新生児マウス内耳遺伝子デリバリーの後半規管アプローチ
Summary
この研究では、新生児マウス内耳遺伝子送達のための信頼性の高い方法として後半規管のアプローチについて述べる。後半規管を介して遺伝子デリバリーが全体の内耳を灌流することができることを示します。
Abstract
内耳遺伝子治療は、難聴やめまいの潜在的な治療としての偉大な約束を提供しています。内耳遺伝子療法の成功の重要な要因の 1 つは聴力損失を最小限に抑えながら標的細胞のタイプの一貫性のある伝達効率で起因する配信方法を見つけることです。この研究では、新生児マウス内耳遺伝子送達のための現実的な方法として後半規管のアプローチについて述べる。後半規管を介して遺伝子デリバリーが全体の内耳を灌流することができることを示します。後半規管の簡単な解剖学的同定と同様、必要な側頭骨の最小限の操作、make この手術アプローチ内耳遺伝子送達のための魅力的なオプションです。
Introduction
内耳遺伝子治療の調査の急速に発展途上の分野です。それは戦闘の難聴、騒音外傷、遺伝性難聴の損失1に様々 な動物モデルで適用されています。いくつかの最近の研究の後内耳遺伝子療法配信2,3,4,5,6,変異マウスにおける聴覚と平衡機能の機能回復を示されています。7。 内耳遺伝子治療の成功は、手術アプローチは内耳にアクセスするために使用を決定要因のキーの 1 つ。理想的には、外科的アプローチが実行には簡単だろう、一貫性があり、わかりやすい解剖学的ランドマークになるし、標的細胞の種類の結果の伝達は高いでしょう。
最近の研究で示した舞踏変異マウス (難聴、前庭機能不全のモデル) の後半規管から注入するウイルスの遺伝子療法、感覚毛の細胞の効率的な伝達が、前庭に見られました。器官蝸牛5と同様。感覚毛の細胞の情報伝達の効率はこれらの突然変異体のマウスの聴覚と前庭の機能の改善で起因しました。
この記事で新生児マウス内耳に接近する後半規管で詳しく述べる。
Protocol
Representative Results
Discussion
いくつかの外科的アプローチは、齧歯動物の内耳にアクセスに記載されています。後半規管と内リンパ嚢のアプローチは通常前庭器官1をアクセスに使用されるに対し、Cochleostomy と丸い窓のアプローチは、蝸牛にアクセスするよく使用されます。最近の研究では、ウイルスの遺伝子療法の注射は、前庭器官と蝸牛殻5有毛細胞伝達の高効率の結果、後半規管?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、高度なイメージング コアに、NIDCD 部の学内研究/NIH (W.W.C. へ DC000082-02) だけでなく、DC000081 からの資金によって支えられました。私たちの動物を気遣うため NIDCD 動物施設スタッフに感謝しております。
Materials
| Operating microscope | Zeiss | OPMI Pico ENT microscope. Other dissection microscopes would also work. | |
| Micro-forcepts | Fine Science Tools | 11251-10, 11295-51 | #5 and #55 Dumont |
| Micro-scissors | Fine Science Tools | 15002-08 | |
| Nanoliter2000 microinjector | World Precision Instruments | ||
| Heating pad | Mastex | Model 500/600 | |
| 5-0 vicryl sutures | Ethicon | ||
| AAV8-whirlin | Vector Biolabs | ||
| Glass pipette | Sutter Instruments | B100-75-10 | Borosilicate glass |
References
- Chien, W. W., Monzack, E. L., McDougald, D. S., Cunningham, L. L. Gene therapy for sensorineural hearing loss. Ear Hear. 36, 1-7 (2015).
- Askew, C., et al. Tmc gene therapy restores auditory function in deaf mice. Sci Transl Med. 7, 295 (2015).
- Akil, O., et al. Restoration of hearing in the VGLUT3 knockout mouse using virally mediated gene therapy. Neuron. 75, 283-293 (2012).
- Pan, B., et al. Gene therapy restores auditory and vestibular function in a mouse model of Usher syndrome type 1c. Nat Biotechnol. 35, 264-272 (2017).
- Isgrig, K., et al. Gene Therapy Restores Balance and Auditory Functions in a Mouse Model of Usher Syndrome. Mol Ther. 25, 780-791 (2017).
- Lentz, J. J., et al. Rescue of hearing and vestibular function by antisense oligonucleotides in a mouse model of human deafness. Nat Med. 19, 345-350 (2013).
- Shibata, S. B., et al. RNA Interference Prevents Autosomal-Dominant Hearing Loss. Am J Hum Genet. 98, 1101-1113 (2016).
- Van Sluyters, R. C., Obernier, J. A. Guidelines for the care and use of mammals in neuroscience and behavioral research. Contemp Top Lab Anim. 43, 48 (2004).
- Chien, W. W., et al. Gene Therapy Restores Hair Cell Stereocilia Morphology in Inner Ears of Deaf Whirler Mice. Mol Ther. 24, 17-25 (2016).
- Hirose, K., Hartsock, J. J., Johnson, S., Santi, P., Salt, A. N. Systemic lipopolysaccharide compromises the blood-labyrinth barrier and increases entry of serum fluorescein into the perilymph. J Assoc Res Otolaryngol. 15, 707-719 (2014).
- Okada, H., et al. Gene transfer targeting mouse vestibule using adenovirus and adeno-associated virus vectors. Otol Neurotol. 33, 655-659 (2012).
- Suzuki, J., Hashimoto, K., Xiao, R., Vandenberghe, L. H., Liberman, M. C. Cochlear gene therapy with ancestral AAV in adult mice: complete transduction of inner hair cells without cochlear dysfunction. Sci Rep. 7, 45524 (2017).
