Abordagem do Canal Semicircular posterior para a orelha interna Gene entrega no rato Neonatal
Summary
Neste estudo, descrevemos a abordagem de canal semicircular posterior como um método confiável para a entrega de gene do ouvido interno em camundongos neonatais. Mostramos que a entrega do gene através do canal semicircular posterior é capaz de perfundir toda orelha interna.
Abstract
Terapia de gene do ouvido interno uma grande promessa como um potencial tratamento para perda de audição e tontura. Um dos determinantes essenciais do sucesso da terapia de gene do ouvido interno é encontrar um método de entrega que resulta em eficiência de transdução consistente dos tipos de célula alvo, minimizando a perda de audição. Neste estudo, descrevemos a abordagem de canal semicircular posterior como um método viável para a entrega de gene do ouvido interno em camundongos neonatais. Mostramos que a entrega do gene através do canal semicircular posterior é capaz de perfundir toda orelha interna. A fácil identificação anatômica do canal semicircular posterior, bem como, manipulação mínima do osso temporal exigido, fazer neste cirúrgico aproximar-se uma opção atraente para entrega de gene do ouvido interno.
Introduction
Terapia de gene do ouvido interno é um campo de rápido desenvolvimento de investigação. Aplicação em vários modelos animais para combate ototoxicidade, trauma de ruído e de perda de audição hereditária1. Vários estudos recentes têm mostrado recuperação funcional da audição e funções de equilíbrio em camundongos mutantes após ouvido interno gene terapia entrega2,3,4,5,6, 7. um dos principais fatores na determinação do sucesso da terapia do gene de orelha interna é a abordagem cirúrgica utilizada para acessar o ouvido interno. Idealmente, a abordagem cirúrgica seria fácil de executar, os marcos anatômicos seria consistente e fácil de identificar e a transdução resultante de tipos de células alvo seria alta.
Em um estudo recente, mostramos que, quando a terapia do gene viral foi injectada através do canal semicircular posterior do rato mutante whirler (um modelo de perda auditiva e disfunção vestibular), transdução eficiente de células sensoriais do cabelo foi vista nos vestibulares órgãos, assim como a cóclea5. A alta eficiência de transdução sensorial cabelo célula resultou em melhora das funções auditivas e vestibulares nestes ratos mutantes.
Neste artigo, descrevemos em detalhe a abordagem de canal semicircular posterior para acessar o ouvido interno do rato neonatal.
Protocol
Representative Results
Discussion
Várias abordagens cirúrgicas têm sido descritas para acessar roedor ouvido interno. Cochleostomy e janela redonda abordagens são mais comumente usadas para acessar a cóclea, Considerando que o canal semicircular posterior e saco endolinfático abordagens são normalmente usadas para acessar os órgãos vestibulares1. Em um estudo recente, nós mostramos aquele canal semicircular posterior injeções da terapia do gene viral resultaram em alta eficiência de transdução celular cabelo em ambo…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabalho foi financiado por fundos do NIDCD divisão de Intramural Research /NIH (DC000082-02 para W.W.C.), bem como DC000081 para núcleo avançado de imagem. Agradecemos a equipe de instalação animal NIDCD por cuidar de nossos animais.
Materials
| Operating microscope | Zeiss | OPMI Pico ENT microscope. Other dissection microscopes would also work. | |
| Micro-forcepts | Fine Science Tools | 11251-10, 11295-51 | #5 and #55 Dumont |
| Micro-scissors | Fine Science Tools | 15002-08 | |
| Nanoliter2000 microinjector | World Precision Instruments | ||
| Heating pad | Mastex | Model 500/600 | |
| 5-0 vicryl sutures | Ethicon | ||
| AAV8-whirlin | Vector Biolabs | ||
| Glass pipette | Sutter Instruments | B100-75-10 | Borosilicate glass |
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