后半圆管法在新生小鼠内耳基因传递中的研究
Summary
在本研究中, 我们描述了后半圆管方法作为一种可靠的方法, 为内耳基因分娩的新生小鼠。我们表明, 通过后半规管的基因传递能够灌注整个内耳。
Abstract
内耳基因治疗提供了一个伟大的承诺, 作为一种潜在的治疗听力损失和头晕。内耳基因治疗成功的关键决定因素之一是找到一种分娩方法, 从而使靶细胞类型的传导效率保持在最小, 同时最大限度地减少听力损失。在本研究中, 我们描述了后半规管方法作为一种可行的方法, 为内耳基因分娩的新生小鼠。我们表明, 通过后半规管的基因传递能够灌注整个内耳。简单的解剖鉴定的后半圆管, 以及最低限度的操作所需的颞骨, 使这种手术方法是一个有吸引力的选择内耳基因传递。
Introduction
内耳基因治疗是一个快速发展的研究领域。它已应用于各种动物模型, 以对抗耳毒性, 噪音损伤和遗传性听力损失1。最近的几项研究表明, 在内耳基因治疗后突变小鼠听力和平衡功能的功能恢复2,3,4,5,6,7. 确定内耳基因治疗成功与否的关键因素之一, 是用于进入内耳的手术方法。理想的做法是, 手术方法很容易执行, 解剖标志将是一致的, 易于辨认, 并由此产生的定向细胞类型的转导是很高的。
在最近的一项研究中, 我们表明, 当病毒基因治疗是通过 whirler 突变小鼠的后半规管注射 (一种听觉丧失和前庭功能障碍模型), 在前庭中看到的感觉毛细胞的有效传导器官并且在耳蜗5。感觉毛细胞转导的高效性导致了这些突变小鼠听觉和前庭功能的改善。
在本文中, 我们详细描述了后半圆管的方法, 以获得新生小鼠内耳。
Protocol
Representative Results
Discussion
几种手术方法被描述为进入啮齿动物内耳。Cochleostomy 和圆形窗口的方法是最常用的进入耳蜗, 而后半圆管和淋巴囊方法通常用于访问前庭器官1。在最近的一项研究中, 我们发现, 后半规管注射的病毒基因治疗导致高效率的头发细胞转导的前庭器官和耳蜗5。事实上, 耳蜗毛细胞转导是通过后半圆管注射更高, 当与圆形窗口注射相比, 同一鼠遗传性听力损失和前庭功?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作得到了来自 NIDCD 司内研究/NIH (DC000082-02 到 W.W.C., 以及 DC000081 先进成像核心) 的资金支持。我们感谢 NIDCD 动物设施的工作人员照顾我们的动物。
Materials
| Operating microscope | Zeiss | OPMI Pico ENT microscope. Other dissection microscopes would also work. | |
| Micro-forcepts | Fine Science Tools | 11251-10, 11295-51 | #5 and #55 Dumont |
| Micro-scissors | Fine Science Tools | 15002-08 | |
| Nanoliter2000 microinjector | World Precision Instruments | ||
| Heating pad | Mastex | Model 500/600 | |
| 5-0 vicryl sutures | Ethicon | ||
| AAV8-whirlin | Vector Biolabs | ||
| Glass pipette | Sutter Instruments | B100-75-10 | Borosilicate glass |
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