महिला प्रजनन पथ और चूहों में वीर्य द्रवीकरण की माप से पोस्ट संभोग वीर्य का संग्रह
Summary
वीर्य द्रवीकरण के लिए आवश्यक है शुक्राणु को लाभदायक जेल से मुक्ति । यह अध्ययन महिला प्रजनन पथ पोस्ट-सहवास से वीर्य एकत्रित करने के लिए प्रक्रियाओं को प्रदान करता है, और वीर्य द्रवीकरण समय को मापने ।
Abstract
चूहों में, बोल पड़ना वीर्य गर्भाशय में जमा हो जाता है. स्खलन के बाद, वीर्य जेल से संगति-जैसे पानी के लिए, एक प्रक्रिया द्रवीकरण बुलाया बदल जाता है । इस अध्ययन में, हम एक माउस मॉडल में महिला प्रजनन पथ से पोस्ट-बोल-पड़ना वीर्य इकट्ठा करने के लिए कैसे दिखा. सबसे पहले, मद अवस्था में वयस्क मादा चूहे एक पुरुष के पिंजरे में रात भर घर में रहती थीं. अगली सुबह, शयन योनि खोलने में copulatory प्लग की उपस्थिति से पुष्टि की थी । copulatory प्लग के साथ महिला चूहों euthanized थे, और एक प्रजनन मार्ग एक पूरे के रूप में एकत्र किया गया था (योनि, गर्भाशय, oviducts, अंडाशय), एक बंद व्यवस्था सुनिश्चित करने के लिए वीर्य को नियंत्रित. प्रजनन पथ एक १.५ मिलीलीटर microcentrifuge ट्यूब में रखा गया था, और योनि के लिए ट्यूब में वीर्य को रिहा करने के लिए काट दिया गया था । विश्लेषण के लिए अधिकतम वीर्य की मात्रा सुनिश्चित करने के लिए, दांत संदंश को डिंबग्रंथि अंत से योनि अंत निष्कासित शेष वीर्य को गर्भाशय के सींग निचोड़ करने के लिए इस्तेमाल किया गया । इसके बाद पूरे जनन तंत्र को छोड़ दिया गया । वीर्य से युक्त ट्यूब संक्षेप में नीचे की प्रकाता थी. एक 25 μL केशिका पिपेट ट्यूब में १८० ° कोण (ट्यूब दीवार के समानांतर) में रखा गया था । 25 μL लाइन के लिए केशिका ट्यूब को भरने के लिए इस्तेमाल समय की मात्रा दर्ज की गई । एक सिद्ध पुरुष ब्रीडर से वीर्य आमतौर पर एक 25 μL केशिका ट्यूब भरने के लिए लगभग 60-180 एस लेता है । यह वीर्य संग्रह तकनीक भी अन्य बहाव अनुप्रयोगों में ऐसे शुक्राणु इमेजिंग और गतिशीलता विश्लेषण के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है ।
Introduction
मादा प्रजनन पथ ऊपरी और निचले इलाकों में शामिल है । ऊपरी प्रजनन पथ फैलोपियन ट्यूब, गर्भाशय, और endocervix शामिल हैं । लोअर प्रजनन पथ ectocervix और योनि शामिल हैं । मनुष्यों में, बोल पड़ना वीर्य योनि के पूर्वकाल दीवार पर जमा है, ectocervix1के बगल में । चूहों में, तथापि, वीर्य2संभोग के बाद मिनट के भीतर गर्भाशय में बह रहा है ।
वीर्य स्खलन के सेकंड के भीतर जम जाता है कि लाभदायक जेल होता है, जिससे शुक्राणु फंस और मैटीरियल3हो जाता है । द्रवीकरण ने वीर्य को जेल से बदलकर मैटीरियल शुक्राणुओं को रिलीज किया-जैसे कि पानी में संगति करना । शुक्राणु गतिशीलता और स्तनधारी प्रजनन के लिए यह प्रक्रिया जरूरी है । वीर्य द्रवीकरण का ज्ञान अधिकांशतः इन विट्रो अध्ययनों पर आधारित होता है जहाँ वीर्य एक कल्चरल डिश में तरलीकृत हो जाता है. मनुष्यों में, प्रोस्टेट विशिष्ट प्रतिजन या पीएसए के एंजाइमी गतिविधि (भी kallikrein-संबंधित peptidase 3 या KLK3 के रूप में जाना जाता है) द्रवीकरण के hydrolysis के माध्यम से semenogelins के लिए प्रमुख योगदानकर्ता है (जेल बनाने प्रोटीन वीर्य में मौजूद)4 ,5,6. semenogelins का क्षरण शुक्राणु को लाभदायक रक्तकण से मुक्त कर, शुक्राणु गतिशीलता को बढ़ाते हैं । मुक्त शुक्राणु फैलोपियन ट्यूब की ओर तैरने के लिए अंडे खाद । द्रवीकरण (या वीर्य चिपचिपापन) परीक्षण प्रजनन क्लिनिक में वीर्य विश्लेषण के लिए मानक प्रारंभिक प्रदर्शनों में से एक के लिए पुरुष प्रजनन7का आकलन कर रहे हैं ।
हाल ही में प्रकाशित एक लेख से पता चलता है कि प्राथमिक द्रव का विश्लेषण महिला माउस प्रजनन पथ से एकत्र के बाद संभोग द्रवीकरण में एक कमी है कि बाद में प्रजनन दोष8का कारण बन सकता वर्णन किया जा सकता है । दोषपूर्ण द्रवीकरण जैसे वीर्य hyperviscosity में पुरुषों में ऊसर मामलों के 11.8-32.3% योगदान करता है9, सुझाव है कि सामान्य द्रवीकरण स्तनधारी प्रजनन के लिए अपरिहार्य है । हालांकि, अध्ययन और द्रवीकरण दोषों के उपचार विशेष रूप से पुरुष7पर ध्यान केंद्रित किया है । संभावना है कि महिला प्रजनन पथ वीर्य द्रवीकरण में एक भूमिका निभाता है पता नहीं लगाया गया है । इसलिए, वीर्य संग्रह और मापने द्रवीकरण समय के लिए तरीकों शोधकर्ताओं एक उपंयास नैदानिक उपकरण के लिए निर्धारित है कि क्या द्रवीकरण ब्याज की मॉडल जीव में बांझपन के कारणों में से एक हो सकता है प्रदान करेगा ।
Protocol
Representative Results
Discussion
माउस uteri से वीर्य का संग्रह पूर्व के रूप में वीर्य और मादा प्रजनन पथ से स्राव के बीच शारीरिक बातचीत वर्णन कर सकते हैं के रूप में इन विट्रो में अधिक से अधिक लाभ प्रदान कर सकते हैं। इस अध्ययन में प्रस?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
यह काम कॉलेज ऑफ पशु चिकित्सा (WSU) स्टार्ट-अप फंड को WW करने के लिए सपोर्ट करता है । लेखक इस पांडुलिपि के महत्वपूर्ण पढ़ने के लिए सिएरा ऑलसेन (WSU) धंयवाद ।
Materials
| Toothpick | Diamond | 750-Flat | Autoclaved sterile, use blunted toothpick. Do not use point-ended |
| Dissecting scissors | Fisher | 08-940 | |
| Spring scissors | Roboz | RS-5600 | |
| Fine forceps | Roboz | RS-5045 | |
| 25-μL glass capillary tube | VWR | 53432-761 | |
| Leibovitz’s L-15 media | Life Technologies | 11415064 | Supplement with 1% FBS |
| Fetal bovine serum (FBS) | Gemini Bio-Products | 100-106 | |
| 1.5-mL microcentrifuge tube | Axygen | MCT-150-C | |
| 2-mL microcentrifuge tube | Axygen | MCT-200-A | |
| Digital dry block heater | VWR | 13259-052 | For warming the microcentrifuge tube prior to semen collection |
| Minicentrifuge | Corning | LSE 6765 | |
| 35-mm culture dish | VWR | 10861-656 | |
| 15-mL polypropylene centrifuge tube | VWR | 10025-686 | |
| Waterbath | Precision | TSGP05 | |
| Heated stage stereomicroscope | Leica Microsystems | MZ10F | To keep the tissue warm prior to semen collection |
| Brightfield microscope | Leica Microsystems | DMi8 | Optional. For video imaging of the sperm motility |
| Camera | Leica Microsystems | DMC2900 | Optional. For video imaging of the sperm motility |
| Glass slides | Fisher | 12-552-3 | Optional. For video imaging of the sperm motility |
| Coverslip | VWR | 48393-059 | Optional. For video imaging of the sperm motility |
| Bleach | Dilute in dH2O to 10% concentration |
References
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