Lipoaspirate에서 수확 지방 - 파생 Stromal 셀을 사용하여 임계 크기 Calvarial 결함 모델의 수리
Summary
이 프로토콜은의 고립을 설명 지방 – 파생 lipoaspirate과 골격 재생을 평가하는 4mm 중요한 크기 calvarial 결함의 생성의 stromal 세포를.
Abstract
Craniofacial 골격 수리 및 재생은 줄기 세포를 이용한 세포 기반의 접근 방식을 통해 드 노보 조직 형성의 약속을 제공합니다. 지방 – 파생 stromal 세포는 (ASCs) osteogenic, chondrogenic adipogenic 및 myogenic 차별화를 진행 할 수 multipotent 줄기 세포의 풍부한 소스로 입증되었습니다. 많은 연구가 세포 전달을위한 다양한 비계의 biomaterials를 이용하여 생체에서 이러한 세포의 osteogenic 가능성을 살펴 보았다. 이 입증 된 그 osteoconductive, 히드 록시 아파타이트 코팅 폴리 (락트산 – 공동 glycolic 산성) (HA-PLGA) ASCs있는 발판 시드, 중요한 크기 calvarial 결함, 자연 받아야하기위한 무능력으로 정의됩니다 결함을 활용하여 , 동물의 수명 동안 치료하면 효율적으로 강력한 뼈의 재생을 표시 할 수 있습니다. 생체 모델에서이 뼈 조직을 다시 생성하기위한 병진 접근의 기초를 보여줍니다 – 세포구성 요소 및 생물학적 매트릭스. 이 방법은 특정 조직 결함의 수리에 대한 전구 세포의 궁극적 인 임상 응용 프로그램에 대한 모델 역할을합니다.
Protocol
Discussion
의 고립 때문에 지방은 – 파생 lipoaspirate에서 stromal 세포 2를,이 세포는 세포 lineages 다양한으로 차별화되었습니다. 지방 조직은 mesodermal 기원에서이므로, multipotent 지방 파생 stromal 세포 가능성이 mesodermal 계보 (Lineage)에 대한 응용 프로그램 가장 효과적입니다. 골격 조직을 생성하는 기능을 기증 autograft에 대한 사이트 및 감염, 거부, 시간 3 이상 고장 등의 합성 재료의 고유 제한 부?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는 우리의 연구의 지원과 협력 박사 조지 커먼즈 박사 딘 Vistnes 감사드립니다. 세인트 조셉 머시 병원 GME에서 지원하는이 작품은 치과와 Craniofacial 연구 기금 1 R21 DE019274-01, R01EB009689 및 RC2 DE020771-02, MTL 박사 현에 소아 재생 의료에 대한 오크 재단과 Hagey 연구소의 국립 연구소에 의해 지원됩니다 .
Materials
| Name of the reagent: | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| Lipoaspirate Harvest | |||
| PBS | Gibco | 10010-023 | |
| Hank’s Balanced Salt Solution | Cellgro | 21-023-CV | |
| Collagenase | Sigma | C6885-500MG | |
| Cell Strainer 100 μm | BD Falcon | 352360 | |
| Steri-top 500 ml .22 μm filter | Millipore | SCGPT05RE | |
| Calvarial Defect | |||
| Z500 Brushless MicromotorsUM50C | NSK | NSKZ500 | |
| Circular Knife 4.0 mm | Xemax Surgical | CK40 |
References
- Levi, B., James, A. W., Nelson, E. R. Human adipose-derived stromal cells heal critical size mouse calvarial defect. PLoS One. 5, (2010).
- Zuk, P. A., Zhu, M., Ashjia, P. Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells. Mol. Biol. Cell. 13, 4279-4295 (2002).
- Keefe, M. S., Keefe, M. A. An evaluation of the effectiveness of different techniques for intraoperative antibiotics into alloplastic implants for use in facial reconstruction. Arch Facial Plastic Surg. 11, 246-251 (2009).
- Mitchell, J. B., McIntosh, K., Zvonic, S. Immunophenotype of human adipose-derived cells: Temporal changes in stromal-associated and stem cell-associated markers. Stem Cells. 24, 376-385 (2006).
- Dominici, M., Blanc, K. L. e., Mueller, I. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stroma cells. The International Society for Cellular Therapy position statement. Cytotherapy. 8, 315-317 (2006).
- Cowan, C. M., Shi, Y. Y., Aalami, O. O. Adipose-derived adult stromal cells heal critical-size calvarial defects. Nat Biotechnol. 22, 560-567 (2004).
- Levi, B., Nelson, E. R., Li, S. Dura mater stimulates human adipose-derived stromal cells to undergo bone formation in mouse calvarial defects. Stem Cells. 29, 1241-1255 (2011).
- Phipps, M. C., Clem, W. C., Catledge, S. A. Mesenchymal stem cells responses to bone-mimetic electrospun matrices composed of polycaprolactone, collagen I and nanoparticulate hydroxyapatite. PLoS One. 6, (2011).
- Yuan, H., Zang, Z., Li, Y. Osteoinduction by calcium phosphate biomaterials. J. Mater. Sci. Mater. Med. 9, 723-726 (1998).
- Wei, G., Jun, Q., Giannobile, W. V. The enchancement of osteogenesis by nano-fibrous scaffolds incorporating rhBMP-7 nanospheres. Biomaterials. 28, 2087-2096 (2007).
- Li, C., Verpari, C., Jin, H. J. Electrospun silk-BMP-2 scaffolds for bone tissue engineering. Biomaterials. 27, 3115-3124 (2006).
- Zhang, Y., Fan, W., Nothdurft, L. In vitro and in vivo evaluation of adenovirus combined silk fibroin scaffolds for bone morphogenetic protein-7 gene delivery. Tissue Eng Part C Methods. 17, 789-797 (2011).
- Levi, B., Hyun, J. S., Nelson, E. R. Non-integrating knockdown and customized scaffold design enhances human-adipose-derived stem cells in skeletal repair. Stem Cells. 29, 21028-21029 (2011).
