Lipopolysaccharide-इलाज माउस जिगर में प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के दौरान ल्यूकोसाइट्स के दो-फोटॉन Intravital इमेजिंग
Summary
हम ंयूनतम आक्रमण के साथ जीना चूहों जिगर की दो फोटॉन इमेजिंग के लिए एक उपंयास सर्जिकल प्रोटोकॉल की स्थापना की । इस तकनीक के साथ, हम lipopolysaccharide प्रेरित endotoxemia के दौरान जिगर की विस्तृत संरचना की पहचान की । हमें आशा है कि इस विधि को यकृत ल्युकोसैट प्रवास के लिए विभिंन एजेंट उपचार की प्रभावशीलता का निर्धारण करने के लिए उपयोग किया जा सकता है ।
Abstract
पूति गंभीर संक्रमण का एक प्रकार है कि अंग विफलता और ऊतक नुकसान का कारण बन सकता है । यद्यपि पूति से संबद्ध मृत्यु दर और रुग्णता की दरें अत्यंत अधिक हैं, पर वास्तविक समय में विस्तार से कोई प्रत्यक्ष उपचार या अंग संबंधी तंत्र की जांच नहीं की गई है. जिगर महत्वपूर्ण अंग है कि मानव शरीर में विषाक्त पदार्थों और संक्रमण का प्रबंधन है । इस के साथ साथ, हम endotoxemia के प्रेरण के बाद माउस जिगर की intravital इमेजिंग प्रदर्शन करने के लिए इस तरह के न्यूट्रोफिल और जिगर संपुटी मैक्रोफेज (LCMs) के रूप में प्रतिरक्षा कोशिकाओं के गतिशीलता को ट्रैक करने के उद्देश्य से । तदनुसार, हम ंयूनतम इनवेसिव सर्जरी के साथ जिगर के प्रदर्शन के लिए एक उपंयास सर्जिकल विधि बनाया । चूहों lipopolysaccharide (एलपीएस), एक आम endotoxin के साथ intraperitoneally इंजेक्शन थे । प्रदर्शन और माउस जिगर के intravital इमेजिंग के लिए हमारे उपंयास सर्जिकल दृष्टिकोण का प्रयोग, हमने पाया है कि एलपीएस में न्युट्रोफिल भर्ती-इलाज LysM-ग्रीन फ्लोरोसेंट प्रोटीन (GFP) माउस जिगर के साथ तुलना में बढ़ गया था कि फॉस्फेट में बफर खारा-इलाज जिगर । एलपीएस ट्रीटमेंट के बाद न्यूट्रोफिल की संख्या समय के साथ काफी बढ़ गई । इसके अतिरिक्त, CX3Cr1-GFP चूहों का उपयोग कर, हम सफलतापूर्वक LCMs नामक जिगर निवासी मैक्रोफेज visualized. इसलिए, vivo मेंप्रतिरक्षा गतिशीलता को नियंत्रित करने के लिए नए एजेंट की प्रभावकारिता की जांच करने के लिए, गतिशीलता और जिगर में न्यूट्रोफिल और LCMs की आकृति विज्ञान का निर्धारण हमें अंग विफलता और ऊतक क्षति की वजह से उपचारात्मक प्रभाव की पहचान करने के लिए अनुमति दे सकता है पूति में ल्यूकोसाइट्स सक्रियण ।
Introduction
जिगर स्तनधारियों में प्रमुख चयापचय अंग है; यह ऊर्जा, हार्मोन के लिए एक नियंत्रण टॉवर के रूप में कार्य करता है, और detoxification1। इसके महत्व के कारण, शोधकर्ताओं ने कई विट्रो में आयोजित किया है और vivo प्रयोगों में सूजन के दौरान जिगर में परिवर्तन स्पष्ट. Intravital माइक्रोस्कोपी जिगर से लाइव छवियों को पकड़ने के लिए इस्तेमाल किया गया है2 . वास्तव में, विभिंन यकृत इमेजिंग तरीकों2,3,4,5,6शुरू किया गया है । हालांकि, आदेश में एक और अधिक सरल शल्य चिकित्सा दृष्टिकोण विकसित करने और लक्ष्य अंग और प्रतिरक्षा कोशिकाओं के स्थिरीकरण प्राप्त करने के लिए, हम एक सरल प्रोटोकॉल है कि शोधकर्ताओं गाइड intravital इमेजिंग के लिए अपने प्रयास को कम करने के लिए कर सकते है डिजाइन किए हैं ।
इस अध्ययन में, हम एक स्थिर और उपंयास इमेजिंग चैंबर और शल्य चिकित्सा तकनीक है कि खून बह रहा है और संभव संक्रमण को कम करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता शुरू की । हमने पुष्टि की कि लिवर 2 से ज्यादा एच के लिए बरकरार रहे । इस विधि के साथ, हम सफलतापूर्वक सेप्टिक हालत के तहत LCMs7 और न्यूट्रोफिल के morphologies की पहचान की । इस विधि के बाद से इस तरह कांप और शल्य प्रक्रिया के दौरान अप्रत्याशित सूजन के रूप में शारीरिक और जैविक संस्थापित कारकों को कम करता है, हम आशा करते हैं कि इस विधि के जवाब में जिगर में प्रतिरक्षा कोशिकाओं की तीव्र प्रतिक्रियाओं का पालन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता एलपीएस की तरह रिएजेंट ।
Protocol
Representative Results
Discussion
जिगर सक्रिय रूप से कई समूहों द्वारा अध्ययन किया गया है3,10, अपने कार्य के महत्व के कारण. उदाहरण के लिए, Heymann एट अल. agarose का उपयोग कर एक नाजुक विधि का सुझाव दिया । हालांकि इस विधि को अत्यधिक ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
कोरिया सरकार (MSIP; ग्रांट no. 2016R1A2B4008199 टू वाइ-एम) द्वारा वित्त पोषित नेशनल रिसर्च फाउंडेशन ऑफ कोरिया (एनआरएफ) से अनुदान द्वारा इस अध्ययन का समर्थन किया गया था । एच.), और स्वास्थ्य एवं कल्याण मंत्रालय, कोरिया गणराज्य (अनुदान संख्या: HI14C1324) ।
Materials
| Custom designed chamber | Live Cell Instruments | Custom-designed size | |
| Metal cover slide | Live Cell Instruments | Custom-designed size | |
| Cover glass | Electron Microscopy Sciences | #72204-03 | |
| Sylgard 184 Silicone elastomer kit | Dow Corning | ||
| Erlenmeyer flask | DURAN | 21 216 36 | |
| Cell culture plate (Flat type) | HYUNDAI Micro Co. | H31006 | |
| Desiccator | ADARSH | 55204 | |
| High Q BOND SE 5 mL | BJM LAB | To make semi-permanent dam | |
| Flexible Silicone Rubber Heaters | Omega | SRFR/SRFG SERIES, M1250/0800 | |
| DC power supply | Toyotech | DP30-03A | |
| Phosphate-buffered saline | Home-made | ||
| Lipopolysaccharides (LPS) from Salmonella enteria serotype enteritidis | Sigma-Aldrich | L6011 | |
| Texas Red Dextran | Thermo Fisher Scientific | D1830 | |
| 15 mL High-clarity polypropylene conical tube |
FALCON | 14-959-49B | |
| 0.45 μm filter (Minisart Syringe Filter) | Sartorius | 16555k | |
| 1.5ml Micro Tube, Amber | Axygen | MCT-150-X | For light-blocking |
| 1 mL syringe | Korea Vaccine | KV-S01 | |
| 3 mL syringe | Korea Vaccine | KV-S03 | |
| 10 mL syringe | Korea Vaccine | KV-S10 | |
| 0.3 mL insulin syringe | Becton Dickinson | 324900 | |
| Hair removal cream 100 mL | Body natur | ||
| Cotton swab | ABDI | ||
| Zoletil 50 5 mL | Virbac | ||
| Rompun 10 mL | Bayer | ||
| Heating plate | Live Cell Instruments | PH-S-10 | Custom-designed size |
| DC controller | Live Cell Instruments | CU-301 | |
| Microdessection Scissors | Harvard Apparatus | 72-5418 | |
| Scissors | Roboz | RS-5882 | |
| Forceps | Roboz | RS-5137 | |
| Vet bond | 3M | 1469SB | |
| ZEN software (Black Edition) | Carl Zeiss | Program for LSM 7 MP | |
| LSM 7 MP | Carl Zeiss | ||
| Volocity | PerkinElmer | Analysis program |
References
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