Metodi Latte di raccolta per topi e Reeves 'Muntjac
Summary
Milk collection from animal models facilitates various research avenues: understanding passive immunity, identifying pathogens responsible for vertical transmission and, through the use of transgenic mice, even commercial production of proteins found in human breast milk. Here we illustrate a simple method for milk collection in mice and Reeves’ muntjac deer.
Abstract
Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen’s native host. Milk collection from animals allows scientists the opportunity to study many aspects of reproduction including vertical transmission, passive immunity, mammary gland biology, and lactation. Obtaining adequate volumes of milk for these studies is a challenging task, especially from small animal models. Here we illustrate an inexpensive and facile method for milk collection in mice and Reeves’ muntjac deer that does not require specialized equipment or extensive training. This particular method requires two researchers: one to express the milk and to stabilize the animal, and one to collect the milk in an appropriate container from either a Muntjac or mouse model. The mouse model also requires the use of a P-200 pipetman and corresponding pipette tips. While this method is low cost and relatively easy to perform, researchers should be advised that anesthetizing the animal is required for optimal milk collection.
Introduction
Modelli animali forniscono informazioni patologia malattia che non può essere acquisita mediante analisi in vitro. Per fornire i risultati più efficaci, è importante utilizzare un modello animale che è strettamente correlata alla malattia e specie di interesse. Ad esempio, la Reeves 'muntjac (Muntiacus reevesi), un piccolo cervo asiatico 1,2, e topi transgenici che esprimono la proteina prionica cervide (CerTgPrP) 3 sono modelli animali utili per le specie di cervidi. Entrambe le specie sono polyestrous, che permette tutto l'anno di allevamento, e quindi una fonte costante per i tessuti e fluidi legate alla gravidanza per studiare meccanismi specifici di cervidi biologia. Studi di latte hanno una vasta gamma di applicazioni che sono più semplice (ed economico) compiute in modelli animali che nell'uomo. I ricercatori hanno potuto studiare il latte e il colostro come una potenziale fonte di 1) trasmissione di malattie infettive, 2) immunoglobuline trasferiti dalla madre alla prole in svipment dell'immunità passiva 4 e 3) lattoferrina, una proteina presente nel latte materno umano coinvolto nella immunità passiva che i ricercatori stanno tentando di produrre commercialmente 5.
La raccolta di una notevole quantità di latte proveniente da animali di piccola taglia può rivelarsi un compito difficile. Rogers ha proposto un metodo per raccogliere il latte da ratti 6, che è stato successivamente utilizzato in topi. DePeters e Hovey proposti due metodi per la raccolta del latte, uno con un aspirapolvere manualmente generata prodotta da una lampadina pipetta gomma collegata ad una pipetta Pasteur, e una seconda che richiede la costruzione di un gruppo di mungitura, che viene poi collegato ad una sorgente di vuoto (ad esempio come un rubinetto) per raccogliere il latte topo 7. Qui vi proponiamo un metodo semplice ed economico per la raccolta del latte da entrambi i topi e Reeves 'muntjac cervo, che richiede solo prontamente disponibili attrezzature di laboratorio e le competenze tecniche di base. Il nostro metodo produce quantità sufficienti di latte per varieapplicazioni.
Protocol
Representative Results
Discussion
Mouse
Ci sono diversi fattori da prendere in considerazione durante la raccolta del latte da un mouse, di cui 1) la quantità di tempo dedicato per la raccolta, 2) la dose di ossitocina somministrata, 3) quanti cuccioli la diga è attualmente infermieristica e 4) l'importo di tempo che è trascorso da quando parto al momento della raccolta. Utilizzando gli studi precedenti come linee guida, abbiamo deciso di ottimizzare le condizioni per la produzione di latte.
<p cl…Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
These experiments were funded by the NIH grant #RAI093634A. We express immense gratitude to Jenny Powers, DVM, PhD, for her assistance in muntjac milking.
Materials
| Materials-Mouse | |||
| Name of Material/Reagent | Vendor | Catalog Number | Comments |
| Ketamine (KetaVed 100 mg/mL) (dose: 80-100 mg/kg) | MWI/Vedco | 011075 | |
| Xylazine (TranquiVed 100 mg/ml) (dose:5-10 mg/kg) | MWI/Vedco | NADA 139236 | |
| Eye lubricant | MWI/Apexa | 701013 | |
| Oxytocin (2 IU/kg) | Vet One | 501013 | |
| Materials- Muntjac | |||
| Name of Material/Reagent | Vendor | Catalog Number | Comments |
| Midazolam (1-2 mg/kg) | Amerisource Bergen Drug Corp | 924326 | optional: researcher can either use Midazolam on its own or BAM combination as an anesthetic |
| Butorphanol tartrate (Torbugesic) (0.45 mg/kg) | Fort Dodge Animal Health | NADA 135-780 | |
| Azaperone tartrate (0.25 mg/kg) | ZooPharm | ||
| Medetomadine HCl (0.07 mg/kg) | ZooPharm | ||
| Antipamezol hydrochloride (Antisedan) (dose: 0.25 mg/kg) | Orion Corporation | NADA 141-033 | |
| Oxytocin (10 IU/kg) | Vet One | 501013 | |
| Equipment- Mouse | |||
| Name of Equipment | Vendor | Catalog Number | Comments |
| P-200 Pipetman | Gilson | F123601 | |
| 200 μL pipette tips | Light Labs | B-2004-SH | |
| 1 ml syringes | MWI | 005427 | |
| 27 gauge needles | MWI | 002031 | |
| Equipment- Muntjac | |||
| Name of Equipment | Vendor | Catalog Number | Comments |
| 15 ml conical tubes | VWR | 21008-918 | |
| 22 gauge needles | MWI | 873 | |
| 3 ml luer lock syringes | MWI | 001377 |
Referencias
- Dueling, S. . Muntiacus reevesi. Animal Diversity Web. , (2004).
- Pei, K., Taber, R., O’Gara, B., Wang, Y. Breeding cycle of the Formosan Reeves muntjac (Muntiacus reevesi micrurus) in northern Taiwan, Republic of China. Mammalia. 59 (2), 223-228 (1995).
- Browning, S. R. Transmission of prions from mule deer and elk with chronic wasting disease to transgenic mice expressing cervid PrP. J. Virol. 78 (23), 13345-13350 (2004).
- Van de perre, P. Transfer of antibody via mother’s milk. Vaccine. 21 (24), 3374-3376 (2003).
- Maden, C. Genetically modified mice produce human milk protein. BioNews. , (2009).
- Rodgers, C. T. Practical aspects of milk collection in the rat. Lab. Anim. 29 (4), 450-455 (1995).
- Depeters, E. J., Hovey, R. C. Methods for collecting milk from mice. J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 14 (4), 397-400 (2009).
- Knight, C. H., Maltz, E., Docherty, A. H. Milk yield and composition in mice: effects of litter size and lactation. 84 (1), 127-133 (1986).
- Hedrich, H. J., Bullock, G. R. The laboratory mouse. , 735-736 (2004).
- Nishimori, K., Young, L. J., Guo, Q., Wang, Z., Insel, T. R., Matzuk, M. M. Oxytocin is required for nursing but is not essential for parturition or reproductive behavior. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93 (21), 11699-11704 (1996).
- Miller, B. F., Osborn, D. A., Lance, W. R., Howze, M. M., Warren, R. J., Miller, K. V. Butorphanol-azaperone-medetomidine for immobilization of captive white-tailed deer. 45 (2), 457-467 (2009).
