新生小鼠皮肤干细胞分化成生殖细胞<em在体外</em
Summary
在最近几年使用几种不同类型的成体干细胞，生殖细胞的体外培养方法中使用的形成已被证明。本文将直观地呈现新生小鼠干细胞分化的早期卵母细胞样细胞。
Abstract
生殖细胞的形成和分化研究历来非常困难的，因为低的细胞的数量和它们的位置深在胚胎发育。一个“封闭” 在体外系统的可用性可能证明是无价的，我们理解配子。形成的卵母细胞样细胞（OLCS）从成体干细胞，分离新生小鼠的皮肤，已被证明可以可视化在这个视频协议。由此产生的运行限值表达与卵母细胞，如Oct4的，瓦萨，BMP15和SCP3一致的各种标记。然而，他们依然无法接受由于未能完成减数分裂成熟或施肥。此协议将提供一个系统，是用于研究早期形成和分化成更加成熟的配子生殖细胞。在早期分化表达Oct4的（潜在的生殖细胞样细胞）的数量达到〜5％，但是目前的f万传彪，乔秀云，孔惠运行限值和条件仍然相对低效的。该协议是相对简单的，但应特别注意采取措施，确保起始细胞群体是健康和早日通过。
Introduction
在早期胚胎发育，配子发生，通过一系列的阶段，包括原始生殖细胞（PGC）的形成，迁移，并最终定植生殖腺嵴。在这段时间内，原始生殖细胞进行增殖和分化到越来越成熟配子1。从尿囊胚胎肠的基础，并最终最终殖民性腺脊沿背墙，原始生殖细胞迁移的事实使得他们极其困难的研究2。尽管在该领域的进步，试图了解胆囊癌的形成和分化的研究已阻碍了其有限的数量，位置，和迁徙的性质3,4。
在最近几年，胚胎干细胞已被证明有可能形成生殖细胞在体外 5,6。同样地，一些成体干细胞也被证明有可能形成生殖细胞FOLL由于在体外培养7-11。最近分离到新生小鼠皮肤干细胞体外分化成生殖细胞和早期阶段的卵母细胞12。在分化过程中的干细胞表达Oct4的子集增加，形成类似卵丘 – 卵母细胞复合物的结构。卵母细胞样细胞（运行限值）可以捡到的文化和自然的卵母细胞相比。使用这种文化运行限值和测量方法40-45微米获得卵母细胞，如Gdf9b，瓦萨，DAZL表示了类似的标记。至目前为止，运行限值和条件仍然不能成熟或受精12。
虽然运行限值和条件仍无法运作，用于形成这些运行限值和条件的协议仍可能有实用作为检测研究早期生殖细胞的形成和发展，内封闭在体外系统。所以原来的出版物讨论形成的OLC马蒂奇利用干细胞作为干细胞来源8胎猪皮肤。扩大这项研究PGC-早期形成的细胞诱导分化过程中被证明是如OCT4运行限值和条件和快递等PGC标记的前体，VASA，STELLA，C-KIT，DAZL 13。此数据支持的潜在利用此系统来研究生殖细胞的形成和分化的影响 。从新生小鼠皮肤形成的OLC使用的协议将被证明在这个视频文章。该协议提供了一个体外模型来研究生殖细胞的发育，可能提供了一种手段，阐明其增殖和分化的重要因素。
Protocol
Representative Results
Discussion
迄今为止，功能运行限值和条件没有被开发使用一种完全的在体外测定。最近的一项研究由Hayashi 等。是能够产生后代从PGC细胞样细胞形成的体外和在体内进一步发展14传送。与ES细胞或诱导性多能干细胞，他们能够形成PGC类似细胞，当在体内移植后恢复开始成熟，受精，并用来产生后代14。这表明，从各种来源的干细胞有可能正确的条件下，形成?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
pwd是支持由加拿大研究院（CIHR）健康研究奖学金和CIHR资助在西方大学的杰拉尔德·基德。笔者也想承认巨浪李圭尔夫大学的帮助，在这里提出的协议的发展。
Materials
| Name of Reagent/Material | Company | Catalog Number | Comments |
| DMEM/F12 | Invitrogen | 12500 | |
| B27 | Invitrogen | 17504044 | |
| EGF | Invitrogen | PHG0311 | |
| bFGF | Invitrogen | PHG0266 | |
| ITS | Invitrogen | 41400-045 | |
| BSA | Sigma | A-6003 | |
| Sodium Pyruvate | Invitrogen | 11360-070 | |
| Fetuin | Sigma | F3385 | |
| FSH | Sioux Biochemicals | 915 | |
| LH | Sioux Biochemicals | 925 | |
| M199 | Invitrogen | 31100-035 | |
| 24 well plates | Nunc | 144530 | |
| 10 cm dishes | VWR | 25384-088 | |
| 15 ml tubes | BD | 352095 |
References
- van den Hurk, R., Zhao, J. Formation of mammalian oocytes and their growth, differentiation and maturation within ovarian follicles. Theriogenology. 63, 1717-1751 (2005).
- Molyneaux, K. A., Stallock, J., Schaible, K., Wylie, C. Time-lapse analysis of living mouse germ cell migration. Dev. Biol. 240, 488-498 (2001).
- Lawson, K. A., Hage, W. J. Clonal analysis of the origin of primordial germ cells in the mouse. Ciba Found Symp. 182, 68-91 (1994).
- Ginsburg, M., Snow, M. H., McLaren, A. Primordial germ cells in the mouse embryo during gastrulation. Development. 110, 521-528 (1990).
- Hubner, K., Fuhrmann, G., et al. Derivation of oocytes from mouse embryonic stem cells. Science. 300, 1251-1256 (2003).
- Toyooka, Y., Tsunekawa, N., Akasu, R., Noce, T. Embryonic stem cells can form germ cells in vitro. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100, 11457-11462 (2003).
- Wang, L., Cao, J., et al. Oocyte-like Cells Induced from Mouse Spermatogonial Stem Cells. Cell Biosci. 2, 27 (2012).
- Dyce, P. W., Wen, L., Li, J. In vitro germline potential of stem cells derived from fetal porcine skin. Nat. Cell Biol. 8, 384-390 (2006).
- Danner, S., Kajahn, J., Geismann, C., Klink, E., Kruse, C. Derivation of oocyte-like cells from a clonal pancreatic stem cell line. Mol. Hum. Reprod. 13, 11-20 (2007).
- Cheng, X., Chen, S., Yu, X., Zheng, P., Wang, H. BMP15 gene is activated during human amniotic fluid stem cell differentiation into oocyte-like cells. DNA Cell Biol. 31, 1198-1204 (2012).
- Song, S. H., Kumar, B. M., et al. Characterization of porcine multipotent stem/stromal cells derived from skin, adipose, and ovarian tissues and their differentiation in vitro into putative oocyte-like cells. Stem Cells Dev. 20, 1359-1370 (2011).
- Dyce, P. W., Liu, J., et al. In vitro and in vivo germ line potential of stem cells derived from newborn mouse skin. PLoS One. 6, e20339 (2011).
- Linher, K., Dyce, P., Li, J. Primordial germ cell-like cells differentiated in vitro from skin-derived stem cells. PLoS One. 4, e8263 (2009).
- Hayashi, K., Ogushi, S., et al. Offspring from Oocytes Derived from in Vitro Primordial Germ Cell-Like Cells in Mice. Science. , (2012).
