ポスト交配精液女性の生殖器官とマウスの精液の液状化測定からのコレクション
Summary
精液液状精液のゲルから解放される精子に必要です。この研究は、女性の生殖器官の後膣から精液を収集し、精液液状化時間を測定するための手順を提供します。
Abstract
マウス子宮内射精精液を堆積します。射精後精液がゲル状から一貫性を変更水、プロセスという液状化。本研究ではマウス モデルにおける女性の生殖管から射精後の精液を収集する方法を紹介します。発情期の雌マウスを最初、大人は一晩男性の檻の中で収容されました。次の朝、交尾は、膣の開口部にみられる交尾栓の存在によって確認されました。交尾のプラグとメスのマウスを安楽死させ、(膣、子宮、卵管、卵巣)、全体として各生殖器を集めた精液を格納するクローズド システムを確保します。生殖器官は 1.5 mL 遠心チューブに置かれた、膣管に精液を解放する切断されました。分析のための最大の精液量を確保するため、歯の鉗子を用いた膣に終わり残り精液を追放する卵巣端から子宮角を圧迫します。全体の生殖器は、破棄されます。精液を含むチューブは簡単にスピンダウンだった。25 μ L キャピラリー ピペットは、180 ° の角度 (管壁に平行) で管に置かれました。25 μ L ラインにキャピラリー チューブを埋めるために使用時間数を記録しました。実績のある男性ブリーダーから精液は、通常 25 μ L キャピラリー チューブに合わせて約 60-180 秒をかかります。この精液コレクション手法は、精子のイメージングと運動解析など他の下流のアプリケーションで使用できます。
Introduction
女性の生殖器官は、上部と下部の管で構成されます。上部の生殖器では、卵管、子宮、コルポを含まれています。下部生殖管には、子宮頸膣部と膣が含まれています。ヒトでは、射精された精液は膣、子宮頸膣部1に隣接しての前方の壁に堆積されています。ただし、マウスでは、精液が子宮に流さ交配2分以内。
精液には、はめられる精子を引き起こしている射精の秒以内に固化し、3を固定化ゲル種子にはが含まれています。液状化は、ゲル状から水様の一貫性に精液を変更する、固定化した精子を解放します。このプロセスは、精子の運動性および哺乳動物の生殖に不可欠です。精液液状化現象の知識ほとんど、精液になる培養皿で液状化したところの in vitro研究に基づいています。ヒトでは、前立腺特異抗原 PSA (として知られているカリクレイン関連ペプチダーゼ 3 または KLK3) の酵素活性は semenogelins (ゲル化蛋白質精液に存在)4 の加水分解による液状化の主な要因、5,6。Semenogelins の劣化精子の移動性を高める、精液 coagulum から精子を解放します。精子、卵を受精させる卵管に向かって泳ぐを解放しました。液状化 (または精液の粘度) テストは男性の豊饒7を評価するために不妊治療クリニックに精液の分析の標準的な初期上映の一つ。
最近発行された記事は、不妊欠陥8を引き起こす可能性がその後液状化の欠乏を説明するために雌マウスの生殖管の後交配から収集された精嚢液の分析が使えることを示しています。欠陥のある液状精液過粘稠度などは、不妊症の男性で9、通常の液状化は哺乳類の生殖に不可欠なないことを示唆しての 11.8 32.3% に貢献します。ただし、研究と液状化欠陥の治療は男性7排他的に焦点を当てています。女性の生殖器官が精液液状化で役割を果たしている可能性は検討されていません。したがって、精液採取と液化反応時間測定法、液状化が関心のモデル有機体の不妊の原因の一つかもしれないかどうかを決定するための新しい診断ツール研究者を提供します。
Protocol
Representative Results
Discussion
前者は、精液と.女性の生殖器官から分泌の生理学的な相互作用を説明することが、精液分析培養上の利点を提供できるマウス子宮から精液を収集本論文で示した技術は、精液性状と同様に精子の生存率と理想的な生理的条件での運動性を決定する研究者を許可します。また、子宮から精液を使用して実行できる各種の下流解析があります、たとえば、精子は子宮と精子を入力実…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、WW に獣医の大学 (WSU) スタートアップ資金によってサポートされます。著者は、この原稿の批判的読解のシエラ ・ オルセン (WSU) をありがとうございます。
Materials
| Toothpick | Diamond | 750-Flat | Autoclaved sterile, use blunted toothpick. Do not use point-ended |
| Dissecting scissors | Fisher | 08-940 | |
| Spring scissors | Roboz | RS-5600 | |
| Fine forceps | Roboz | RS-5045 | |
| 25-μL glass capillary tube | VWR | 53432-761 | |
| Leibovitz’s L-15 media | Life Technologies | 11415064 | Supplement with 1% FBS |
| Fetal bovine serum (FBS) | Gemini Bio-Products | 100-106 | |
| 1.5-mL microcentrifuge tube | Axygen | MCT-150-C | |
| 2-mL microcentrifuge tube | Axygen | MCT-200-A | |
| Digital dry block heater | VWR | 13259-052 | For warming the microcentrifuge tube prior to semen collection |
| Minicentrifuge | Corning | LSE 6765 | |
| 35-mm culture dish | VWR | 10861-656 | |
| 15-mL polypropylene centrifuge tube | VWR | 10025-686 | |
| Waterbath | Precision | TSGP05 | |
| Heated stage stereomicroscope | Leica Microsystems | MZ10F | To keep the tissue warm prior to semen collection |
| Brightfield microscope | Leica Microsystems | DMi8 | Optional. For video imaging of the sperm motility |
| Camera | Leica Microsystems | DMC2900 | Optional. For video imaging of the sperm motility |
| Glass slides | Fisher | 12-552-3 | Optional. For video imaging of the sperm motility |
| Coverslip | VWR | 48393-059 | Optional. For video imaging of the sperm motility |
| Bleach | Dilute in dH2O to 10% concentration |
References
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