments | ||
| Heating pad | Mastex | Model 500/600 | |
| 5-0 vicryl sutures | Ethicon | ||
| AAV8-whirlin | Vector Biolabs | ||
| Glass pipette | Sutter Instruments | B100-75-10 | Borosilicate glass |
References
- Chien, W. W., Monzack, E. L., McDougald, D. S., Cunningham, L. L. Gene therapy for sensorineural hearing loss. Ear Hear. 36, 1-7 (2015).
- Askew, C., et al. Tmc gene therapy restores auditory function in deaf mice. Sci Transl Med. 7, 295 (2015).
- Akil, O., et al. Restoration of hearing in the VGLUT3 knockout mouse using virally mediated gene therapy. Neuron. 75, 283-293 (2012).
- Pan, B., et al. Gene therapy restores auditory and vestibular function in a mouse model of Usher syndrome type 1c. Nat Biotechnol. 35, 264-272 (2017).
- Isgrig, K., et al. Gene Therapy Restores Balance and Auditory Functions in a Mouse Model of Usher Syndrome. Mol Ther. 25, 780-791 (2017).
- Lentz, J. J., et al. Rescue of hearing and vestibular function by antisense oligonucleotides in a mouse model of human deafness. Nat Med. 19, 345-350 (2013).
- Shibata, S. B., et al. RNA Interference Prevents Autosomal-Dominant Hearing Loss. Am J Hum Genet. 98, 1101-1113 (2016).
- Van Sluyters, R. C., Obernier, J. A. Guidelines for the care and use of mammals in neuroscience and behavioral research. Contemp Top Lab Anim. 43, 48 (2004).
- Chien, W. W., et al. Gene Therapy Restores Hair Cell Stereocilia Morphology in Inner Ears of Deaf Whirler Mice. Mol Ther. 24, 17-25 (2016).
- Hirose, K., Hartsock, J. J., Johnson, S., Santi, P., Salt, A. N. Systemic lipopolysaccharide compromises the blood-labyrinth barrier and increases entry of serum fluorescein into the perilymph. J Assoc Res Otolaryngol. 15, 707-719 (2014).
- Okada, H., et al. Gene transfer targeting mouse vestibule using adenovirus and adeno-associated virus vectors. Otol Neurotol. 33, 655-659 (2012).
- Suzuki, J., Hashimoto, K., Xiao, R., Vandenberghe, L. H., Liberman, M. C. Cochlear gene therapy with ancestral AAV in adult mice: complete transduction of inner hair cells without cochlear dysfunction. Sci Rep. 7, 45524 (2017).
