Méthodes de collecte de lait pour souris et Muntjac cerfs de Reeves
Summary
Milk collection from animal models facilitates various research avenues: understanding passive immunity, identifying pathogens responsible for vertical transmission and, through the use of transgenic mice, even commercial production of proteins found in human breast milk. Here we illustrate a simple method for milk collection in mice and Reeves’ muntjac deer.
Abstract
Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen’s native host. Milk collection from animals allows scientists the opportunity to study many aspects of reproduction including vertical transmission, passive immunity, mammary gland biology, and lactation. Obtaining adequate volumes of milk for these studies is a challenging task, especially from small animal models. Here we illustrate an inexpensive and facile method for milk collection in mice and Reeves’ muntjac deer that does not require specialized equipment or extensive training. This particular method requires two researchers: one to express the milk and to stabilize the animal, and one to collect the milk in an appropriate container from either a Muntjac or mouse model. The mouse model also requires the use of a P-200 pipetman and corresponding pipette tips. While this method is low cost and relatively easy to perform, researchers should be advised that anesthetizing the animal is required for optimal milk collection.
Introduction
Les modèles animaux donnent un aperçu de la pathologie de la maladie qui ne peut être obtenu par une analyse in vitro. De fournir les résultats les plus efficaces, il est important d'utiliser un modèle animal qui est étroitement liée à la maladie et des espèces d'intérêt. Par exemple, le muntjac de l'Reeves (Muntiacus reevesi), un petit cerf Asie 1,2, et les souris transgéniques exprimant la protéine prion des cervidés (CerTgPrP) 3 sont des modèles animaux utiles pour les espèces de cervidés. Les deux espèces sont polyestrous, permettant l'année élevage, et donc une source constante pour les tissus et les fluides liés à la grossesse pour étudier les mécanismes spécifiques à la biologie des cervidés. Études de lait ont une vaste gamme d'applications qui sont plus simplement (et peu coûteuse) accomplis dans des modèles animaux que chez les humains. Les chercheurs peuvent étudier lait et le colostrum comme une source potentielle de 1) la transmission de maladies infectieuses, 2) des immunoglobulines transférés de la mère à la progéniture dans le dévepement de l'immunité passive 4 et 3) la lactoferrine, une protéine présente dans le lait maternel humain impliqué dans l'immunité passive que les chercheurs tentent actuellement de produire commercialement 5.
Collecte une quantité importante de lait des petits animaux peut s'avérer être une tâche difficile. Rogers propose une approche de la collecte du lait de rats 6, qui a ensuite été utilisés chez la souris. Depeters et Hovey proposé deux procédés pour la collecte du lait, l'une utilisant un vide manuellement généré produite par une ampoule de pipette en caoutchouc à l'aide d'une pipette Pasteur, et un second nécessitant la construction d'une unité de traite, qui est ensuite fixé à une source de dépression (par exemple comme un robinet) pour récolter le lait de la souris 7. Nous proposons ici une méthode simple et peu coûteuse pour la collecte du lait de la souris et le muntjac le cerf de Reeves, qui nécessite un équipement de laboratoire seulement facilement disponibles et les compétences techniques de base. Notre méthode donne des volumes suffisants de lait pour diversapplications.
Protocol
Representative Results
Discussion
Souris
Il ya plusieurs facteurs à prendre en considération lors de la collecte de lait d'une souris, y compris 1) le temps mis de côté pour la collecte, 2) la dose d'ocytocine administrée, 3) combien de chiots barrage est actuellement infirmière et 4) le montant de temps qui s'est écoulé depuis la mise bas au moment de la collecte. En utilisant des études précédentes que les lignes directrices, nous avons décidé d'optimiser les conditions pour la…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
These experiments were funded by the NIH grant #RAI093634A. We express immense gratitude to Jenny Powers, DVM, PhD, for her assistance in muntjac milking.
Materials
| Materials-Mouse | |||
| Name of Material/Reagent | Vendor | Catalog Number | Comments |
| Ketamine (KetaVed 100 mg/mL) (dose: 80-100 mg/kg) | MWI/Vedco | 011075 | |
| Xylazine (TranquiVed 100 mg/ml) (dose:5-10 mg/kg) | MWI/Vedco | NADA 139236 | |
| Eye lubricant | MWI/Apexa | 701013 | |
| Oxytocin (2 IU/kg) | Vet One | 501013 | |
| Materials- Muntjac | |||
| Name of Material/Reagent | Vendor | Catalog Number | Comments |
| Midazolam (1-2 mg/kg) | Amerisource Bergen Drug Corp | 924326 | optional: researcher can either use Midazolam on its own or BAM combination as an anesthetic |
| Butorphanol tartrate (Torbugesic) (0.45 mg/kg) | Fort Dodge Animal Health | NADA 135-780 | |
| Azaperone tartrate (0.25 mg/kg) | ZooPharm | ||
| Medetomadine HCl (0.07 mg/kg) | ZooPharm | ||
| Antipamezol hydrochloride (Antisedan) (dose: 0.25 mg/kg) | Orion Corporation | NADA 141-033 | |
| Oxytocin (10 IU/kg) | Vet One | 501013 | |
| Equipment- Mouse | |||
| Name of Equipment | Vendor | Catalog Number | Comments |
| P-200 Pipetman | Gilson | F123601 | |
| 200 μL pipette tips | Light Labs | B-2004-SH | |
| 1 ml syringes | MWI | 005427 | |
| 27 gauge needles | MWI | 002031 | |
| Equipment- Muntjac | |||
| Name of Equipment | Vendor | Catalog Number | Comments |
| 15 ml conical tubes | VWR | 21008-918 | |
| 22 gauge needles | MWI | 873 | |
| 3 ml luer lock syringes | MWI | 001377 |
Referencias
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- Pei, K., Taber, R., O’Gara, B., Wang, Y. Breeding cycle of the Formosan Reeves muntjac (Muntiacus reevesi micrurus) in northern Taiwan, Republic of China. Mammalia. 59 (2), 223-228 (1995).
- Browning, S. R. Transmission of prions from mule deer and elk with chronic wasting disease to transgenic mice expressing cervid PrP. J. Virol. 78 (23), 13345-13350 (2004).
- Van de perre, P. Transfer of antibody via mother’s milk. Vaccine. 21 (24), 3374-3376 (2003).
- Maden, C. Genetically modified mice produce human milk protein. BioNews. , (2009).
- Rodgers, C. T. Practical aspects of milk collection in the rat. Lab. Anim. 29 (4), 450-455 (1995).
- Depeters, E. J., Hovey, R. C. Methods for collecting milk from mice. J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 14 (4), 397-400 (2009).
- Knight, C. H., Maltz, E., Docherty, A. H. Milk yield and composition in mice: effects of litter size and lactation. 84 (1), 127-133 (1986).
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- Nishimori, K., Young, L. J., Guo, Q., Wang, Z., Insel, T. R., Matzuk, M. M. Oxytocin is required for nursing but is not essential for parturition or reproductive behavior. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93 (21), 11699-11704 (1996).
- Miller, B. F., Osborn, D. A., Lance, W. R., Howze, M. M., Warren, R. J., Miller, K. V. Butorphanol-azaperone-medetomidine for immobilization of captive white-tailed deer. 45 (2), 457-467 (2009).
