Задняя полукружных канала подход для доставки генов внутреннего уха у новорожденных мышей
Summary
В этом исследовании мы описываем задняя полукружных канала подход как надежный метод доставки генов внутреннего уха у новорожденных мышей. Мы показывают, что ген доставки через задний полукружных канала возможность perfuse всего внутреннего уха.
Abstract
Внутреннее ухо генной терапии предлагает большие перспективы для потенциального лечения потеря слуха и головокружение. Одним из решающих факторов успеха внутреннего уха генной терапии является найти метод доставки, который приводит к постоянной трансдукции эффективности типов целевых клеток при сведении к минимуму потери слуха. В этом исследовании мы описываем задняя полукружных канала подход как действенного метода доставки генов внутреннего уха у новорожденных мышей. Мы показывают, что ген доставки через задний полукружных канала возможность perfuse всего внутреннего уха. Легко анатомические идентификации задняя полукружных канала, а также минимальная манипуляция височной кости требуется, сделать это хирургический подход привлекательным вариантом для доставки генов внутреннего уха.
Introduction
Внутреннее ухо генная терапия является быстро развивающейся области расследования. Она применялась в различных моделях животных к борьбе с ототоксичность, шум травмы и наследственный слуха потери1. Несколько недавних исследований показали функциональное восстановление слуха и равновесия функций мутантных мышей после внутреннего уха генной терапии доставки2,3,4,5,6, 7. одним из ключевых факторов в определении успеха внутреннего уха генной терапии является хирургический метод, используемый для доступа к внутреннему уху. Идеально хирургический подход будет легко выполнять, анатомические ориентиры будут последовательно и легко идентифицировать, и результирующая трансдукции типов целевых клеток будет высоким.
В недавнем исследовании мы показали, что при вирусных генной терапии было впрыснуто через задний полукружных канала черная мутант мыши (модель потери слуха и вестибулярной дисфункции), эффективный трансдукции Сензорные клетки волос был замечен в вестибулярного органы, а также как и улитки5. Высокая эффективность сенсорные клетки волос трансдукции привело к улучшению слуховые и вестибулярные функции в этих мутантных мышей.
В этой статье мы подробно описать подход задняя полукружных канала для доступа к неонатальной мыши внутреннего уха.
Protocol
Representative Results
Discussion
Для доступа к грызунов внутренний уши были описаны несколько хирургических вмешательств. Cochleostomy и круглое окно подходов наиболее часто используются для доступа к улитки, тогда как задняя полукружных канала и endolymphatic мешок подходы обычно используются для доступа к вестибулярных орган?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Эта работа была поддержана средств из NIDCD Отдела по очной исследования /NIH (DC000082-02 W.W.C.), а также DC000081 в передовых тепловизионных ядро. Мы благодарны за NIDCD животных фонда персонала для заботить для наших животных.
Materials
| Operating microscope | Zeiss | OPMI Pico ENT microscope. Other dissection microscopes would also work. | |
| Micro-forcepts | Fine Science Tools | 11251-10, 11295-51 | #5 and #55 Dumont |
| Micro-scissors | Fine Science Tools | 15002-08 | |
| Nanoliter2000 microinjector | World Precision Instruments | ||
| Heating pad | Mastex | Model 500/600 | |
| 5-0 vicryl sutures | Ethicon | ||
| AAV8-whirlin | Vector Biolabs | ||
| Glass pipette | Sutter Instruments | B100-75-10 | Borosilicate glass |
References
- Chien, W. W., Monzack, E. L., McDougald, D. S., Cunningham, L. L. Gene therapy for sensorineural hearing loss. Ear Hear. 36, 1-7 (2015).
- Askew, C., et al. Tmc gene therapy restores auditory function in deaf mice. Sci Transl Med. 7, 295 (2015).
- Akil, O., et al. Restoration of hearing in the VGLUT3 knockout mouse using virally mediated gene therapy. Neuron. 75, 283-293 (2012).
- Pan, B., et al. Gene therapy restores auditory and vestibular function in a mouse model of Usher syndrome type 1c. Nat Biotechnol. 35, 264-272 (2017).
- Isgrig, K., et al. Gene Therapy Restores Balance and Auditory Functions in a Mouse Model of Usher Syndrome. Mol Ther. 25, 780-791 (2017).
- Lentz, J. J., et al. Rescue of hearing and vestibular function by antisense oligonucleotides in a mouse model of human deafness. Nat Med. 19, 345-350 (2013).
- Shibata, S. B., et al. RNA Interference Prevents Autosomal-Dominant Hearing Loss. Am J Hum Genet. 98, 1101-1113 (2016).
- Van Sluyters, R. C., Obernier, J. A. Guidelines for the care and use of mammals in neuroscience and behavioral research. Contemp Top Lab Anim. 43, 48 (2004).
- Chien, W. W., et al. Gene Therapy Restores Hair Cell Stereocilia Morphology in Inner Ears of Deaf Whirler Mice. Mol Ther. 24, 17-25 (2016).
- Hirose, K., Hartsock, J. J., Johnson, S., Santi, P., Salt, A. N. Systemic lipopolysaccharide compromises the blood-labyrinth barrier and increases entry of serum fluorescein into the perilymph. J Assoc Res Otolaryngol. 15, 707-719 (2014).
- Okada, H., et al. Gene transfer targeting mouse vestibule using adenovirus and adeno-associated virus vectors. Otol Neurotol. 33, 655-659 (2012).
- Suzuki, J., Hashimoto, K., Xiao, R., Vandenberghe, L. H., Liberman, M. C. Cochlear gene therapy with ancestral AAV in adult mice: complete transduction of inner hair cells without cochlear dysfunction. Sci Rep. 7, 45524 (2017).
