תיקון של דגם פגם Calvarial הקריטי בגודל תאי שומן באמצעות נגזרת סטרומה נקטפו מן Lipoaspirate
Summary
פרוטוקול זה מתאר את הבידוד של שומן הנגזר מתאי סטרומה lipoaspirate ויצירת 4 calvarial פגם קריטי בגודל מ"מ להעריך התחדשות שלד.
Abstract
תיקון השלד Craniofacial והתחדשות מציעים את ההבטחה של יצירת רקמת דה נובו באמצעות גישה סלולרית מבוססת ניצול תאי גזע. תאי סטרומה שומן נגזר-(ASCs) הוכיחו להיות מקור שופע של תאי גזע multipotent מסוגלים לעבור התמיינות osteogenic, chondrogenic, adipogenic, וmyogenic. מחקרים רבים בחנו את פוטנציאל osteogenic של תאים אלה בגוף חי עם השימוש בחומרים ביולוגיים שונים פיגומים למסירה סלולרית. הוכח שעל ידי הניצול (חומצה גליקולית, לקטית-CO) osteoconductive, hydroxyapatite מצופה פולי (HA-PLGA) הפיגום seeded עם ASCs, פגם calvarial קריטי בגודלו, פגם שהוגדר על ידי חוסר היכולת שלה לעבור ספונטני ריפוי במשך החיים של בעלי החיים, יכול להיות יעיל להראות התחדשות גרמית חזקה. זה במודל vivo מדגים את בסיס גישות translational מטרה לחדש את רקמת העצם – הסלולרירכיב ומטריצה ביולוגית. שיטה זו משמשת כמודל ליישום הקליני האולטימטיבי של תא מוליד לקראת תיקון פגם רקמות ספציפית.
Protocol
Discussion
מאז הבידוד של שומן ממקור תאי סטרומה 2 מ lipoaspirate, התאים הללו מובחנים למגוון רחב של שושלות סלולריות. רקמת שומן היא ממקורות mesodermal ולכן, תאי סטרומה שומן המופקים multipotent צפוי להיות יעילים ביותר עם יישום כלפי שושלת mesodermal. היכולת ליצור רקמות שלד היא קריטית במיוחד לנוכח המ…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
ברצוננו להודות לד"ר ג'ורג' וCommons ד"ר דין Vistnes על התמיכה ושיתוף הפעולה שלהם במחקר שלנו. עבודה זו נתמכת על ידי המכון הלאומי למענקי מחקר דנטלי Craniofacial ו1 R21 DE019274-01, R01EB009689 וRC2 DE020771-02, האלון וקרן Hagey המעבדה לרפואת הרגנרציה ילדים לMTL ד"ר יון נתמך על ידי בית החולים סנט ג'וזף מרסי GME .
Materials
| Name of the reagent: | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| Lipoaspirate Harvest | |||
| PBS | Gibco | 10010-023 | |
| Hank’s Balanced Salt Solution | Cellgro | 21-023-CV | |
| Collagenase | Sigma | C6885-500MG | |
| Cell Strainer 100 μm | BD Falcon | 352360 | |
| Steri-top 500 ml .22 μm filter | Millipore | SCGPT05RE | |
| Calvarial Defect | |||
| Z500 Brushless MicromotorsUM50C | NSK | NSKZ500 | |
| Circular Knife 4.0 mm | Xemax Surgical | CK40 |
References
- Levi, B., James, A. W., Nelson, E. R. Human adipose-derived stromal cells heal critical size mouse calvarial defect. PLoS One. 5, (2010).
- Zuk, P. A., Zhu, M., Ashjia, P. Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells. Mol. Biol. Cell. 13, 4279-4295 (2002).
- Keefe, M. S., Keefe, M. A. An evaluation of the effectiveness of different techniques for intraoperative antibiotics into alloplastic implants for use in facial reconstruction. Arch Facial Plastic Surg. 11, 246-251 (2009).
- Mitchell, J. B., McIntosh, K., Zvonic, S. Immunophenotype of human adipose-derived cells: Temporal changes in stromal-associated and stem cell-associated markers. Stem Cells. 24, 376-385 (2006).
- Dominici, M., Blanc, K. L. e., Mueller, I. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stroma cells. The International Society for Cellular Therapy position statement. Cytotherapy. 8, 315-317 (2006).
- Cowan, C. M., Shi, Y. Y., Aalami, O. O. Adipose-derived adult stromal cells heal critical-size calvarial defects. Nat Biotechnol. 22, 560-567 (2004).
- Levi, B., Nelson, E. R., Li, S. Dura mater stimulates human adipose-derived stromal cells to undergo bone formation in mouse calvarial defects. Stem Cells. 29, 1241-1255 (2011).
- Phipps, M. C., Clem, W. C., Catledge, S. A. Mesenchymal stem cells responses to bone-mimetic electrospun matrices composed of polycaprolactone, collagen I and nanoparticulate hydroxyapatite. PLoS One. 6, (2011).
- Yuan, H., Zang, Z., Li, Y. Osteoinduction by calcium phosphate biomaterials. J. Mater. Sci. Mater. Med. 9, 723-726 (1998).
- Wei, G., Jun, Q., Giannobile, W. V. The enchancement of osteogenesis by nano-fibrous scaffolds incorporating rhBMP-7 nanospheres. Biomaterials. 28, 2087-2096 (2007).
- Li, C., Verpari, C., Jin, H. J. Electrospun silk-BMP-2 scaffolds for bone tissue engineering. Biomaterials. 27, 3115-3124 (2006).
- Zhang, Y., Fan, W., Nothdurft, L. In vitro and in vivo evaluation of adenovirus combined silk fibroin scaffolds for bone morphogenetic protein-7 gene delivery. Tissue Eng Part C Methods. 17, 789-797 (2011).
- Levi, B., Hyun, J. S., Nelson, E. R. Non-integrating knockdown and customized scaffold design enhances human-adipose-derived stem cells in skeletal repair. Stem Cells. 29, 21028-21029 (2011).
