Summary
نماذج حيوانية لالتهاب البنكرياس الحاد الشديد تمكن من دراسة التغيرات المرضية الفسيولوجية في المرحلة الأولية ، مما يسهل مراقبة تطور الأحداث الالتهابية. هنا نقدم بروتوكولا لتحريض التهاب البنكرياس الصفراوي الحاد الشديد عن طريق ضخ التوروتشولات الصوديوم إلى القناة البنكرياسية للفئران C57BL/6 المخدرة.
Abstract
وقد تم استخدام التهاب البنكرياس الحاد الصفراوي عن طريق ضخ تاوروشولات الصوديوم على نطاق واسع من قبل المجتمع العلمي بسبب تمثيل الحالة السريرية البشرية وتكاثر الأحداث الالتهابية المقابلة لبداية التهاب البنكرياس الصفراوي السريري. يمكن تقييم شدة تلف البنكرياس عن طريق قياس تركيز وسرعة وحجم حمض الصفراء المشبع. تقدم هذه الدراسة قائمة محدثة بالمواد والأساليب المستخدمة في تكاثر البروتوكول وتظهر النتائج الرئيسية لهذا النموذج الحاد لالتهاب البنكرياس (AP). وقد اقتصرت معظم المنشورات السابقة على استنساخ هذا النموذج في الفئران. وقد طبقنا هذه الطريقة على الفئران، التي توفر مزايا إضافية (أي توافر ترسانة من الكواشف والأجسام المضادة لهذه الحيوانات إلى جانب إمكانية العمل مع سلالات الفئران المعدلة وراثيا) التي قد تكون ذات صلة بالدراسة. بالنسبة لتحريض التهاب البنكرياس الحاد في الفئران ، نقدم بروتوكولا منهجيا ، بجرعة محددة من taurocholate الصوديوم بنسبة 2.5٪ بسرعة ضخ 10 ميكرولتر / دقيقة لمدة 3 دقائق في C57BL /6 الفئران التي تصل إلى مستواها الأقصى من الشدة في غضون 12 ساعة من الحث وتسليط الضوء على النتائج مع النتائج التي تثبت صحة الطريقة. مع الممارسة والتقنية ، فإن إجمالي الوقت المقدر ، من تحريض التخدير إلى الانتهاء من التسريب ، هو 25 دقيقة لكل.
Introduction
في البشر ، وجود حصى في المرارة هو السبب الأكثر شيوعا لالتهاب البنكرياس بسبب انسداد الجزء النهائي من choledochal ، مما يقطع تدفق إفرازات البنكرياس ويسبب عملية التهابية مكثفة في البنكرياس ، مع زيادة في تركيز الإنزيمات الهضمية في المصل والوسطاء الالتهابيين1،2.
وقد اقترحت نظريتين مختلفتين لشرح تطور التهاب البنكرياس الحاد (ا ف ب). تشير نظرية "القناة الشائعة" إلى أن الأحجار الموجودة في المرارة تعوق نظام القناة الصفراوية المشتركة البعيدة ، مما يسمح للإفراز الصفراوي بالتدفق إلى الوراء في قناة البنكرياس. النظرية الثانية (نظرية "انسداد القناة") تشير إلى أن انسداد القناة البنكرياسية عن طريق حصى في المرارة الزائدة يسبب انسدادا في تدفق إفراز البنكرياس إلى الاثني عشر ، مما يسبب ارتفاع ضغط الدم القناة3. على الرغم من أن الآليات التي تؤدي إلى التهاب البنكرياس الصفراوي الحاد غير مفهومة تماما ، إلا أن النتيجة هي عملية التهابية مكثفة. يؤدي ثوران إنزيم الجهاز الهضمي والهضم الذاتي للبنكرياس إلى تغيرات في الهسطولوجيا ، وزيادة في السيتوكينات الالتهابية (IL-1β ، IL-6 ، TNF-α) في السائل المؤانس والمصل ، وزيادة في بروتينات المرحلة الحادة4،5،6.
التهاب البنكرياس الحاد الحاد هو حالة تستحق الاهتمام السريري بسبب مشاركة أعضاء متعددة وارتفاع خطر الوفيات. النماذج الحيوانية لتكاثر التهاب البنكرياس الحاد (AP) مهمة لأن هذه تشرح الآليات المرضية المرضية للمرض وتساعد في رصد تطور الأحداث الالتهابية ، بدءا من المراحل الأولية للمرض. هذا عادة غير ممكن في العيادات2,7. بالإضافة إلى ذلك ، فإن الوصول إلى أنسجة البنكرياس أمر سهل في الدراسات قبل السريرية ، ويفضل توضيح التغيرات المرتبطة بالظروف السريرية8 إلى جانب إمكانية العمل مع الأنواع متساوية المنشأ ، والقضاء على المتغيرات غير المرغوب فيها ، وعكس التشابه السريري مع النتائج الملاحظة في الحالة البشرية9.
وقد درست نماذج الصفراوية وغير الصفراوية لتحريض التهاب البنكرياس الحاد في الفئران والجرذان الأنواع في كثير من الأحيان في الأدبيات العلمية. وتشمل الأساليب غير الصفراوية للتحريض إعطاء جرعات تحفيز فوق ماكسيمال من المرارة سيكريتاغوجي أو cerulein10 التناظرية; إعطاء جرعات قاتلة تقريبا من ارجينين; أو إدارة نظام غذائي نقص الكولين تكملها ethionine11. على الرغم من أن هذه الأساليب سهلة التكاثر وتؤدي إلى التهاب البنكرياس ، إلا أنها لا تكرر الآليات التي تؤدي نظريا إلى AP (أي ارتجاع إفراز الصفراء في قناة البنكرياس). تعتمد التقنية التي تعالج النموذج الصفراوي على التسريب الرجعي للأحماض الصفراوية في قناة البنكرياس وتتطلب باحثين مدربين تدريبا جيدا لتنفيذ هذا البروتوكول. وقد نشرت عدة دراسات باستخدام هذه الطريقة في الفئران (لأسباب تقنية على ما يبدو لأن هذه التجارب تنطوي على العمليات الجراحية)12,13. ومع ذلك ، فإن النهج في الفئران قد يقدم نتائج أكثر إثارة للاهتمام في دراسة الالتهاب3،14،15. في هذه الدراسة، سوف نعرض قائمة مرجعية من الخطوات التي يتعين اتباعها لتكاثر التهاب البنكرياس الحاد الشديد عن طريق ضخ توروتشولات الصوديوم في الفئران المخدرة C57BL/6.
بالنسبة للأعمال التي تنطوي على الحاجة إلى تجارب مع الأجسام المضادة وتحليل التعبير الجيني والبروتيني ، فإن استخدام الفئران هو الأفضل بسبب الترسانة الأكبر من المواد لهذه الحيوانات وإمكانية العمل مع الأنواع المتساوية وال بالضربة القاضية ، من بين أمور أخرى يمكن استخدامها ذات الصلة بالدراسات16. الفئران C57BL/6 هو سلالة أصيلة من الفئران وضعت أصلا لدراسة نشاط مضاد للورم وعلم المناعة. ويفضل الباحثون هذه السلالة بشكل متزايد لكونها متساوية المنشأ، مما يسمح بإعادة إنتاج أكبر للنتائج، مما قد يعني استخدام عدد أقل من الحيوانات في تجربة وأقل تقلبا في النتائج بين نفس المجموعة 17,18.
بيريدس وآخرون (2010)14 نشر بروتوكولا للتحريض AP في الفئران عن طريق ضخ تاوروشولات الصوديوم. هنا نقوم بتحديث هذا النموذج باستخدام تركيز taurocholate الصوديوم أعلى (2.5٪) في الفئران C57BL/6، مع حجم محدد وسرعة التسريب (الشكل 1). يتم الوصول إلى المستوى الأقصى من الشدة في غضون 12 ساعة من التعريفي في الفئران. يرتبط ارتفاع تركيز IL-6 في كل من المصل وفي التجويف البريتوني مع تطور AP. مع الممارسة ، فإن إجمالي الوقت المقدر من تحريض التخدير إلى الانتهاء من التسريب ، هو 25 دقيقة لكل. من الضروري أن يقوم باحث مدرب بإجراء هذه التجربة. لضمان حقن المحلول بشكل صحيح في القناة الصفراوية الشائعة ، قم بإجراء العديد من الدورات التدريبية التجريبية باستخدام الميثيلين الأزرق بدلا من تاوروشولات الصوديوم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
تمت الموافقة على هذا البروتوكول من قبل لجنة الأخلاقيات لاستخدام الحيوانات من كلية الطب USP، Num. المشروع: 1343/2019-CEUA: FMUSP. لهذا البروتوكول، استخدمت الفئران C57BL/6، الذين تتراوح أعمارهم بين 6 أسابيع، وزنها 20 ± 2 غرام (ن = 9/group).
1. استئصال البطن
- تخدير الحيوانات مع xylazine (10 ملغ / كغ) والحل الكيتامين (80 ملغ / كغ) ، تحت الجلد (0.1 مل / 10g من وزن الجسم) باستخدام حقنة 1 مل وإبرة 13x0.45mm 26G 1 /2. تحقق من عمق التخدير الكافي عن طريق قرص إصبع القدم. التحكم في درجة حرارة الجسم باستخدام منصات ساخنة. تأكد من أن جميع المواد الجراحية معقمة.
- تنظيف منطقة البطن مع محلول 5٪ بوفيدوني اليود واستخدام أداة تشذيب لإزالة الشعر بين الصدر وأسفل البطن (حوالي 2 سم2). تنظيف المنطقة الجراحية مع الكحول 70٪.
- شل حركة الحيوان على اللوحة الجراحية باستخدام الشريط الجراحي. استخدام مقص لقطع 5 ملم من الجلد أفقيا، على الجزء العلوي من البطن و 1 سم تحت عملية xiphoid. كرر قطع على الصفاق. وهذا سيؤدي إلى استئصال البطن مع الحد الأدنى من التعرض للتجاويف.
2. تحديد البنكرياس وفضحه
- بمساعدة من الراسل، سحب الكبد نحو رأس الفأر، ~ 1 سم من الأمعاء.
- حدد موقع منطقة البنكرياس التي سيتم حقنها مع تاوروشولات الصوديوم (رأس البنكرياس). حدد موقع الاثني عشر مع الإشارة إلى الكبد تحت الكبد، على الجانب الأيمن (على اليسار كما ينظر الماوس). الاثني عشر هو الجزء الأول من الأمعاء الدقيقة ويرتبط الجزء الأخير من المعدة.
- مع المعونة من ملقط، ورفع الكبد نحو رأس الحيوان، وسحب بلطف جزء الأمعاء الدقيقة. إصلاح طرفي الجانبية من الأمعاء الدقيقة مع خياطة البولي بروبلين 6-0 لعرض أفضل للجزء البعيدة من القناة الصفراوية المشتركة.
3. حاد حاد التهاب البنكرياس التعريفي
- انسداد مؤقتا القناة الصفراوية المشتركة القريبة مع مقطع microvessel لمنع التسريب إلى الوراء من التسرب إلى الكبد. يمكن رؤية القناة الصفراوية الشائعة على جانب الكبد من الاثني عشر وسيظهر تقاطعها مع الاثني عشر أبيضا. كشف الجهاز من تجويف البطن.
- ثقب المنطقة periampullary (جزء أبيض من جدار الأمعاء الدقيقة) للوصول إلى القناة الصفراوية المشتركة مع إبرة 0.4 ملم متصلة أنبوب البولي ايثيلين 0.54 ملم.
- جعل انسداد مؤقت من القناة الصفراوية المشتركة البعيدة مع 8-0 خياطة لمنع محلول توروتشولات الصوديوم من التسرب إلى الاثني عشر.
- بدء ضخ مضخة وبرنامج محلول taurocholate الصوديوم 2.5٪ (المخفف في 0.9٪ المالحة) ضخ بسرعة ثابتة من 10 ميكرولتر / 10 غرام وزن الجسم لمدة 3 دقائق.
- بعد التسريب ، وإزالة مقطع microvessel ، مؤقتة 8-0 خياطة، وإبرة الحقن من القناة الصفراوية البنكرياس لإعادة تشكيل التدفق الفسيولوجي لل الصفراء.
- في النهاية، خياطة البطن مع 6-0 غير الممتنة أحادية الفلترة البولي بروبلين خياطة. يجب أن يكون الوقت بين استئصال البطن وخياطة النهاية بحد أقصى 30 دقيقة (انظر الشكل 1).
- بعد الجراحة، إيواء الحيوانات في صناديق البولي ايثيلين اصطف مع حلق الخشب والماء والغذاء الإعلانية libitum.
- علاج الفئران التحكم بنفس الطريقة التي الفئران التجريبية ولكن تأكد من أن غرس يتكون من المالحة فقط. إجراء العملية الجراحية وضخ محلول ملحي (10 مل / دقيقة ، لمدة 3 دقائق) في مجموعة مراقبة (SHAM) للقضاء على التحيز الالتهابي الناجم عن الجراحة والتكفير.
- استخدام ترامادول 12.5 ملغم/ كغ تحت الجلد كل 8 ساعات، بدءا من بعد الانتعاش بعد الجراحة.
4. طرق التحليل
- في 12 ساعة بعد تحريض AP, تخدير الحيوانات مع xylazine (10 ملغ / كغ) والكيتامين (80 ملغ / كغ) لجمع ما يقرب من 250 ميكرولتر من الدم عن طريق الضفيرة المدارية.
- عقد بلطف الجلد على ظهره، وتعزيز نتوء طفيف من مقلة العين، ووضعها مع العين التي تواجه صعودا.
- غرس قطرة من مرهم العين التي تحتوي على مخدر موضعي في عين الحيوان.
- ضع نهاية الأنبوب الشعري في الزاوية الوسيطة للعين وأدخله برفق تحت مقلة العين ، بزاوية ~ 30 °-45°. تدوير أنبوب الشعرية حتى يبدأ تدفق الدم. تذكر أنه ليس من الضروري استخدام القوة لإجراء العملية.
- بمجرد انتهاء المجموعة ، تأكد من التوازن عن طريق الحفاظ على الجفون مغلقة عن طريق ضغط الضوء مع الشاش. تجاهل أنبوب الشعرية في حاوية حادة19.
- الطرد المركزي المصل (700 × ز، 15 دقيقة) وتخزين supernatant للأميلاز وIL-6 التجريف (الخطوة 4.7 و 4.8).
- قتل الفئران عن طريق اختناق ثاني أكسيد الكربون.
- استخدام إبرة 27 G لحقن 4 مل من الجليد الباردة 1x PBS في تجويف الصفاق. عشرة جلد البطن وضمان أن يتم دفع الإبرة ببطء في الصفاق لعدم ثقب أي أجهزة. بعد الحقن، تدليك بلطف الصفاق لمدة 10 ق لإزالة الخلايا التي انضمت إلى الصفاق.
- باستخدام مقص وملاقط، وجعل قطع صغيرة (0.5 سم) على الجلد الداخلي والعضلات لفضح تجويف البطن. إدراج ماصة لمبة في الصفاق وجمع السائل. يجب الحرص على عدم يستنشق الأنسجة الدهنية أو غيرها من الأجهزة.
- جمع أكبر قدر ممكن من السوائل وإيداع تعليق الخلية التي تم جمعها في أنابيب أبقى على الجليد. تجاهل ماصة لمبة في حاوية حاد20. طرد مركزي السائل البريتوني (250 × ز، 5 دقائق) وتخزين الناطور لIL-6 التجريف (الخطوة 4.9).
- جمع منطقة البنكرياس المتاخمة للديودينوم (<5mm).
- معالجة البنكرياس عن طريق تحديد في 10٪ الفورملين ودمجها في البارافين.
- وصمة عار الشرائح مع hematoxylin وeosin لتحليل الهستوبولوجيا تحت المجهر الخفيفة. استخدم بروتوكول شميدت21 (وذمة البنكرياس، خلية الأسينار، الإصابة/ النخر، التهاب البنكرياس) لتقييم مدى AP.
- قياس الأميليز (U /dL) باستخدام مجموعات المتاحة تجاريا وفقا لتوصيات الشركة المصنعة.
- قياس IL-6 بواسطة المقايسات Luminex باستخدام مجموعات تجارية وفقا لتوصيات الشركة المصنعة.
- تخزين المصل والسائل البريتوني supernatant التي تم الحصول عليها في الخطوتين 4.1 و 4.4 في الثلاجة في -80 درجة مئوية إذا لزم الأمر.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
تم تسجيل شدة التهاب البنكرياس بين 0-3 وفقا لمقياس شميدت21 حيث يتوافق الصفر مع الغياب ، و1 يتوافق مع وجود خفيف (<25٪) ، و2 يتوافق مع وجود معتدل (بين 25 و 50٪) و 3 يتوافق مع وجود مكثف (> 50٪) (الجدول 1). وكانت القياسات التي أجريت نشاط الأميليز البلازما, وذمة البنكرياس, خلية acinar, إصابة / نخر, التهاب البنكرياس (عن طريق تحليل الأنسجة من أقسام H & E الملطخة) وتركيز السيتوكين IL-6 في المصل والسوائل PerC. بعد 12 ساعة من AP الشديد ، أظهرت مجموعة APTA زيادة في تركيز الأميليز المصل (6194 ± 336.7 U / dL) ، مقارنة بالمجموعة الصورية (3845 ± 135.7 U / dL). وفي الوقت نفسه، أظهرت مجموعة APTA زيادة تركيز السيتوكين IL-6 في المصل وسوائل PerC (الشكل 2). الشكل 3 يظهر ممثل hematoxylin-eosin تلطيخ من مجموعة صورية وAPTA .
الشكل 1: مخططات تحريض التهاب البنكرياس الحاد الشديد بنسبة 2.5٪ توروتشولات الصوديوم في C57BL/6 الفئران. (ب) القناة الصفراوية المشتركة؛ (ج) قناة البنكرياس; (د) الوريد المدخلي؛ (ه) مقطع الميكروفسل؛ (و) موقع ثقب (إبرة تعلق على أنبوب البولي ايثيلين ومتصلة ضخ مضخة); (G) تثبيت إبرة مؤقتة في القناة الصفراوية المشتركة. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2: النتائج التمثيلية بعد 12 ساعة من التهاب البنكرياس الحاد الشديد. (أ) تركيز الأميلاز المصل الحيواني (U/dL). (ب) IL-6 تركيز السيتوكين في المصل والسوائل PerC. تم تقييم الاختلافات بين المجموعات عن طريق تحليل t-test غير المدفوع * p <0.05 إذا كانت APTA ≠ صورية (n = 9 / المجموعة). يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
| وذمة الخلالية | تسلل التهابي | نخر بارينشيما | نزيف بارينشيما | |
| الشام | 1±0* | 0.0 | 0.0 | 0.0 |
| APTA | 3±0* | 3±0 | 3±0 | 3±0 |
| *P<0,05 إذا ≠ أبتا. |
الجدول 1: التغيرات النسيجية في أنسجة البنكرياس بعد 12 ساعة من AP الشديد. تم معالجة البنكرياس وتحليله وفقا لحجم شميدت21. تم التعبير عن النتائج على أنها متوسط ± SEM وتم تقييم الاختلافات بين المجموعات من خلال اختبار الطالب t. * ع <0.05 إذا ≠ وكالة الأنباء الجزائرية شام؛ (ن = 9 / المجموعة).
الشكل 3: النائبهيماتوكسيلين-إيوزين تلطيخ في أنسجة البنكرياس بعد 12 ساعة من AP شديدة. التغيرات النسيجية في (أ) الشام و (ب) APTA أنسجة البنكرياس (Hematoxylin-Eosin تلطيخ- 40x التكبير). يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
وقد ثبت بالفعل طريقة الحث على التهاب البنكرياس الحاد عن طريق ضخ توروتشولات الصوديوم إلى الوراء في rats22,23,24. وكانت ثلاثة أعمال مماثلة، نشرت في ال أعوام 2008 و2010 و2015، بمثابة مرجع للبروتوكول 3,14,15. في هذا العمل، نقوم بإدراج كافة الخطوات الهامة لإعادة إنتاج هذه الطريقة في الفئران C57BL/6 وبعض الاحتمالات للتحقق من صحتها.
خطوة حاسمة في هذا الاختبار هو سد القناة الصفراوية على مستوى الحلوم مع مقطع microvessel (الخطوة 3.1) لتجنب ارتجاع تاوروشولات الصوديوم في الكبد. تتطلب هذه الخطوة الكثير من الاهتمام ، نظرا لأن الوريد المدخلي بجوار القناة (الشكل 1D) ، لذلك يجب توخي الحذر لعدم حظره معا. يجب إدخال الإبرة فقط في الجزء الأكثر وضوحا. إذا تم إدخاله بعمق في القناة ، فإنه يمكن أن يسبب تمزقا مع الحمض الذي يفيض إلى بارنشيما الغدية و / أو إلى قنوات أخرى14. تأكد من أن أنبوب البولي إيثيلين يحتوي على هواء داخلي لمنع انسداد القناة الصفراوية الشائعة.
يتطلب هذا النموذج شقا في بطن الفأر. إدخال القنية من خلال فتحة قناة البنكرياس يتطلب خبرة ولكن يمكن تحقيق ذلك مع training15,25. من المهم تسليط الضوء على أن شدة التهاب البنكرياس في هذا النموذج تعتمد بشكل متناسب على التركيز وحجم التسريب وضغط التسريب ووقت تحريض AP. وبالتالي ، يجب استخدام آلة ضخ مستمرة مع حجم وضغط مسيطر عليهما.
لهذه الدراسة، قمنا بتوحيد تركيز 2.5٪، مع سرعة ضخ 10 ميكرولتر / دقيقة، لمدة 3 دقائق وضغط مستمر. في 12 ساعة من AP، لوحظت زيادة المعلمات الالتهابية ونخر أنسجة البنكرياس، مع الحيوانات تموت في غضون 16 ساعة بعد التعريفي AP.
على الرغم من أن الأسباب الرئيسية لAP هي استهلاك الكحول أو حصى في المرارة، وهذه النماذج ليست قابلة للاستنساخ تجريبيا26. حاليا، البروتوكول الأكثر استخداما للتحريض AP في الفئران ينطوي على 7 حقن داخل الصفاق من cerulein (50 ميكروغرام / كجم وزن الجسم) على فترات 1 ساعة27. وقد استخدمت Cerulein للحث على التهاب البنكرياس الحاد خفيفة أو معتدلة كذلك. ويحد التباين في هذا النموذج من استخدامه في دراسة الآثار المدمرة للمرض، مما يمنح المراضة السريرية والوفيات10. النماذج التي تؤدي إلى ارتفاع معدل الوفيات في وقت قصير هي ذات الصلة لدراسة AP الشديد (نخر)، لأنها يمكن أن تقيم فعالية الأدوية الجديدة أو التدخلات. ومن بين هذه النماذج التعريفي AP النزفية في القوارض الإناث الشابات (بين 4 و 6 أسابيع) من قبل diet28 نقص الكولين وL-أرجينين (على سبيل المثال، 3 × 3 غرام / كجم أو 2 × 4 غرام / كجم) على أساس تحريض التهاب البنكرياس الحاد في الفئران ولكن ينبغي اختبار التسريب السليم من L-أرجينين للحث AP من قبل كل مختبر وفي كل سلالة الماوس29. في عام 2015 ، أظهرت دراسة أن ضخ التوروكولات داخل القناة يليه ربط القناة الصفراوية الشائعة البعيدة يؤدي إلى نموذج حاد لالتهاب البنكرياس في الفئران3. ومع ذلك، هذا النموذج غير مفيد لاختبار فعالية الدواء والتدخلات بسبب حالته التي لا رجعة فيها.
ترتبط النتائج الموجودة في هذه الدراسة بالأدبيات الحديثة مثل ارتفاع تركيز الأميليز المصلي وIL-6 المرتبط بتطور المرض. فمن الممكن أن في المستقبل, قياس البروتينات مثل TNF-α, IL-1β و myeloperoxidase سوف تكون معلمة التكهن السريري لالتهاب البنكرياس الحاد الشديد30,31,32.
في الختام، فإن البروتوكول المستخدم في هذه الدراسة للحث على AP في الفئران عن طريق ضخ توروتشولات الصوديوم مباشرة في القناة الصفراوية المشتركة يؤدي إلى التهاب البنكرياس الحاد الشديد مع نخر أنسجة البنكرياس التي يمكن ملاحظتها حتى في 12 ساعة بعد التعريفي مع ارتفاع IL-6 cytokine في المصل والسائل الصفاق ومع ارتفاع الفتك (100٪ وفيات في 16 ساعة، البيانات غير المعروضة).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
وليس لدى صاحبي البلاغ ما يكشفان عنه.
Acknowledgments
الكتاب بفضل برنامج ما بعد التخرج في العيادة الطبية في جامعة ساو باولو; كلية الطب بجامعة ساو باولو
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.4 mm needle | INTRAG MEDICAL TECH | 90183210 | 30G |
| 0.54 mm polyethylene tube | Tygon | 730010 | - |
| Styrofoam block | - | - | - |
| masking tape for mounting the mouse | Missner | 1236 | - |
| Infusion pump scheduled to 10µL / min. | Havard aparatus-Peristaltic Pump Series | MA1 55-7766 | Model 66 Small Peristaltic |
| Scissors and forceps | |||
| Antiseptic providine iodine | Pfizer | 12086OR | antisepsis |
| 70% ethanol | SIGMA | 459836 | Mix 700 mL 100% ethanol with 300 mL dH2O |
| Razor blade | Lord | bdk9a1ghk6 | For trichotomy |
| Sodium taurocholate | Sigma-Aldrich | 86339- 1G | CAS NUMBER- 345909-26-4 |
| microvessel clip | Medicon Surgical | 56.87.35 | Approximator, opening 4.0 mm, closing pressure 30 - 40 g |
| 6-0 prolene | Bioline | 5162 | Suture line |
| Ketamin NP (cloridrato de dextrocetamina) 50mg/mL | Cristália | ||
| Xilazine 2% | Syntec | ||
| Sterile saline solution (0.9% (wt/vol) saline) | Farmace | 105851 | |
| Methyl Blue | Sigma-Aldrich Chemicals | M5528 | |
| MILLIPLEX MAP Mouse Cytokine/Chemokine Magnetic Bead Panel - Immunology Multiplex Assay | MERCK | MCYTOMAG-70K | Simultaneously analyze multiple cytokine and chemokine biomarkers with Bead-Based Multiplex Assays using the Luminex technology, in mouse serum, plasma and cell culture samples. |
| Amylase Assay | Labtest | 11 | |
| Desmarres retractor 13-mm width |
ROBOZ | RS-6672 |
References
- Li, X., et al. Significantly different clinical features between hypertriglyceridemia and biliary acute pancreatitis: A retrospective study of 730 patients from a tertiary center. BMC Gastroenterology. 18 (1), 1-8 (2018).
- Rechreche, H., Abbes, A., Iovanna, J. L. Induction of antioxidant mechanisms in lung during experimental pancreatitis in rats. Indian Journal of Experimental Biology. 58 (5), 297-305 (2020).
- T, L., et al. Intraductal infusion of taurocholate followed by distal common bile duct ligation leads to a severe necrotic model of pancreatitis in mice. Pancreas. 44 (3), (2015).
- Botoi, G., Andercou, A. Interleukin 17-prognostic marker of severe acute pancreatitis. Chirurgia. 104 (4), 431-438 (2009).
- Li, D., Li, J., Wang, L., Zhang, Q. Association between IL-1beta, IL-8, and IL-10 polymorphisms and risk of acute pancreatitis. Genetics and Molecular Research. 14 (2), 6635-6641 (2015).
- Feng, C., et al. Effect of peritoneal lavage with ulinastatin on the expression of NF-kappaB and TNF-alpha in multiple organs of rats with severe acute pancreatitis. Experimental and Therapeutic Medicine. 10 (6), 2029-2034 (2015).
- Fang, D. Z., et al. Effects of sildenafil on inflammatory injury of the lung in sodium taurocholate-induced severe acute pancreatitis rats. International Immunopharmacology. 80, (2020).
- Ceranowicz, P., Cieszkowski, J., Warzecha, Z., Dembinski, A.
- Wan, M. H., et al. Review of experimental animal models of biliary acute pancreatitis and recent advances in basic research. HPB (Oxford). 14 (2), 73-81 (2012).
- Mayerle, J., Sendler, M., Lerch, M. M. Secretagogue (Caerulein) induced pancreatitis in rodents. Pancreapedia: The Exocrine Pancreas Knowledge Base. (1), (2013).
- Wang, N., et al. Resveratrol protects against L-arginine-induced acute necrotizing pancreatitis in mice by enhancing SIRT1-mediated deacetylation of p53 and heat shock factor 1. International Journal of Molecular Medicine. 40 (2), 427-437 (2017).
- Ma, Z. H., et al. Effect of resveratrol on peritoneal macrophages in rats with severe acute pancreatitis. Inflammation Research. 54 (12), 522-527 (2005).
- Souza, L. J., et al. Anti-inflammatory effects of peritoneal lavage in acute pancreatitis. Pancreas. 39 (8), 1180-1184 (2010).
- Perides, G., Acker, G. J. v, Laukkarinen, J. M., Steer, M. L. Experimental acute biliary pancreatitis induced by retrograde infusion of bile acids into the mouse pancreatic duct. Nature Protocols. 5 (2), 335-341 (2010).
- Wittel, U. A., et al. Taurocholate-induced pancreatitis: a model of severe necrotizing pancreatitis in mice. Pancreas. 36 (2), 9-21 (2008).
- Tao, L., Reese, T. A. Making mouse models that reflect human immune responses. Trends Immunology. 38 (3), 181-193 (2017).
- Vandamme, T. F. Use of rodents as models of human diseases. Journal of Pharmacy and Bioallied Science. 6 (1), 2-9 (2014).
- Song, H. K., Hwang, D. Y. Use of C57BL/6N mice on the variety of immunological researches. Laboratory Animal Research. 33 (2), 119-123 (2017).
- Bogdanske, J. J., Stelle, S. H. -V., Riley, M. V., Schiffman, B. M. Suturing Principles and Techniques in Laboratory Animal Surgery. 1st edition. (1), CRC Press. (2010).
- Ray, A., Dittel, B. N. Isolation of mouse peritoneal cavity cells. Journal of Visualized Experiments. (35), e1488 (2010).
- Schmidt, J., et al. A better model of acute pancreatitis for evaluating therapy. Annals of Surgery. 215 (1), 44-56 (1992).
- Liu, D. L., et al. Resveratrol improves the therapeutic efficacy of bone marrow-derived mesenchymal stem cells in rats with severe acute pancreatitis. International Immunopharmacology. 80, 106128 (2020).
- Yang, X. F., et al. Chaiqin chengqi decoction alleviates severe acute pancreatitis associated acute kidney injury by inhibiting endoplasmic reticulum stress and subsequent apoptosis. Biomedicine & Pharmacotherapy. 125 (12), 110024 (2020).
- Yang, X. F., et al. Chaiqin chengqi decoction alleviates severe acute pancreatitis associated acute kidney injury by inhibiting endoplasmic reticulum stress and subsequent apoptosis. Biomedicine & Pharmacotherapy. 125, 110024 (2020).
- Venglovecz, V., Z, R., Hegyi, P. The effects of bile acids on pancreatic ductal cells. Pancreapedia: The Exocrine Pancreas Knowledge Base. (1), (2019).
- Roberts, S. E., Akbari, A., Thorne, K., Atkinson, M., Evans, P. A. The incidence of acute pancreatitis: impact of social deprivation, alcohol consumption, seasonal and demographic factors. Alimentary Pharmacology and Therapeutics. 38 (5), 539-548 (2013).
- Lerch, M. M., Gorelick, F. S. Models of acute and chronic pancreatitis. Gastroenterology. 144 (6), 1180-1193 (2013).
- Nakamura, K., Fukatsu, K., Sasayama, A., Yamaji, T. An immune-modulating formula comprising whey peptides and fermented milk improves inflammation-related remote organ injuries in diet-induced acute pancreatitis in mice. Biosci Microbiota Food Health. 37 (1), 1-8 (2018).
- Kui, B., et al. New insights into the methodolgy of L-Arginine-induced acute pancreatitis. PLoS One. 10 (2), 011758 (2015).
- Xue, J., et al. Alternatively activated macrophages promote pancreatic fibrosis in chronic pancreatitis. Nature Communication. 6, 7158 (2015).
- Lesina, M., Wormann, S. M., Neuhofer, P., Song, L., Algul, H. Interleukin-6 in inflammatory and malignant diseases of the pancreas. Seminars in Immunology. 26 (1), 80-87 (2014).
- Rao, S. A., Kunte, A. R. Interleukin-6: An early predictive marker for severity of acute pancreatitis. Indian Journal of Critical Care Medicine. 21 (7), 424-428 (2017).
