Summary
Şiddetli akut pankreatit için hayvan modelleri, ilk aşamada patofizyolojik değişikliklerin incelenmesini sağlayarak enflamatuar olayların evriminin gözlemini kolaylaştırır. Burada, anestezi edilmiş C57BL/6 farelerin pankreas kanalına sodyum taurokolatın retrograd infüzyonu ile şiddetli akut safra pankreatit indüksiyonu için bir protokol sunuyoruz.
Abstract
Sodyum taurokolat infüzyonu ile safra akut pankreatit indüksiyonu, insan klinik durumunun temsili ve klinik safra pankreatitinin başlangıcına karşılık gelen enflamatuar olayların üremesi nedeniyle bilim topluluğu tarafından yaygın olarak kullanılmaktadır. Pankreas hasarının şiddeti, aşılanan safra asidinin konsantrasyonu, hızı ve hacmi ölçülerek değerlendirilebilir. Bu çalışma, protokol üremesinde kullanılan malzeme ve yöntemlerin güncellenmiş bir kontrol listesini sağlar ve bu akut pankreatit (AP) modelinin ana sonuçlarını gösterir. Önceki yayınların çoğu, bu modeli sıçanlarda yeniden üretmekle sınırlıdır. Bu yöntemi, çalışmayla ilgili olabilecek ek avantajlar (yani, bu hayvanlar için reaktifler ve antikorlardan oluşan bir cephaneliğin mevcudiyeti ve genetiği değiştirilmiş fare suşlarıyla çalışma imkanı) sağlayan farelerde uyguladık. Farelerde akut pankreatit indüksiyonu için, C57BL/6 farelerde 3 dakika boyunca 10 μL/dk infüzyon hızında% 2.5 sodyum taurocholate tanımlanmış bir doz ile sistematik bir protokol sunuyoruz ve indüksiyonun 12 saat içinde maksimum şiddet seviyesine ulaşıyor ve yöntemi doğrulayan sonuçlarla sonuçları vurguluyoruz. Uygulama ve teknikle, anestezinin indüksiyonundan infüzyonun tamamlanmasına kadar toplam tahmini süre hayvan başına 25 dk'dır.
Introduction
İnsanlarda, safra kesesi taşlarının varlığı, kolesochal'ın terminal kısmının tıkanması, pankreas salgılarının akışını kesmesi ve pankreasta yoğun bir enflamatuar sürece neden olması nedeniyle pankreatitin en yaygın nedenidir, serum ve enflamatuar mediatörlerde sindirim enzimlerinin konsantrasyonunda bir artış ile1,2.
Akut pankreatit (AP) gelişimini açıklamak için iki farklı teori önerilmiştir. "Ortak kanal" teorisi, safra kesesinde bulunan taşların distal ortak safra kanalı sistemini tıkadığını ve safra salgısının pankreas kanalına retrograd akmasını sağladığını öne sürmemektedir. İkinci teori ("kanal tıkanıklığı" teorisi), pankreas kanalının fazla safra kesesi taşları tarafından tıkanmasının duodenuma pankreas salgısının akışında tıkanmaya neden olduğunu ve düktal hipertansiyona neden olduğunu göstermektedir3. Akut safra pankreatitine yol açan mekanizmalar tam olarak anlaşılamasa da, sonuç yoğun bir enflamatuar süreçtir. Sindirim enzimi patlaması ve pankreas kendi kendine sindirim histopatolojik değişikliklere, assitik sıvı ve serumda enflamatuar sitokinlerde (IL-1β, IL-6, TNF-α) artışa ve akut faz proteinlerinde artışa yol açar4,5,6.
Şiddetli akut pankreatit, birden fazla organın tutulumu ve yüksek mortalite riski nedeniyle klinik dikkati hak eden bir durumdur. Akut pankreatit (AP) üremesi için hayvan modelleri önemlidir, çünkü bunlar hastalığın patofizyolojik mekanizmalarını açıklar ve hastalığın ilk aşamalarından başlayarak enflamatuar olayların evrimini izlemeye yardımcı olur. Bu genellikle kliniklerde mümkün değildir2,7. Ek olarak, preklinik çalışmalarda pankreas dokularına erişim kolaydır, klinik koşullara bağlı değişikliklerin aydınlatılmasını kolaylaştırır8 izojenik türlerle çalışma, istenmeyen değişkenleri ortadan kaldırma ve klinik benzerliği insan durumunda gözlenen sonuçlarla yansıtma olasılığı ile birlikte9.
Sıçanlarda ve fare türlerinde akut pankreatit indüksiyonu için safralı ve safrasız modeller bilimsel literatürde sıkça incelenmiştir. Safrasız indüksiyon yöntemleri arasında kolesistokinin secretagogunun veya analog cerulein10'un supramaximal uyarıcı dozlarının verilmesi; neredeyse ölümcül dozlarda L-arginin verilmesi; veya etionin11 ile desteklenmiş kolin eksikliği olan bir diyetin yönetimi. Bu yöntemlerin çoğaltılması ve pankreas iltihabı ile sonuçlanması kolay olsa da, teoride AP'yi tetikleyen mekanizmaları (yani safra salgısının pankreas kanalına reflü) çoğaltır. Safra modeline hitap eden teknik, safra asitlerinin pankreas kanalına retrograd infüzyonuna dayanır ve bu protokolü gerçekleştirmek için iyi eğitimli araştırmacılar gerektirir. Sıçanlarda bu yöntem kullanılarak çeşitli çalışmalar yayınlanmıştır (görünüşe göre bu deneyler cerrahi prosedürler içerdiğinden teknik nedenlerle)12,13. Bununla birlikte, farelerdeki yaklaşım iltihaplanma çalışmasında daha ilginç sonuçlar sunabilir3,14,15. Bu çalışmada, C57BL/6 anestezik farelerde sodyum taurokolat infüzyonu ile şiddetli akut pankreatit üremesi için izlenecek adımların bir kontrol listesini göstereceğiz.
Antikorlarla deneylere ve gen ve protein ekspresyonunun analiz edilmesine ihtiyaç duyan çalışmalar için, bu hayvanlar için daha fazla malzeme cephaneliği ve çalışmalarla ilgili kullanılabilecek diğerlerinin yanı sıra izojenik ve nakavt türleriyle çalışma olasılığı nedeniyle farelerin kullanımı tercih edilir16. Fareler C57BL/6, başlangıçta antitümör aktivite ve immünoloji çalışması için geliştirilen doğuştan gelen bir fare türüdür. Bu suş, araştırmacılar tarafından izojenik olduğu için giderek daha fazla tercih edilmekte ve bu da bir deneyde daha az sayıda hayvanın kullanıldığı ve aynı grup17,18 arasındaki sonuçların daha az değişkenliği anlamına gelebilecek sonuçların daha fazla tekrarlanabilirliğine izinmektedir.
Perides ve ark. (2010)14 , sodyum taurokolat infüzyonu ile farelerde AP indüksiyonu için bir protokol yayınladı. Burada bu modeli, tanımlanmış bir hacim ve infüzyon hızı ile C57BL / 6 farelerde daha yüksek sodyum taurokolat konsantrasyonu (% 2.5) kullanarak güncelleriz (Şekil 1). Maksimum şiddet seviyesine farelerde indüksiyondan 12 saat içinde ulaşılır. IL-6 konsantrasyonunun hem serumda hem de periton boşluğunda yükselmesi AP'nin ilerlemesi ile ilişkilidir. Pratikte, anestezinin indüksiyonundan infüzyonun tamamlanmasına kadar geçen toplam tahmini süre hayvan başına 25 dk'dır. Bu deneyi eğitimli bir araştırmacının yapması şarttır. Çözeltinin ortak safra kanalına düzgün bir şekilde enjekte edildiğinden emin olmak için sodyum taurocholate yerine metilen mavisi kullanarak birkaç pilot eğitim seansı gerçekleştirin.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Bu protokol USP Tıp Fakültesi, Num. Projesi: 1343/2019-CEUA: FMUSP hayvanlarının kullanımı için Etik Kurulu tarafından onaylanmıştır. Bu protokol için 6 haftalık, 20 ± 2 g ağırlığında C57BL/6 fareler kullanılmıştır (n = 9/grup).
1. Laparotomi
- Hayvanları 1 mL şırınga ve 13x0.45mm iğne 26G 1/2 kullanarak deri altından (0.1 mL/10g vücut ağırlığı) olmak için ksilazin (10 mg/kg) ve ketamin çözeltisi (80 mg/kg) ile uyuşturun. Parmağı kıstırarak yeterli anestezi derinliği olup olmadığını kontrol edin. Isıtılmış pedler kullanarak vücut sıcaklığını kontrol edin. Tüm cerrahi malzemelerin steril olduğundan emin olun.
- Karın bölgesini % 5 povidon-iyot çözeltisi ile temizleyin ve göğüs ile alt karın arasındaki kılları çıkarmak için bir düzeltici kullanın (yaklaşık 2 cm2). Cerrahi bölgeyi % 70 alkolle temizleyin.
- Cerrahi bant kullanarak hayvanı cerrahi tahtada hareketsiz hale ederim. Cildin 5 mm'lik kısmını karnın üst kısmında ve xiphoid işleminin 1 cm altında yatay olarak kesmek için makas kullanın. Peritondaki kesimi tekrarlayın. Bu, boşluğun minimum maruziyeti ile laparotomi ile sonuçlanacaktır.
2. Pankreasın bulunması ve açığa
- Bir retraktör yardımıyla, karaciğeri bağırsaktan ~ 1 cm uzaklıktaki farenin kafasına doğru çekin.
- Pankreasın sodyum taurocholate (pankreas kafası) ile enjekte edilecek bölgesini bulun. Duodenumu karaciğere atıfta bulunarak bulun - karaciğerin altında, sağ tarafta (farenin görüldüğü gibi solda). Duodenum ince bağırsağın ilk kısmıdır ve midenin son kısmına bağlanır.
- Toparlama yardımıyla karaciğeri hayvan kafasına doğru kaldırın ve ince bağırsak kısmını hafifçe çekin. Ortak safra kanalının distal kısmını daha iyi görüntülemek için ince bağırsağın iki yan ucunu 6-0 polipropilen dikişle sabitle.
3. Şiddetli akut pankreatit indüksiyonu
- Retrograd infüzyonun karaciğere sızmasını önlemek için proksimal ortak safra kanalını geçici olarak bir mikrovessel klipsle tıkayın. Ortak safra kanalı duodenumun karaciğer tarafında görülebilir ve duodenum ile birleştiği yer beyaz görünecektir. Organı karın boşluğundan dışarı maruz bırak.
- 0,54 mm polietilen tüpe bağlı 0,4 mm'lik bir iğne ile ortak safra kanalına erişmek için periampullary bölgesini (ince bağırsak duvarının beyazımsı kısmı) delin.
- 8-0 ile distal ortak safra kanalının geçici tıkanıklığını yapın sodyum taurocholate çözeltisinin duodenuma sızmasını önlemek için dikiş.
- İnfüzyon pompasını başlatın ve 3 dakika boyunca 10 μL/10 g vücut ağırlığı sabit bir hızda% 2,5 sodyum taurokolat çözeltisi (% 0,9 salin ile seyreltilmiş) infüzyon programla.
- İnfüzyondan sonra, mikrovessel klipsini çıkarın, geçici 8-0 dikiş ve safranın fizyolojik akışını yeniden inşa etmek için safra pankreas kanalından enjeksiyon iğnesi.
- Sonunda, karnı 6-0 nonabsorbent monofilament polipropilen dikiş ile dikin. Laparotomi ile son dikiş arasındaki süre en fazla 30 dk olmalıdır (bkz. Şekil 1).
- Ameliyattan sonra, hayvanları odun talaşları ve su ve yiyecek reklam libitum ile kaplı polietilen kutularda barındırın.
- Kontrol farelerini deneysel farelerle aynı şekilde tedavi edin, ancak infüzyonun sadece salinlerden oluştuğundan emin olun. Cerrahi prosedürü ve salin çözeltisinin infüzyonunu (10 mL/dk, 3 dakika boyunca) bir kontrol grubunda (SHAM) gerçekleştirerek ameliyat ve kanülasyonun neden olduğu enflamatuar önyargıyı ortadan kaldırın.
- Tramadol 12.5 mg/kg subkutan olarak her 8 saatte bir kullanın, ameliyat sonrası iyileşmeden sonra başlayarak.
4. Analiz yöntemleri
- AP indüksiyondan 12 saat sonra, yörüngesel pleksus yoluyla yaklaşık 250 μL kan toplamak için hayvanları ksilazin (10 mg / kg) ve ketamin (80 mg / kg) ile uyuşturun.
- Cildi yavaşça sırtta tutun, göz küresinin hafif bir çıkıntısını teşvik edin ve gözü yukarı bakacak şekilde konumlandırın.
- Hayvanın gözüne lokal anestezi içeren bir damla göz merhemi aşıla.
- Kılcal borunun ucunu gözün medial köşesine yerleştirin ve ~30°-45° açıyla göz küresinin altına hafifçe yerleştirin. Kan akışı başlayana kadar kılcal boruyu döndürün. Prosedür için güç kullanmanın gerekli olmadığını unutmayın.
- Koleksiyon bittikten sonra, gazlı bezle hafif sıkıştırma ile göz kapaklarını kapalı tutarak homeostazdan emin olun. Kılcal boruyu keskinlik kabına atın19.
- Serumu santrifüjle (700 x g, 15 dk) ve amilaz ve IL-6 dosing için süpernatantı stokla (adım 4.7 ve 4.8).
- Fareleri CO2 boğulması ile ötenazi.
- Periton boşluğuna 4 mL buz gibi 1x PBS enjekte etmek için 27 G iğne kullanın. Karın derisini 10'a katladı ve iğnenin herhangi bir organı delmemek için peritonda yavaşça itilmesini sağlayın. Enjeksiyondan sonra, peritona yapışılan hücreleri çıkarmak için peritona 10 s boyunca hafifçe masaj yapın.
- Makas ve cımbız kullanarak, iç deride küçük bir kesim (0,5 cm) yapın ve karın boşluğunu ortaya çıkarmak için kas yapın. Peritona bir ampul pipeti yerleştirin ve sıvıyı toplayın. Yağ dokusunu veya diğer organları aspire etmemeye dikkat edin.
- Mümkün olduğunca fazla sıvı toplayın ve toplanan hücre süspansiyonlarını buzda tutulan tüplere biriktirin. Ampul pipetini keskinlik kabına atın20. Periton sıvısını (250 x g, 5 dk) santrifüj edin ve IL-6 dosing için süpernatantı stokla (adım 4,9).
- Duodenuma (<5mm) bitişik pankreas bölgesini toplayın.
- Pankreası% 10 formalin ile sabitleyerek işleyin ve parafin içine ekleyin.
- Işık mikroskopisi altında histopatolojik analizler için slaytları hematoksilin ve eozin ile lekeleyin. AP'nin kapsamını değerlendirmek için Schmidt'in protokol21'ini (pankreas ödemi, acinar hücre, yaralanma/nekroz, pankreas iltihabı) kullanın.
- Amilaz (U/dL) ürününün önerilerine göre piyasada bulunan kitleri kullanarak ölçün.
- Il-6'yı, üreticinin önerilerine göre ticari kitler kullanarak Luminex testleriyle ölçün.
- 4.1 ve 4.4 adımlarında elde edilen serum ve periton sıvısı süpernatantını gerekirse -80 °C'de bir dondurucuda saklayın.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Pankreatit şiddeti Schmidt'in ölçeğine göre 0-3 arasında puanlanmıştır21 burada sıfır yokluğa karşılık gelir, 1 hafif bir varlığa karşılık gelir (%<25), 2 ılımlı bir varlığa karşılık gelir (%25 ila 50) ve 3 yoğun bir varlığa karşılık gelir (%> 50) (Tablo 1). Yapılan ölçümler plazma amilaz aktivitesi, pankreas ödemi, acınar hücre, yaralanma/nekroz, pankreas iltihabı (H&E-lekeli bölümlerin histoloji analizi ile) ve serum ve PerC sıvısında IL-6 sitokin konsantrasyonu olarak belirlendi. 12 saat şiddetli AP'den sonra, APTA grubu serum amilaz konsantrasyonunda (6194 ± 336.7 U/dL), sham grubuna kıyasla (3845 ± 135.7 U/dL) bir artış gösterdi. Aynı zamanda APTA grubu serum ve PerC sıvısında IL-6 sitokin konsantrasyonunda artış göstermiştir (Şekil 2). Şekil 3'te sham ve APTA grubunun temsili hematoksilin-eosin lekesi gösterdir.
Şekil 1: C57BL/6 farelerde % 2,5 sodyum taurokolat ile şiddetli akut pankreatit indüksiyon şeması. (A) safra kesesi; (B) ortak safra kanalı; (C) pankreas kanalı; (D) portal damar; (E) mikrovessel klips; (F) delinme bölgesi (polietilen tüpe bağlı ve infüzyon pompasına bağlı iğne); (G) ortak safra kanalında geçici iğne fiksasyonu. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 2: 12 saat şiddetli akut pankreatitten sonra temsili sonuçlar. (A) Hayvanın serum amilaz konsantrasyonu (U/dL). (B) Serum ve PerC sıvısında IL-6 sitokin konsantrasyonu. Gruplar arasındaki farklar, APTA'nın sham (n=9/ grubu) ≠ durumunda, eşleşmeyen t-test analizi * p <0.05) ile değerlendirildi. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
| Interstisyel ödem | enflamatuar infiltrasyon | Parankim nekrozu | Parankim kanaması | |
| SHAM | 1±0* | 0.0 | 0.0 | 0.0 |
| APTA | 3±0* | 3±0 | 3±0 | 3±0 |
| *P<0,05 eğer SHAM≠APTA. |
Tablo 1: 12 saat şiddetli AP sonrası pankreas dokusunda histolojik değişiklikler. Pankreas Schmidt'in ölçeğine göre işlendi ve analiz edildi21. Sonuçlar SEM ± ortalama olarak ifade edilmiş ve gruplar arasındaki farklar Öğrenci t testi ile değerlendirilmiştir. * apta SHAM<≠ ise 0,05; (n=9/grup).
Şekil 3: 12 saat şiddetli AP'den sonra pankreas dokusunda representativehematoksilin-eozin lekesi. (A) SHAM ve (B) APTA pankreas dokusunda histolojik değişiklikler (Hematoksilin-Eosin lekelenmesi- 40x büyütme). Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Retrograd sodyum taurokolat infüzyonu ile akut pankreatit indükleme yöntemi sıçanlarda zaten gösterilmiştir22,23,24. 2008, 2010 ve 2015'te yayınlanan üç benzer eser, protokol için referans olarak görev yaptı3,14,15. Bu çalışmada, bu yöntemi C57BL /6 farelerde yeniden üretmek için tüm kritik adımları ve doğrulamak için bazı olasılıkları listeleyeceğiz.
Bu testte kritik bir adım, karaciğere sodyum taurokolat reflüden kaçınmak için hilum seviyesindeki safra kanalını bir mikrovessel klipsle (adım 3.1) bloke etmektir. Portal damar kanalın yanında olduğundan (Şekil 1D) bu adım çok dikkat gerektirir, bu nedenle birlikte engellememeye özen göstermelisiniz. İğne sadece en distal kanal kısmına yerleştirilmelidir. Kanala derinlemesine sokulursa, asitin glandüler parenkime ve/veya diğer kanallara taşmasıyla yırtılmasına neden olabilir14. Ortak safra kanalının tıkanmasını önlemek için polietilen tüpün içinde hava olup olmadığını kontrol edin.
Bu model fare karnında bir kesi gerektirir. Canüllerin pankreas kanalı deliğinden yerleştirilmesi deneyim gerektirir, ancak bu eğitimle elde edilebilir15,25. Bu modeldeki pankreatit şiddetinin orantılı olarak konsantrasyona, infüzyonun hacmine, infüzyonun basıncına ve AP indüksiyon zamanına bağlı olduğunu vurgulamak önemlidir. Bu nedenle, kontrollü hacim ve basınca sahip sabit bir infüzyon makinesi kullanılmalıdır.
Bu çalışma için, 3 dakika ve sürekli basınç için 10 μL / dk infüzyon hızı ile% 2.5 konsantrasyonu standartlaştırdık. AP'nin 12 saatinde, pankreas dokularında artmış inflamatuar parametreler ve nekroz gözlendi ve hayvanlar AP indüksiyonu sonrası 16 saat içinde öldü.
AP'nin ana nedenleri alkol tüketimi veya safra taşları olsa da, bu modeller deneysel olarak tekrarlanabilir değildir26. Şu anda, farelerde AP indüksiyonu için en çok kullanılan protokol, 1 saat aralıklarla 7 intraperitoneal serulein enjeksiyonu (50 μg / kg vücut ağırlığı) içerir27. Cerulein hafif veya orta derecede akut pankreatit indükleyen için de kullanılmıştır. Bu modeldeki değişkenlik, klinik morbidite ve mortaliteyi veren hastalığın yıkıcı etkilerinin incelenmesinde kullanımını sınırlar10. Kısa sürede yüksek mortaliteyi tetikleyen modeller, yeni ilaçların veya müdahalelerin etkinliğini değerlendirebilecekleri için şiddetli AP (nekrotizasyon) çalışması için geçerlidir. Bu modeller arasında genç dişi kemirgenlerde (4 ila 6 hafta arasında) kolin eksikliği olan bir diyet28 ve L-arginin (örneğin, Farelerde 3 x 3 g/kg veya 2 x 4 g/kg) bazlı akut pankreatit indüksiyonu, ancak AP'yi indükleyen L-arginin uygun dozu her laboratuvar tarafından ve her fare zorlanması tarafından test edilmelidir29. 2015 yılında yapılan bir çalışma, düktal taurokolat infüzyonunun ardından distal yaygın safra yolu ligasyonunun farelerde şiddetli, nekrotik bir pankreatit modeline yol açtığını göstermiştir3. Ancak bu model geri dönüşü olmayan durumu nedeniyle ilaç etkinliğini ve müdahalelerini test etmek için yararlı değildir.
Bu çalışmada bulunan sonuçlar serum amilaz konsantrasyonunun yükselmesi ve IL-6'nın hastalığın ilerlemesi ile ilişkili olması gibi yeni literatürle ilişkilidir. Gelecekte, TNF-α, IL-1β ve miyeoperoksidaz gibi proteinlerin ölçümünün şiddetli akut pankreatit için klinik bir prognostik parametre olması mümkündür30,31,32.
Sonuç olarak, bu çalışmada kullanılan protokol, sodyum taurokolatın doğrudan ortak safra kanalına infüzyonu ile farelerde AP'yi indüklemek için kullanılan protokol, pankreas nekrozu ile şiddetli akut pankreatit ile sonuçlanır. serum ve periton sıvısında IL-6 sitokin yüksekliği ile indüksiyondan sonra 12 saat içinde bile gözlemlenebilen ve öldürücülüğü yüksek olan doku (16 saat içinde %100 mortalite, veriler gösterilmedi).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.
Acknowledgments
Yazarlar, São Paulo Üniversitesi Tıp Kliniği'ndeki Mezuniyet Sonrası Programı sayesinde; Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) ve São Paulo Üniversitesi Tıp Fakültesi (FMUSP).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.4 mm needle | INTRAG MEDICAL TECH | 90183210 | 30G |
| 0.54 mm polyethylene tube | Tygon | 730010 | - |
| Styrofoam block | - | - | - |
| masking tape for mounting the mouse | Missner | 1236 | - |
| Infusion pump scheduled to 10µL / min. | Havard aparatus-Peristaltic Pump Series | MA1 55-7766 | Model 66 Small Peristaltic |
| Scissors and forceps | |||
| Antiseptic providine iodine | Pfizer | 12086OR | antisepsis |
| 70% ethanol | SIGMA | 459836 | Mix 700 mL 100% ethanol with 300 mL dH2O |
| Razor blade | Lord | bdk9a1ghk6 | For trichotomy |
| Sodium taurocholate | Sigma-Aldrich | 86339- 1G | CAS NUMBER- 345909-26-4 |
| microvessel clip | Medicon Surgical | 56.87.35 | Approximator, opening 4.0 mm, closing pressure 30 - 40 g |
| 6-0 prolene | Bioline | 5162 | Suture line |
| Ketamin NP (cloridrato de dextrocetamina) 50mg/mL | Cristália | ||
| Xilazine 2% | Syntec | ||
| Sterile saline solution (0.9% (wt/vol) saline) | Farmace | 105851 | |
| Methyl Blue | Sigma-Aldrich Chemicals | M5528 | |
| MILLIPLEX MAP Mouse Cytokine/Chemokine Magnetic Bead Panel - Immunology Multiplex Assay | MERCK | MCYTOMAG-70K | Simultaneously analyze multiple cytokine and chemokine biomarkers with Bead-Based Multiplex Assays using the Luminex technology, in mouse serum, plasma and cell culture samples. |
| Amylase Assay | Labtest | 11 | |
| Desmarres retractor 13-mm width |
ROBOZ | RS-6672 |
References
- Li, X., et al. Significantly different clinical features between hypertriglyceridemia and biliary acute pancreatitis: A retrospective study of 730 patients from a tertiary center. BMC Gastroenterology. 18 (1), 1-8 (2018).
- Rechreche, H., Abbes, A., Iovanna, J. L. Induction of antioxidant mechanisms in lung during experimental pancreatitis in rats. Indian Journal of Experimental Biology. 58 (5), 297-305 (2020).
- T, L., et al. Intraductal infusion of taurocholate followed by distal common bile duct ligation leads to a severe necrotic model of pancreatitis in mice. Pancreas. 44 (3), (2015).
- Botoi, G., Andercou, A. Interleukin 17-prognostic marker of severe acute pancreatitis. Chirurgia. 104 (4), 431-438 (2009).
- Li, D., Li, J., Wang, L., Zhang, Q. Association between IL-1beta, IL-8, and IL-10 polymorphisms and risk of acute pancreatitis. Genetics and Molecular Research. 14 (2), 6635-6641 (2015).
- Feng, C., et al. Effect of peritoneal lavage with ulinastatin on the expression of NF-kappaB and TNF-alpha in multiple organs of rats with severe acute pancreatitis. Experimental and Therapeutic Medicine. 10 (6), 2029-2034 (2015).
- Fang, D. Z., et al. Effects of sildenafil on inflammatory injury of the lung in sodium taurocholate-induced severe acute pancreatitis rats. International Immunopharmacology. 80, (2020).
- Ceranowicz, P., Cieszkowski, J., Warzecha, Z., Dembinski, A.
- Wan, M. H., et al. Review of experimental animal models of biliary acute pancreatitis and recent advances in basic research. HPB (Oxford). 14 (2), 73-81 (2012).
- Mayerle, J., Sendler, M., Lerch, M. M. Secretagogue (Caerulein) induced pancreatitis in rodents. Pancreapedia: The Exocrine Pancreas Knowledge Base. (1), (2013).
- Wang, N., et al. Resveratrol protects against L-arginine-induced acute necrotizing pancreatitis in mice by enhancing SIRT1-mediated deacetylation of p53 and heat shock factor 1. International Journal of Molecular Medicine. 40 (2), 427-437 (2017).
- Ma, Z. H., et al. Effect of resveratrol on peritoneal macrophages in rats with severe acute pancreatitis. Inflammation Research. 54 (12), 522-527 (2005).
- Souza, L. J., et al. Anti-inflammatory effects of peritoneal lavage in acute pancreatitis. Pancreas. 39 (8), 1180-1184 (2010).
- Perides, G., Acker, G. J. v, Laukkarinen, J. M., Steer, M. L. Experimental acute biliary pancreatitis induced by retrograde infusion of bile acids into the mouse pancreatic duct. Nature Protocols. 5 (2), 335-341 (2010).
- Wittel, U. A., et al. Taurocholate-induced pancreatitis: a model of severe necrotizing pancreatitis in mice. Pancreas. 36 (2), 9-21 (2008).
- Tao, L., Reese, T. A. Making mouse models that reflect human immune responses. Trends Immunology. 38 (3), 181-193 (2017).
- Vandamme, T. F. Use of rodents as models of human diseases. Journal of Pharmacy and Bioallied Science. 6 (1), 2-9 (2014).
- Song, H. K., Hwang, D. Y. Use of C57BL/6N mice on the variety of immunological researches. Laboratory Animal Research. 33 (2), 119-123 (2017).
- Bogdanske, J. J., Stelle, S. H. -V., Riley, M. V., Schiffman, B. M. Suturing Principles and Techniques in Laboratory Animal Surgery. 1st edition. (1), CRC Press. (2010).
- Ray, A., Dittel, B. N. Isolation of mouse peritoneal cavity cells. Journal of Visualized Experiments. (35), e1488 (2010).
- Schmidt, J., et al. A better model of acute pancreatitis for evaluating therapy. Annals of Surgery. 215 (1), 44-56 (1992).
- Liu, D. L., et al. Resveratrol improves the therapeutic efficacy of bone marrow-derived mesenchymal stem cells in rats with severe acute pancreatitis. International Immunopharmacology. 80, 106128 (2020).
- Yang, X. F., et al. Chaiqin chengqi decoction alleviates severe acute pancreatitis associated acute kidney injury by inhibiting endoplasmic reticulum stress and subsequent apoptosis. Biomedicine & Pharmacotherapy. 125 (12), 110024 (2020).
- Yang, X. F., et al. Chaiqin chengqi decoction alleviates severe acute pancreatitis associated acute kidney injury by inhibiting endoplasmic reticulum stress and subsequent apoptosis. Biomedicine & Pharmacotherapy. 125, 110024 (2020).
- Venglovecz, V., Z, R., Hegyi, P. The effects of bile acids on pancreatic ductal cells. Pancreapedia: The Exocrine Pancreas Knowledge Base. (1), (2019).
- Roberts, S. E., Akbari, A., Thorne, K., Atkinson, M., Evans, P. A. The incidence of acute pancreatitis: impact of social deprivation, alcohol consumption, seasonal and demographic factors. Alimentary Pharmacology and Therapeutics. 38 (5), 539-548 (2013).
- Lerch, M. M., Gorelick, F. S. Models of acute and chronic pancreatitis. Gastroenterology. 144 (6), 1180-1193 (2013).
- Nakamura, K., Fukatsu, K., Sasayama, A., Yamaji, T. An immune-modulating formula comprising whey peptides and fermented milk improves inflammation-related remote organ injuries in diet-induced acute pancreatitis in mice. Biosci Microbiota Food Health. 37 (1), 1-8 (2018).
- Kui, B., et al. New insights into the methodolgy of L-Arginine-induced acute pancreatitis. PLoS One. 10 (2), 011758 (2015).
- Xue, J., et al. Alternatively activated macrophages promote pancreatic fibrosis in chronic pancreatitis. Nature Communication. 6, 7158 (2015).
- Lesina, M., Wormann, S. M., Neuhofer, P., Song, L., Algul, H. Interleukin-6 in inflammatory and malignant diseases of the pancreas. Seminars in Immunology. 26 (1), 80-87 (2014).
- Rao, S. A., Kunte, A. R. Interleukin-6: An early predictive marker for severity of acute pancreatitis. Indian Journal of Critical Care Medicine. 21 (7), 424-428 (2017).
