Ремонт критического размера дефекта свода черепа Модель Используя полученные из жировой ткани стромальных клеток, полученных из Lipoaspirate
Summary
Этот протокол описывает выделение жировой ткани стромальных клеток, полученных из lipoaspirate и создание 4 мм критического размера дефекта свода черепа для оценки скелетных регенерации.
Abstract
Черепно-лицевой скелет ремонт и восстановление открывает перспективы De Novo ткани образование через ячейку подход, основанный на использовании стволовых клеток. Жировая стромальных клеток, полученных (ИСС) оказались богатым источником мультипотентных стволовых клеток, способных к остеогенной, хондрогенной, адипогенной, и миогенной дифференциации. Многие исследования изучили остеогенных потенциал этих клеток в естественных условиях с использованием различных биоматериалов леса для сотовых доставки. Было показано, что, используя остеокондуктивные, гидроксиапатит покрытые поли (молочной-со-гликолевой кислоты) (HA-PLGA) эшафоте семенами с ИСС, критический размер дефекта свода черепа, дефект, который определяется его неспособностью спонтанному исцеление в течение всего срока животного, могут быть эффективно показать надежные костной регенерации. Это, в естественных условиях модель демонстрирует основы поступательного подходов, направленных на регенерацию костной ткани – сотовыйкомпоненты и биологические матрицы. Этот метод служит моделью для окончательного клинического применения клеток-предшественников к ремонту конкретного дефекта ткани.
Protocol
Discussion
С изоляцией из жировой ткани стромальные клетки 2 от lipoaspirate, эти клетки были дифференцированы на широкий спектр клеточных линий. Жировая ткань из мезодермальных происхождение и, следовательно, мультипотентных полученных из жировой ткани стромальные клетки, вероятно, будет наибо…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Мы хотели бы поблагодарить д-р Джордж общин и доктор Дин Vistnes за их поддержку и сотрудничество наших исследований. Работа выполнена при поддержке Национального института стоматологических и черепно-лицевых исследований дает 1 DE019274 R21-01, R01EB009689 и RC2 DE020771-02, Oak Foundation и Hagey лаборатории детской регенеративной медицины в MTL д-р Хен поддерживается Saint Joseph Mercy Hospital GME .
Materials
| Name of the reagent: | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| Lipoaspirate Harvest | |||
| PBS | Gibco | 10010-023 | |
| Hank’s Balanced Salt Solution | Cellgro | 21-023-CV | |
| Collagenase | Sigma | C6885-500MG | |
| Cell Strainer 100 μm | BD Falcon | 352360 | |
| Steri-top 500 ml .22 μm filter | Millipore | SCGPT05RE | |
| Calvarial Defect | |||
| Z500 Brushless MicromotorsUM50C | NSK | NSKZ500 | |
| Circular Knife 4.0 mm | Xemax Surgical | CK40 |
References
- Levi, B., James, A. W., Nelson, E. R. Human adipose-derived stromal cells heal critical size mouse calvarial defect. PLoS One. 5, (2010).
- Zuk, P. A., Zhu, M., Ashjia, P. Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells. Mol. Biol. Cell. 13, 4279-4295 (2002).
- Keefe, M. S., Keefe, M. A. An evaluation of the effectiveness of different techniques for intraoperative antibiotics into alloplastic implants for use in facial reconstruction. Arch Facial Plastic Surg. 11, 246-251 (2009).
- Mitchell, J. B., McIntosh, K., Zvonic, S. Immunophenotype of human adipose-derived cells: Temporal changes in stromal-associated and stem cell-associated markers. Stem Cells. 24, 376-385 (2006).
- Dominici, M., Blanc, K. L. e., Mueller, I. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stroma cells. The International Society for Cellular Therapy position statement. Cytotherapy. 8, 315-317 (2006).
- Cowan, C. M., Shi, Y. Y., Aalami, O. O. Adipose-derived adult stromal cells heal critical-size calvarial defects. Nat Biotechnol. 22, 560-567 (2004).
- Levi, B., Nelson, E. R., Li, S. Dura mater stimulates human adipose-derived stromal cells to undergo bone formation in mouse calvarial defects. Stem Cells. 29, 1241-1255 (2011).
- Phipps, M. C., Clem, W. C., Catledge, S. A. Mesenchymal stem cells responses to bone-mimetic electrospun matrices composed of polycaprolactone, collagen I and nanoparticulate hydroxyapatite. PLoS One. 6, (2011).
- Yuan, H., Zang, Z., Li, Y. Osteoinduction by calcium phosphate biomaterials. J. Mater. Sci. Mater. Med. 9, 723-726 (1998).
- Wei, G., Jun, Q., Giannobile, W. V. The enchancement of osteogenesis by nano-fibrous scaffolds incorporating rhBMP-7 nanospheres. Biomaterials. 28, 2087-2096 (2007).
- Li, C., Verpari, C., Jin, H. J. Electrospun silk-BMP-2 scaffolds for bone tissue engineering. Biomaterials. 27, 3115-3124 (2006).
- Zhang, Y., Fan, W., Nothdurft, L. In vitro and in vivo evaluation of adenovirus combined silk fibroin scaffolds for bone morphogenetic protein-7 gene delivery. Tissue Eng Part C Methods. 17, 789-797 (2011).
- Levi, B., Hyun, J. S., Nelson, E. R. Non-integrating knockdown and customized scaffold design enhances human-adipose-derived stem cells in skeletal repair. Stem Cells. 29, 21028-21029 (2011).
