שיטות איסוף חלב לעכברים וריבס 'Muntjac צביים
Summary
Milk collection from animal models facilitates various research avenues: understanding passive immunity, identifying pathogens responsible for vertical transmission and, through the use of transgenic mice, even commercial production of proteins found in human breast milk. Here we illustrate a simple method for milk collection in mice and Reeves’ muntjac deer.
Abstract
Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen’s native host. Milk collection from animals allows scientists the opportunity to study many aspects of reproduction including vertical transmission, passive immunity, mammary gland biology, and lactation. Obtaining adequate volumes of milk for these studies is a challenging task, especially from small animal models. Here we illustrate an inexpensive and facile method for milk collection in mice and Reeves’ muntjac deer that does not require specialized equipment or extensive training. This particular method requires two researchers: one to express the milk and to stabilize the animal, and one to collect the milk in an appropriate container from either a Muntjac or mouse model. The mouse model also requires the use of a P-200 pipetman and corresponding pipette tips. While this method is low cost and relatively easy to perform, researchers should be advised that anesthetizing the animal is required for optimal milk collection.
Introduction
מודלים של בעלי החיים לספק תובנות לגבי הפתולוגיה מחלה שלא ניתן להשיג על ידי ניתוח במבחנה. כדי לספק את התוצאות יעילות ביותר, זה חשוב להשתמש במודל של בעלי חיים הקשור באופן הדוק למחלה והמינים של עניין. לדוגמא, muntjac 'ריבס (reevesi Muntiacus), צבאים קטנים אסיה 1,2, ועכברים מהונדסים המבטאים את חלבון cervid הפריון (CerTgPrP) 3 הם מודלים של בעלי חיים שימושיים למיני cervid. שני המינים הם polyestrous, המאפשרים גידול בכל ימות שנה, ולכן מקור עקבי לרקמות הקשורים להריון ונוזלים ללמוד מנגנונים ספציפיים בביולוגיה cervid. יש מחקרים על חלב מגוון רחב של יישומים, כי הם יותר פשוט (וזולים) השיגו במודלים של בעלי חיים מאשר בבני אדם. חוקרים יכולים לחקור חלב וקולוסטרום כמקור פוטנציאלי של 1 העברת מחלות מידבקת), 2) נוגדנים שהועברו מאם לצאצאים בdevelopment חסינות פסיבית 4 ו -3) לקטופרין, חלבון המצוי בחלב אם אנושי המעורב בחסינות פסיבית שחוקרים כעת מנסים לייצר באופן מסחרי 5.
איסוף כמות משמעותית של חלב מבעלי חיים קטנים יכול להוכיח להיות משימה קשה. רוג'רס הציע גישה לאיסוף חלב מחולדות 6, אשר לאחר מכן נעשה שימוש בעכברים. DePeters וHovey הציעו שתי שיטות לאיסוף חלב, אחד באמצעות ואקום שנוצר באופן ידני המיוצר על ידי הנורה פיפטה גומי המחובר לפיפטה פסטר, ושנייה המחייב את הבנייה של יחידת חליבה, אשר מחוברת אז למקור ואקום (כגון כרז) למסוק חלב עכבר 7. כאן אנו מציעים שיטה פשוטה, עלות נמוכה לאיסוף חלב משני עכברים והצבאים muntjac ריבס ', אשר דורש ציוד מעבדה רק זמין וכישורים טכניים בסיסיים. השיטה שלנו מניבה כמויות מספיקות של חלב לשונהיישומים.
Protocol
Representative Results
Discussion
עכבר
ישנם מספר גורמים לקחת בחשבון בעת איסוף חלב מעכבר, כולל 1) כמות הזמן להפריש עבור אוסף, 2) במינון של אוקסיטוצין מנוהל, 3) כמה גורי הסכר הוא כיום סיעוד ו4) הסכום זמן שחלף מאז המלטה בזמן איסוף המידע. שימוש במחקרים קודמים כ…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
These experiments were funded by the NIH grant #RAI093634A. We express immense gratitude to Jenny Powers, DVM, PhD, for her assistance in muntjac milking.
Materials
| Materials-Mouse | |||
| Name of Material/Reagent | Vendor | Catalog Number | Comments |
| Ketamine (KetaVed 100 mg/mL) (dose: 80-100 mg/kg) | MWI/Vedco | 011075 | |
| Xylazine (TranquiVed 100 mg/ml) (dose:5-10 mg/kg) | MWI/Vedco | NADA 139236 | |
| Eye lubricant | MWI/Apexa | 701013 | |
| Oxytocin (2 IU/kg) | Vet One | 501013 | |
| Materials- Muntjac | |||
| Name of Material/Reagent | Vendor | Catalog Number | Comments |
| Midazolam (1-2 mg/kg) | Amerisource Bergen Drug Corp | 924326 | optional: researcher can either use Midazolam on its own or BAM combination as an anesthetic |
| Butorphanol tartrate (Torbugesic) (0.45 mg/kg) | Fort Dodge Animal Health | NADA 135-780 | |
| Azaperone tartrate (0.25 mg/kg) | ZooPharm | ||
| Medetomadine HCl (0.07 mg/kg) | ZooPharm | ||
| Antipamezol hydrochloride (Antisedan) (dose: 0.25 mg/kg) | Orion Corporation | NADA 141-033 | |
| Oxytocin (10 IU/kg) | Vet One | 501013 | |
| Equipment- Mouse | |||
| Name of Equipment | Vendor | Catalog Number | Comments |
| P-200 Pipetman | Gilson | F123601 | |
| 200 μL pipette tips | Light Labs | B-2004-SH | |
| 1 ml syringes | MWI | 005427 | |
| 27 gauge needles | MWI | 002031 | |
| Equipment- Muntjac | |||
| Name of Equipment | Vendor | Catalog Number | Comments |
| 15 ml conical tubes | VWR | 21008-918 | |
| 22 gauge needles | MWI | 873 | |
| 3 ml luer lock syringes | MWI | 001377 |
Referencias
- Dueling, S. . Muntiacus reevesi. Animal Diversity Web. , (2004).
- Pei, K., Taber, R., O’Gara, B., Wang, Y. Breeding cycle of the Formosan Reeves muntjac (Muntiacus reevesi micrurus) in northern Taiwan, Republic of China. Mammalia. 59 (2), 223-228 (1995).
- Browning, S. R. Transmission of prions from mule deer and elk with chronic wasting disease to transgenic mice expressing cervid PrP. J. Virol. 78 (23), 13345-13350 (2004).
- Van de perre, P. Transfer of antibody via mother’s milk. Vaccine. 21 (24), 3374-3376 (2003).
- Maden, C. Genetically modified mice produce human milk protein. BioNews. , (2009).
- Rodgers, C. T. Practical aspects of milk collection in the rat. Lab. Anim. 29 (4), 450-455 (1995).
- Depeters, E. J., Hovey, R. C. Methods for collecting milk from mice. J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 14 (4), 397-400 (2009).
- Knight, C. H., Maltz, E., Docherty, A. H. Milk yield and composition in mice: effects of litter size and lactation. 84 (1), 127-133 (1986).
- Hedrich, H. J., Bullock, G. R. The laboratory mouse. , 735-736 (2004).
- Nishimori, K., Young, L. J., Guo, Q., Wang, Z., Insel, T. R., Matzuk, M. M. Oxytocin is required for nursing but is not essential for parturition or reproductive behavior. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93 (21), 11699-11704 (1996).
- Miller, B. F., Osborn, D. A., Lance, W. R., Howze, M. M., Warren, R. J., Miller, K. V. Butorphanol-azaperone-medetomidine for immobilization of captive white-tailed deer. 45 (2), 457-467 (2009).
