לכימות ליקוציט היציאה דרך כלי הלימפה מ מאתר עור וגידולים
Summary
. הנה, נדגים את שיטות ויוו כימות של ליקוציט יציאה מן תמימה, מודלק, והעור מאתר ממאיר. אנו לבצע השוואת עפות בשני דגמים: transdermal FITC יישום, בחיי עיר photoconversion. יתר על כן, נדגים את התועלת של photoconversion עבור מעקב אחר ליקוציט היציאה של גידולים עורית.
Abstract
ליקוציט יציאה מן רקמות היקפיים ניקוז הלימפה אינה קריטית עבור מעקב המערכת החיסונית, חניכה, אך תורם גם הרזולוציה של רקמות היקפיים תגובות. בעוד מגוון שיטות משמשים לכמת ליקוציט יציאה מן הרקמות שאינם הלימפה, ציוד היקפי, המנגנונים תאית ומולקולרית המפקחים על היציאה תלויי-ההקשר נשארים ממעטים להבין. כאן, אנו מתארים את השימוש בבאתרו photoconversion לניתוח כמותי של ליקוציט יציאה מן העור מאתר וגידולים. Photoconversion מאפשר ישיר תיוג וחריגה של תושב תוך עורית. למרות חשיפה העור אור סגול גורם מקומי תגובות דלקתיות מאופיין ליקוציט ולחום, leakiness בכלי הדם, תוך השוואה ראש בראש עם יישום transdermal של קליעים נותבים פלורסנט, photoconversion במיוחד מתויג אוכלוסיות נודדות תא דנדריטי וזמין בו-זמנית כימות של יציאה מיאלואידית ו הלימפה מן microenvironments עורית וגידולים. המנגנון של היציאה ליקוציט רכיב חסר בהבנה שלנו של intratumoral ליקוציט מורכבות וובכך היישום של הכלים המתוארים במסמך זה יספקו תובנה ייחודית הדינמיקה של הגידול מערכת החיסון microenvironments שני בבית יציב המדינה, בתגובה לטיפול.
Introduction
תגובות חיסוניות רקמות היקפיים הם בצורת לא רק על ידי גיוס ליקוציט לאתרים של דלקת, אלא גם על ידי מנגנונים המסדירים השמירה הבאים שלהם. לפיכך, חיסון הגנתי מוכתב על ידי מנגנונים תאית ומולקולרית מצטברים הקובעים אם ליקוציט מזין, נשאר בתוך, או ליתר דיוק נודד מחוץ רקמות היקפיים דרך כלי הלימפה. חשוב, נטיה של לויקוציטים ליציאה רקמות דרך כלי הלימפה (הנקרא היציאה) מקושרת לפונקציות מיוחדות שלהן. תאים דנדריטים (DC) רוכשים התנהגות נודדות בתגובה אותות ההבשלה המוביל אנטיגן תחבורה המצגת ניקוז הלימפה (dLN), תהליך זה הוא הכרחי עבור חסינות מסתגלת1. ניקוי התאים מיאלואידית, כגון מקרופאגים, נויטרופילים, משמשים כדי לנקות פסולת אפופטוטיים להיפגע דרך phagocytosis. במהלך זיהום חיידקי, נויטרופילים רקמה זו אש מרגמות מדויקת בסופו של דבר עוברים אפופטוזיס dLNs2 , במודל של DSS-induced קוליטיס, נתונים תומך את ההשערה כי היציאה מקרופאג הכרחי לפתרון דלקת מקומית3. אם היציאה נויטרופילים, מקרופאג מתרחשת בכל ההקשרים דלקתיות, לעומת זאת, אינו ידוע. ראיות של לימפוציטים-T יציאה מן מצב יציב4,5,6,7, נגוע8ו מודלק4,9,10, 11,12 הפריפריה, שאינם הלימפה ברקמות מציין כי בתאי T recirculate באופן פעיל, על פי האותות רקמות מבוסס כונן היציאה הזאת להישאר ממעטים להבין. מספר מחקרים זיהו אותות הדרושים להעברת כיוונית לעבר ניקוז לימפטי נימים ובעקבות זו אש מרגמות מדויקת כולל ליגנד כימוקין (מוטיב C-C) 21 (CCL21) והקולטן שלו CCR74,11, 13, ליגנד כימוקין (מוטיב C-X-C) 12 (CXCL12) שלו קולטן CXCR42,14, ו sphingosine-1-פוספט (S1P)10,15,16. מנגנונים אלה אינם פעילים בכל ההקשרים, אולם, בין אם הם לקבוע את היציאה של כל סוגי תאים נותרת שאלה פתוחה. חשוב, עוד תובנה המנגנונים המפקחים על היציאה והקשר שלה פונקציונלי במחלה דורש שיטות כמותיות ויוו של ניתוח.
מספר שיטות השתמשו כדי לכמת את היציאה מספר מודלים ויוו כולל תעלות ישיר של כלי הלימפה, העברת המאמצת של ex-vivo שכותרתו לויקוציטים, יישום transdermal של קליעים נותבים פלורסנט, זריקה של חלקיקים שכותרתו, ויוו photoconversion17,18. תעלות ישיר של כלי הלימפה מביא העכבר הוא מוגבל בחיות קטנות על-ידי אמצעי האחסון של נוזלים הניתנים לאיסוף וקשה. לפיכך, תעלות במידה רבה בוצעו חיות גדולות (למשל., כבשים) איפה מעשי כזה מניפולציות כירורגי. מחקרים אלה מספקים עדות ישירה נוכחות של תאי הלימפה והן מיאלואידית הלימפה10,19,20. יתר על כן, מודלים ovine חושפים כי דלקת אקוטי וכרוני מוגבר לימפוציט נוכחות לימפה בגיל10,כמעט 100-fold21.
העברת המאמצת של לימפוציטים שכותרתו, גנטי חשוב חשף כי CCR7 נדרש עבור היציאה של CD4+ T תאים מן העור מודלק בחריפות5,11, ואילו רעלני של לימפוציטים עם מולקולת קטן S1P קולטן אגוניסט, FTY720, מעכב באופן חלקי בלבד שלהם היציאה10. מעניין, היציאה של לימפוציטים שהועברו מן העור דלקתי כרוני הוא תלוי-CCR710, אך עשויים לדרוש חלקית CXCR49. העברת המאמצת ניסויים, עם זאת, לספק מספרים שאינם-פיזיולוגיים של לשעבר vivo מופעל ומתויגים לימפוציטים לתוך רקמות באמצעות הזרקה, אשר כמושפע ביו-מכני של רקמות, לחצים מוגברות של נוזל בין-תאי זה פתח נימי הלימפה הראשונית, לשנות את המאפיינים שלהם תחבורה22. כיישום transdermal חלופית, של fluorescein isothiocyanate (FITC), נוכחות או היעדרות מגירויים עורי (למשל., dibutyl פתלאט, DBP) או זיהום23,24 מאפשר המעקב אחר התאים phagocytic מעקב ולצבור להגר dLNs. באופן דומה, גידולים fluorescently שכותרתו לספק אמצעי כדי לעקוב אחר תאים phagocytic שכילו הגידול גשמי25. שיטות אלה סיפקו חשוב תובנה המנגנונים למשול DC היציאה13,14,17,26,27 , אך אינם מסוגלים לעקוב אחר שאינו-phagocytic יכול להיות מסובך לימפוציטים ופרשנות, ניקוז לימפטי חינם של FITC מסיסים ובכך תיוג עופות נודדים, DCs תושב LN.
לחלופין, מיקרוסקופ intravital הוא כלי רב עוצמה המאפשר מעקב ויוו לאוכלוסיות ליקוציט רלוונטי מבחינה פיזיולוגית בזמן אמת28,29. משתמשים בה בשילוב עם הכתב עכברים, נוגדן מבוססי ויוו immunofluorescent תיוג, intravital מיקרוסקופ חשפה את המתחם המרחבי וסלולרי הדינמיקה הטמפורלי של החיסון ההעברה אינטרסטיציאליות, סחר בבני אדם, לרבות30 , גלגול על פני אנדותל הלימפה, המעבר בתוך לומן הלימפה, ואת ההעברה על בעוד ערך28,31. אימוץ רחב של טכניקות הדמיה intravital מוגבל על ידי הוצאות, המומחיות הנדרשת עבור ערכת, מוגבל תפוקה לכימות תנועת סוגי תאים מרובים. עדיין, צימוד שיטות כמותיות לנתח המלאכותיות רקמות עם הדמיה intravital יספקו תובנה מכניסטית נוספים וחשובים לגבי המנגנונים של תנועתיות והעברה לקראת ובתוך נימי הלימפה 18 , 31 , 32.
כתוצאה מכך, אין ויוו photoconversion התפתחה שיטה המאפשרת בחיי עיר תיוג, עצמאית של הפעילות phagocytic, וגם עבור כימות של היציאה ליקוציט פיזיולוגיים (בשילוב עם cytometry זרימה) ב- היעדרות או נוכחות של אתגר. קאךה-Tg עכברים מביעים צורונים חלבון מבודד אלמוג זה מוצגים ירוק קרינה פלואורסצנטית (קאךה ירוק) עד נחשפים באור סגול, לאחר מכן הוא בלתי הפיך ממיר פלואורסצנטי אדום (קאךה אדום)33. ניתן לעקוב Photoconverted תאים כמו זו הם אש מרגמות מדויקת מאתרי רקמות היקפיים להצטבר dLNs. זה ו אחרים דומים photoconvertible העכבר מודלים34,35 חשפו חשוב ביולוגיה כולל יציאה המכונן של תאי T רגולטוריים מן העור36, תלויי-CXCR4 תא B יציאה מן כתמים של פייה37 , גיוס בתאי T הזיכרון תושב פפטיד לאתגר מחדש38, ועל יציאה רחבה ליקוציט מן הגידול microenvironments39. במסמך זה, אנו מבצעים השוואה ראש בראש של photoconversion עם יישום FITC transdermal בהקשר של עורית דלקת ולדלקת כדי לאפשר השוואה ישירה של נתונים קיימים עם השיטה photoconvertible. יתר על כן, אנו מדגימים photoconversion גידולים מושתל, לתאר את יעילות ההמרה ויציאה סלקטיבי של גידול microenvironments. ככזה, אנו טוענים עוד יישום של שיטות אלה המצריך התירי הביולוגיה קריטי של ליקוציט יציאה מן גידולים, אשר יהיו השלכות משמעותיות על פענוח intratumoral ליקוציט המורכבות, אנטי הגידול חסינות, ו תגובה לטיפול.
Protocol
Representative Results
Discussion
למרות היציאה ליקוציט רקמות היקפיים, שאינם הלימפה הוא קריטי עבור החניכה, ברזולוציה של תגובות חיסוניות, המנגנונים המולקולריים המפקחים על היציאה הם הבינו כהלכה. פער זה הידע נובע במידה רבה מוכן הזמינות של כלים כימות בתוך vivo. כאן, אנו מתארים את השימוש photoconvertible עכברים (קאךה-Tg) לכמת ליקוציט א…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
המחברים רוצה להודות ד ר מרקוס Bosenberg למתן YUMM 1.1, YUMM 1.7 מלנומה מאתר קווים, ד ר דבורה ג’יי Fowell למתן B6. עכברים 15Utr cg-Tg(CAG-tdKaede) מסכים עם RIKEN BRC דרך ביו-משאב לאומי של MEXT, יפן.
Materials
| Collagenase D | Roche | 11088866001 | |
| DNase | Roche | 4536282001 | |
| Silver-LED-405B light source with optical fiber and collimtor | Prizmatix Ltd | V8144 | |
| Fluorescein isothiocyanate isomer I | Sigma-Aldrich | F4274 | |
| dibutyl phthalate | Sigma-Aldrich | 524980 | |
| acetone | Macron Fine Chemicals | 2440-02 | |
| 29-guage syringes | Exel International | 26029 | |
| Evans Blue | Sigma-Aldrich | E2129 | |
| 70 um cell strainers | VWR | 732-2758 | |
| paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | P6148 | |
| HBSS | Caisson | HBL06 | |
| LIVE/DEAD Fixable Aqua Dead Cell Stain Kit | Invitrogen | L34966 | |
| Purified Anti-mouse CD16/CD32 | Tonbo Biosciences | 70-0161-M001 | |
| BV605 CD11c (clone N418) | Biolegend | 117334 | |
| PerCP-Cy5.5 MHCII (clone M5/114.15.2) | BD Pharmingen | 562363 | |
| BV421 CD3e (clone 145-2C11) | Biolegend | 100341 | |
| APC CD8a (clone 53-6.7) | TonBo Biosciences | 20-0081-u100 | |
| APC-Cy7 CD45 (clone 30-F11) | Biolegend | 103116 | |
| BV650 CD19 (clone 6D5) | Biolegend | 115541 | |
| PercCP-Cy5.5 Ly6C (clone HK1.4) | Biolegend | 128011 | |
| Alexa Fluor 647 F4/80 (clone BM8) | Biolegend | 123121 | |
| APC-Cy7 Ly6G (clone 1A8) | Biolegend | 127623 | |
| BV711 CD11b (clone M1/70) | Biolegend | 101241 | |
| BV605 CD45 (clone 30-F11) | Biolegend | 103155 | |
| BV711 CD4 (clone RM4-5) | BD Biosciences | 563726 | |
| Bovine serum albumin (Fraction V) | Fisher Scientific | BP1600-100 | |
| Anit-Rat and Anti-Hamster Igk / Negative Control Compensation Particle Set | BD Biosciences | 552845 | |
| Fortessa Flow Cytometer | BD Biosciences | ||
| FlowJo v10 Software | FlowJo |
References
- Banchereau, J., Steinman, R. M. Dendritic cells and the control of immunity. Nature. 392 (6673), 245-252 (1998).
- Hampton, H. R., Bailey, J., Tomura, M., Brink, R., Chtanova, T. Microbe-dependent lymphatic migration of neutrophils modulates lymphocyte proliferation in lymph nodes. Nature Communications. 6, 7139 (2015).
- D’Alessio, S., et al. VEGF-C-dependent stimulation of lymphatic function ameliorates experimental inflammatory bowel disease. Journal of Clinical Investigation. 124 (9), 3863-3878 (2014).
- Debes, G. F., et al. Chemokine receptor CCR7 required for T lymphocyte exit from peripheral tissues. Nature Immunology. 6 (9), 889-894 (2005).
- Bromley, S. K., Yan, S., Tomura, M., Kanagawa, O., Luster, A. D. Recirculating memory T cells are a unique subset of CD4+ T cells with a distinct phenotype and migratory pattern. Journal of Immunology. 190 (3), 970-976 (2013).
- Tomura, M., et al. Activated regulatory T cells are the major T cell type emigrating from the skin during a cutaneous immune response in mice. Journal of Clinical Investigation. 120 (3), 883-893 (2010).
- Tomura, M., Itoh, K., Kanagawa, O. Naive CD4+ T lymphocytes circulate through lymphoid organs to interact with endogenous antigens and upregulate their function. Journal of Immunology. 184 (9), 4646-4653 (2010).
- Jennrich, S., Lee, M. H., Lynn, R. C., Dewberry, K., Debes, G. F. Tissue exit: a novel control point in the accumulation of antigen-specific CD8 T cells in the influenza a virus-infected lung. Journal of Virology. 86 (7), 3436-3445 (2012).
- Geherin, S. A., Wilson, R. P., Jennrich, S., Debes, G. F. CXCR4 is dispensable for T cell egress from chronically inflamed skin via the afferent lymph. PLoS One. 9 (4), e95626 (2014).
- Brown, M. N., et al. Chemoattractant receptors and lymphocyte egress from extralymphoid tissue: changing requirements during the course of inflammation. Journal of Immunology. 185 (8), 4873-4882 (2010).
- Bromley, S. K., Thomas, S. Y., Luster, A. D. Chemokine receptor CCR7 guides T cell exit from peripheral tissues and entry into afferent lymphatics. Nature Immunology. 6 (9), 895-901 (2005).
- Gomez, D., Diehl, M. C., Crosby, E. J., Weinkopff, T., Debes, G. F. Effector T Cell Egress via Afferent Lymph Modulates Local Tissue Inflammation. Journal of Immunology. 195 (8), 3531-3536 (2015).
- Ohl, L., et al. CCR7 governs skin dendritic cell migration under inflammatory and steady-state conditions. Immunity. 21 (2), 279-288 (2004).
- Kabashima, K., et al. CXCL12-CXCR4 engagement is required for migration of cutaneous dendritic cells. American Journal of Pathology. 171 (4), 1249-1257 (2007).
- Cyster, J. G., Schwab, S. R. Sphingosine-1-phosphate and lymphocyte egress from lymphoid organs. Annual Review of Immunology. 30, 69-94 (2012).
- Matloubian, M., et al. Lymphocyte egress from thymus and peripheral lymphoid organs is dependent on S1P receptor 1. Nature. 427 (6972), 355-360 (2004).
- Teijeira, A., Rouzaut, A., Melero, I. Initial afferent lymphatic vessels controlling outbound leukocyte traffic from skin to lymph nodes. Frontiers in Immunology. 4, 433 (2013).
- Hunter, M. C., Teijeira, A., Halin, C. T Cell Trafficking through Lymphatic Vessels. Frontiers in Immunology. 7, 613 (2016).
- Bujdoso, R., Hopkins, J., Dutia, B. M., Young, P., McConnell, I. Characterization of sheep afferent lymph dendritic cells and their role in antigen carriage. Journal of Experimental Medicine. 170 (4), 1285-1301 (1989).
- Young, A. J. The physiology of lymphocyte migration through the single lymph node in vivo. Seminars in Immunology. 11 (2), 73-83 (1999).
- Seabrook, T., et al. The traffic of resting lymphocytes through delayed hypersensitivity and chronic inflammatory lesions: a dynamic equilibrium. Seminars in Immunology. 11 (2), 115-123 (1999).
- Swartz, M. A., et al. Mechanics of interstitial-lymphatic fluid transport: theoretical foundation and experimental validation. Journal of Biomechanics. 32 (12), 1297-1307 (1999).
- Macatonia, S. E., Knight, S. C., Edwards, A. J., Griffiths, S., Fryer, P. Localization of antigen on lymph node dendritic cells after exposure to the contact sensitizer fluorescein isothiocyanate. Functional and morphological studies. Journal of Experimental Medicine. 166 (6), 1654-1667 (1987).
- Robbiani, D. F., et al. The leukotriene C(4) transporter MRP1 regulates CCL19 (MIP-3beta, ELC)-dependent mobilization of dendritic cells to lymph nodes. Cell. 103 (4), 757-768 (2000).
- Roberts, E. W., et al. Critical Role for CD103(+)/CD141(+) Dendritic Cells Bearing CCR7 for Tumor Antigen Trafficking and Priming of T Cell Immunity in Melanoma. Cancer Cell. 30 (2), 324-336 (2016).
- Forster, R., et al. CCR7 coordinates the primary immune response by establishing functional microenvironments in secondary lymphoid organs. Cell. 99 (1), 23-33 (1999).
- Johnson, L. A., Jackson, D. G. The chemokine CX3CL1 promotes trafficking of dendritic cells through inflamed lymphatics. Journal of Cell Science. 126, 5259-5270 (2013).
- Teijeira, A., et al. T Cell Migration from Inflamed Skin to Draining Lymph Nodes Requires Intralymphatic Crawling Supported by ICAM-1/LFA-1 Interactions. Cell Reports. 18 (4), 857-865 (2017).
- Kilarski, W. W., et al. Intravital immunofluorescence for visualizing the microcirculatory and immune microenvironments in the mouse ear dermis. PLoS One. 8 (2), e57135 (2013).
- Overstreet, M. G., et al. Inflammation-induced interstitial migration of effector CD4(+) T cells is dependent on integrin alphaV. Nature Immunology. 14 (9), 949-958 (2013).
- Russo, E., et al. Intralymphatic CCL21 Promotes Tissue Egress of Dendritic Cells through Afferent Lymphatic Vessels. Cell Reports. 14 (7), 1723-1734 (2016).
- Steven, P., Bock, F., Huttmann, G., Cursiefen, C. Intravital two-photon microscopy of immune cell dynamics in corneal lymphatic vessels. PLoS One. 6 (10), e26253 (2011).
- Tomura, M., et al. Monitoring cellular movement in vivo with photoconvertible fluorescence protein "Kaede" transgenic mice. Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA. 105 (31), 10871-10876 (2008).
- Shand, F. H., et al. Tracking of intertissue migration reveals the origins of tumor-infiltrating monocytes. Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA. 111 (21), 7771-7776 (2014).
- Tomura, M., et al. Tracking and quantification of dendritic cell migration and antigen trafficking between the skin and lymph nodes. Scientific Reports. 4, 6030 (2014).
- Moran, A. E., et al. T cell receptor signal strength in Treg and iNKT cell development demonstrated by a novel fluorescent reporter mouse. Journal of Experimental Medicine. 208 (6), 1279-1289 (2011).
- Schmidt, T. H., Bannard, O., Gray, E. E., Cyster, J. G. CXCR4 promotes B cell egress from Peyer’s patches. Journal of Experimental Medicine. 210 (6), 1099-1107 (2013).
- Beura, L. K., et al. T Cells in Nonlymphoid Tissues Give Rise to Lymph-Node-Resident Memory T Cells. Immunity. 48 (2), 327-338 (2018).
- Torcellan, T., et al. In vivo photolabeling of tumor-infiltrating cells reveals highly regulated egress of T-cell subsets from tumors. Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA. 114 (22), 5677-5682 (2017).
- Khan, T. N., Mooster, J. L., Kilgore, A. M., Osborn, J. F., Nolz, J. C. Local antigen in nonlymphoid tissue promotes resident memory CD8+ T cell formation during viral infection. Journal of Experimental Medicine. 213 (6), 951-966 (2016).
- Loo, C. P., et al. Lymphatic Vessels Balance Viral Dissemination and Immune Activation following Cutaneous Viral Infection. Cell Reports. 20 (13), 3176-3187 (2017).
- Radu, M., Chernoff, J. An in vivo assay to test blood vessel permeability. Journal of Visualized Experiments. (73), e50062 (2013).
- Morton, A. M., et al. Endoscopic photoconversion reveals unexpectedly broad leukocyte trafficking to and from the gut. Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA. 111 (18), 6696-6701 (2014).
- Meeth, K., Wang, J. X., Micevic, G., Damsky, W., Bosenberg, M. W. The YUMM lines: a series of congenic mouse melanoma cell lines with defined genetic alterations. Pigment Cell Melanoma Research. 29 (5), 590-597 (2016).
- Demkowicz, W. E., Littaua, R. A., Wang, J., Ennis, F. A. Human cytotoxic T-cell memory: long-lived responses to vaccinia virus. Journal of Virology. 70 (4), 2627-2631 (1996).
- Stewart, A. J., Devlin, P. M. The history of the smallpox vaccine. Journal of Infection. 52 (5), 329-334 (2006).
- Hammarlund, E., et al. Duration of antiviral immunity after smallpox vaccination. Nature Medicine. 9 (9), 1131-1137 (2003).
- Lund, A. W., et al. Lymphatic vessels regulate immune microenvironments in human and murine melanoma. Journal of Clinical Investigation. 126 (9), 3389-3402 (2016).
- Tomura, M., Kabashima, K. Analysis of cell movement between skin and other anatomical sites in vivo using photoconvertible fluorescent protein "Kaede"-transgenic mice. Methods in Molecular Biology. , 279-286 (2013).
- Bellingan, G. J., Caldwell, H., Howie, S. E., Dransfield, I., Haslett, C. In vivo fate of the inflammatory macrophage during the resolution of inflammation: inflammatory macrophages do not die locally, but emigrate to the draining lymph nodes. Journal of Immunology. 157 (6), 2577-2585 (1996).
- Gautier, E. L., Ivanov, S., Lesnik, P., Randolph, G. J. Local apoptosis mediates clearance of macrophages from resolving inflammation in mice. Blood. 122 (15), 2714-2722 (2013).
- Abadie, V., et al. Neutrophils rapidly migrate via lymphatics after Mycobacterium bovis BCG intradermal vaccination and shuttle live bacilli to the draining lymph nodes. Blood. 106 (5), 1843-1850 (2005).
- Beauvillain, C., et al. CCR7 is involved in the migration of neutrophils to lymph nodes. Blood. 117 (4), 1196-1204 (2011).
- Rigby, D. A., Ferguson, D. J., Johnson, L. A., Jackson, D. G. Neutrophils rapidly transit inflamed lymphatic vessel endothelium via integrin-dependent proteolysis and lipoxin-induced junctional retraction. Journal of Leukocyte Biology. 98 (6), 897-912 (2015).
- Hanahan, D., Coussens, L. M. Accessories to the crime: functions of cells recruited to the tumor microenvironment. Cancer Cell. 21 (3), 309-322 (2012).
- Binnewies, M., et al. Understanding the tumor immune microenvironment (TIME) for effective therapy. Nature Medicine. 24 (5), 541-550 (2018).
