Hier präsentieren wir Ihnen ein detailliertes Protokoll für Homo- und Heterografts zwischen Wassermelone und Flaschenkürbis, zusätzlich zu den Methoden der Gewebe Probenahme, Datengenerierung und Datenanalyse, zur Untersuchung von Kälte auf eine geschlechtergerechte MicroRNAs effizient machen.
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Methodenartikel
Generierung von Homo- und Heterografts zwischen Wassermelone und Flaschenkürbis for the Study of Kälte eine geschlechtergerechte MicroRNAs
* These authors contributed equally
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Micro-RNAs (MiRNAs) sind endogen kleine nicht-kodierende RNAs von ca. 20-24 nt, eine wichtige Rolle in der Entwicklung und Anpassung spielen bekannt. Gibt es eine Anhäufung Beweise dafür, dass die Ausdrücke für bestimmte MiRNAs geändert werden, wenn aufpfropfen, eine landwirtschaftliche Praxis häufig von den Landwirten verwendet, um Ernte Toleranz gegenüber biotischen und abiotischen Stress zu verbessern. Flaschenkürbis ist ein von Natur aus klimaresistenten Ernte im Vergleich zu vielen anderen großen Kürbisgewächse, einschließlich der Wassermelone, wodurch es eines der am weitesten verbreitete Wurzelstöcke für Letzteres. Die jüngste Weiterentwicklung von Hochdurchsatz-Sequenzierung Technologien hat große Chancen, kalte reagierende MiRNAs und ihre Beiträge zum Heterograft Vorteile zu untersuchen; geeignete experimentelle Verfahren sind jedoch Voraussetzung für diesen Zweck. Hier präsentieren wir Ihnen ein detailliertes Protokoll zur effizient Erzeugung von Homo- und Heterografts zwischen der Kälte-anfälligen Wassermelone und die Kälte-toleranten Flaschenkürbis, neben Gewebe Probenahmeverfahren, Datengenerierung und Datenanalyse. Die vorgestellten Methoden eignen sich auch für andere Pflanze-Pfropfen Systeme, MiRNA Vorschriften unter verschiedenen Umwelteinflüsse wie Hitze, Trockenheit und Salzgehalt zu befragen.
Einleitung
Pfropfung wurde lange als eine landwirtschaftliche Technik eingesetzt, um pflanzliche Erzeugung und Toleranz gegenüber biotischen und abiotischen Stress1,2,3zu verbessern. In Heterografting Systemen können Elite Wurzelstöcke Wasser und Nährstoffe Aufnahme von Pflanzen erhöhen, verstärken Resistenz gegen pathogene Boden und Begrenzung die negativen Auswirkungen der Metall-Toxizität4,5, die die Transplantate eine erweiterte verleihen kann Wachstum, Vitalität und erhöhte Toleranz gegenüber Umweltbelastungen. In vielen Fä....
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Protokoll
1. Samen Sie Sterilisation und Keimung
- Einweichen Sie Oberfläche Sterilisation der Flaschenkürbis Samen in einen 500-mL-Becherglas gefüllt mit Wasser bei 58 ° C mit gelegentlichen rühren, bis die Wassertemperatur auf 40 ° C sinkt.
- Unterdessen setzen 3 kg der Torfboden in einer Nylontasche und sterilisieren, Autoklaven es bei 120 ° C/0.5 MPa für 20 Minuten.
- Halten Sie Einweichen der Flaschenkürbis Samen für 4-5 Std. mehr mit nicht gerührt.
- Sobald das Wasser Zimmertemperatur erreicht, spülen Sie die Samen 2 x - 3 X mit destilliertem Wasser ab.
- Das überschüssige Wasser abgießen und die Samen sprießen in Gazebeutel bei 28 °....
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Ergebnisse
Abbildung 2: Phänotypen von verschiedenen Transplantate bei Raumtemperatur und kalten betonte Bedingungen. (ein) zeigt dieses Panel Homo- und heterografted Sämlinge bei Raumtemperatur als Kontrolle. (b) zeigt dieses Panel Homo- und heterografted Sämlinge nach 48 h der Kältebehandlung.
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Diskussion
In diesem Protokoll beschrieben wir eine hoch effiziente und reproduzierbare Methode um Homo- und Heterografts zwischen Wassermelone und Flaschenkürbis ausführlich. Diese Methode erfordert keine spezielle Ausrüstung ist sehr einfach zu bedienen und hat in der Regel eine sehr hohe Überlebensrate der Pfropfung. Die Methode kann auch verwendet werden, zu Transplantationen für andere Kürbisgewächse, wie z. B. zwischen Wassermelone, Gurke und Kürbis.
Es ist erwähnenswert, dass die relative Größe (A.......
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Offenlegungen
Die Autoren haben nichts preisgeben. Die kleine RNA Sequenzierungsdaten lagert sich in der GenBank unter Zbl-Nummer SRP136842.
Danksagungen
Diese Arbeit wurde von der National Natural Science Foundation of China (31772191), das Forschungsprojekt für öffentliche Interesse in der Provinz Zhejiang (2017 C 32027), die Schlüssel Science Projekt der Pflanzenzüchtung in Zhejiang (2016 C 02051) und das nationale Programm für unterstützt. die Unterstützung von erstklassigen Young Professionals (zu P.X).
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| TRIzol Reagenz | Invitrogen | 15596026 | |
| RNA-frei DNase I | Takara | D2270A | |
| Truseq Kit zur Vorbereitung kleiner RNA-Proben | Illumina | RS-200-0012 | |
| 2100 Bionalyser | Agilent | 5067 | |
| DNA-Polymerase | Thermo Fisher Scientific | F530S | |
| UEA sRNA-Werkbank 2,4-Pflanzen-Version (Software) | NA | NA | http://srna-workbench.cmp.uea.ac.uk/ |
| Rfam 11.0 Datenbank ( website) | NA | NA | http://rfam.janelia.org |
| miRBase 22.0 ( website) | NA | NA | http://www.mirbase.org/ |
| MIREAP(software) | NA | NA | https://sourceforge.net/projects/mireap/ |
| TargetFinder ( software) | NA | NA | http://targetfinder.org/ |
Referenzen
- Schwarz, D., Rouphael, Y., Colla, G., Venema, J. H. Grafting as a tool to improve tolerance of vegetables to abiotic stresses: Thermal stress, water stress and organic pollutants. Scientia Horticulturae. 127, 162-171 (2010).
- Li, Y., et al. Mechanisms of tolerance differences in cucumber seedlings grafted on rootstocks with different tolerance to low temperature and weak light stresses. Turkish Journal of Botany. 39 (4), 606-614 (2015).<....
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Nachdrucke und Genehmigungen
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