Lipoaspirate itibaren hasat Yağ kaynaklı stromal hücreler kullanarak Kritik ölçekli Kalvaryum Defekt Model tamiri
Summary
Bu protokol izolasyonu açıklar adipoz-türetilmiş lipoaspirate ve iskelet rejenerasyon değerlendirmek için 4 mm kritik ölçüdeki kalvaryal defekt oluşturmadan stromal hücreler.
Abstract
Kraniyofasiyal iskelet onarımı ve yenilenmesi kök hücreleri kullanan bir hücre-temelli bir yaklaşım ile de novo doku oluşumu vaadi sunar. Yağ-kaynaklı stromal hücreler (TSK) osteojenik, kondrojenik adipojenik ve miyojenik farklılaşma geçiren yeteneğine multipotent kök hücrelerin bol bir kaynağı olduğu kanıtlanmıştır. Pek çok çalışma hücresel teslim için çeşitli yapı iskelesi biyomalzemelerin kullanımı ile in vivo olarak bu hücrelerin osteojenik potansiyel araştırdılar. Bu gibi olduğu gösterildi bir osteokondüktif, hidroksiapatit-kaplı poli (laktik-ko-glikolik asit) (PLGA-HA) TSK ile iskele tohumlu, bir kritik boyutlu kalvaryal kusur, kendiliğinden geçmesi için kendi yetersizlik ile tanımlanan bir bozukluk kullanılarak , hayvanın ömrü boyunca şifa etkili sağlam kemik rejenerasyon göstermek olabilir. Bu in vivo modelde kemik dokusu yenilenmesine yönelik translasyonel yaklaşım esas göstermektedir – hücreselbileşeni ve biyolojik matrisi. Bu yöntem, bir doku spesifik kusurun tamir yönelik bir projenitör hücre nihai klinik uygulama için bir model olarak hizmet vermektedir.
Protocol
Discussion
Ve izolasyonu yağ olarak türetilmiş lipoaspirate dan stromal hücreleri 2, bu hücrelerin hücre soylarının çeşitli ayrışmıştır edilmiştir. Yağ dokusu mezodermal kökenlerden gelen ve bu nedenle, multipotent adipoz-kaynaklı stromal hücrelerin büyük olasılıkla bir mezodermal soy doğru uygulama ile en etkili olacaktır. İskelet doku oluşturmak için yeteneği verici bir otogreft için siteleri ve enfeksiyon, rejeksiyon ve zaman üzerinde 3 arızaları dahil sentetik malzemenin …
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Biz araştırma verdikleri destek ve işbirliği için Dr George Avam ve Dr Dean Vistnes teşekkür etmek istiyorum. Saint Joseph Mercy Hastane GME tarafından desteklenen bu çalışma Diş ve Kraniofasial Araştırma hibeleri 1 R21 DE019274-01, R01EB009689 ve RC2 DE020771-02, MTL Dr Hyun Pediatrik Rejeneratif Tıp Oak Vakfı ve Hagey Laboratuvarı Ulusal Enstitüsü tarafından desteklenmektedir .
Materials
| Name of the reagent: | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| Lipoaspirate Harvest | |||
| PBS | Gibco | 10010-023 | |
| Hank’s Balanced Salt Solution | Cellgro | 21-023-CV | |
| Collagenase | Sigma | C6885-500MG | |
| Cell Strainer 100 μm | BD Falcon | 352360 | |
| Steri-top 500 ml .22 μm filter | Millipore | SCGPT05RE | |
| Calvarial Defect | |||
| Z500 Brushless MicromotorsUM50C | NSK | NSKZ500 | |
| Circular Knife 4.0 mm | Xemax Surgical | CK40 |
References
- Levi, B., James, A. W., Nelson, E. R. Human adipose-derived stromal cells heal critical size mouse calvarial defect. PLoS One. 5, (2010).
- Zuk, P. A., Zhu, M., Ashjia, P. Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells. Mol. Biol. Cell. 13, 4279-4295 (2002).
- Keefe, M. S., Keefe, M. A. An evaluation of the effectiveness of different techniques for intraoperative antibiotics into alloplastic implants for use in facial reconstruction. Arch Facial Plastic Surg. 11, 246-251 (2009).
- Mitchell, J. B., McIntosh, K., Zvonic, S. Immunophenotype of human adipose-derived cells: Temporal changes in stromal-associated and stem cell-associated markers. Stem Cells. 24, 376-385 (2006).
- Dominici, M., Blanc, K. L. e., Mueller, I. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stroma cells. The International Society for Cellular Therapy position statement. Cytotherapy. 8, 315-317 (2006).
- Cowan, C. M., Shi, Y. Y., Aalami, O. O. Adipose-derived adult stromal cells heal critical-size calvarial defects. Nat Biotechnol. 22, 560-567 (2004).
- Levi, B., Nelson, E. R., Li, S. Dura mater stimulates human adipose-derived stromal cells to undergo bone formation in mouse calvarial defects. Stem Cells. 29, 1241-1255 (2011).
- Phipps, M. C., Clem, W. C., Catledge, S. A. Mesenchymal stem cells responses to bone-mimetic electrospun matrices composed of polycaprolactone, collagen I and nanoparticulate hydroxyapatite. PLoS One. 6, (2011).
- Yuan, H., Zang, Z., Li, Y. Osteoinduction by calcium phosphate biomaterials. J. Mater. Sci. Mater. Med. 9, 723-726 (1998).
- Wei, G., Jun, Q., Giannobile, W. V. The enchancement of osteogenesis by nano-fibrous scaffolds incorporating rhBMP-7 nanospheres. Biomaterials. 28, 2087-2096 (2007).
- Li, C., Verpari, C., Jin, H. J. Electrospun silk-BMP-2 scaffolds for bone tissue engineering. Biomaterials. 27, 3115-3124 (2006).
- Zhang, Y., Fan, W., Nothdurft, L. In vitro and in vivo evaluation of adenovirus combined silk fibroin scaffolds for bone morphogenetic protein-7 gene delivery. Tissue Eng Part C Methods. 17, 789-797 (2011).
- Levi, B., Hyun, J. S., Nelson, E. R. Non-integrating knockdown and customized scaffold design enhances human-adipose-derived stem cells in skeletal repair. Stem Cells. 29, 21028-21029 (2011).
