Approccio del canale semicircolare posteriore per consegna del Gene dell'orecchio interno in Mouse neonatale
Summary
In questo studio, descriviamo l’approccio del canale semicircolare posteriore come un metodo affidabile per la consegna del gene dell’orecchio interno in topi neonatali. Indichiamo che consegna del gene attraverso il canale semicircolare posteriore è in grado di irrorare l’intero orecchio interno.
Abstract
Terapia genica dell’orecchio interno offre grande promessa come un potenziale trattamento per la perdita dell’udito e vertigini. Uno dei fattori critici del successo della terapia genica dell’orecchio interno è quello di trovare un metodo di consegna che si traduce in efficienza di trasduzione coerente di tipi cellulari mirate, riducendo al minimo la perdita dell’udito. In questo studio, descriviamo l’approccio del canale semicircolare posteriore come un metodo praticabile per la consegna del gene dell’orecchio interno in topi neonatali. Indichiamo che consegna del gene attraverso il canale semicircolare posteriore è in grado di irrorare l’intero orecchio interno. La facile individuazione anatomica del canale semicircolare posteriore, così come manipolazione minima dell’osso temporale richiesto, rendono questo chirurgico approccio un’opzione attraente per consegna del gene dell’orecchio interno.
Introduction
Terapia genica dell’orecchio interno è un settore in rapida evoluzione dell’indagine. È stato applicato in vari modelli animali di combattimento ototossicità, il trauma di rumore e di perdita dell’udito ereditario1. Parecchi studi recenti hanno dimostrato il recupero funzionale dell’udito e funzioni della bilancia in topi mutanti dopo orecchio interno gene terapia consegna2,3,4,5,6, 7. uno dei principali fattori nel determinare il successo della terapia genica dell’orecchio interno è il metodo chirurgico utilizzato per accedere l’orecchio interno. Idealmente, l’approccio chirurgico sarebbe facile da eseguire, i limiti anatomici sarebbe coerente e facile da identificare, e la trasduzione risultante di tipi cellulari mirata sarebbe elevata.
In un recente studio, abbiamo dimostrato che quando la terapia genica virale è stata iniettata attraverso il canale semicircolare posteriore del mouse mutante whirler (un modello di perdita dell’udito e disfunzione vestibolare), trasduzione efficiente di cellule ciliate sensoriali è stato visto nella vestibolare organi, così come la coclea5. L’alta efficienza di trasduzione sensoriale della cellula ciliata ha provocato il miglioramento delle funzioni uditive e vestibolari in questi topi mutanti.
In questo articolo, descriviamo in dettaglio l’approccio del canale semicircolare posteriore per accedere l’orecchio interno neonatale del mouse.
Protocol
Representative Results
Discussion
Diversi approcci chirurgici sono stati descritti per accedere roditore orecchi interni. Cochleostomy e finestra rotonda approcci sono più comunemente utilizzati per accedere alla coclea, mentre il canale semicircolare posteriore e il sacco endolinfatico approcci vengono in genere utilizzati per accedere gli organi vestibolari1. In uno studio recente, abbiamo mostrato quel canale semicircolare posteriore iniezioni di terapia genica virale ha provocate ad alta efficienza di trasduzione delle cellul…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo lavoro è stato sostenuto dal NIDCD divisione di intramurale ricerca /NIH (DC000082-02 al W.W.C.), così come DC000081 al nucleo di imaging avanzata. Siamo grati per il personale della struttura animale NIDCD per la cura per i nostri animali.
Materials
| Operating microscope | Zeiss | OPMI Pico ENT microscope. Other dissection microscopes would also work. | |
| Micro-forcepts | Fine Science Tools | 11251-10, 11295-51 | #5 and #55 Dumont |
| Micro-scissors | Fine Science Tools | 15002-08 | |
| Nanoliter2000 microinjector | World Precision Instruments | ||
| Heating pad | Mastex | Model 500/600 | |
| 5-0 vicryl sutures | Ethicon | ||
| AAV8-whirlin | Vector Biolabs | ||
| Glass pipette | Sutter Instruments | B100-75-10 | Borosilicate glass |
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