Optimisé Ex-ovo Culture des embryons de poulet aux stades avancés de développement

Summary

Il peut être difficile de visualiser et d’accéder à l’embryon de poulet pendant le développement. Nous avons développé une méthode ex ovo qui est simple, rentable et qui peut facilement être utilisée dans une salle de classe ou un cadre de recherche. Cette méthode permet d’accéder à l’embryon dans les derniers stades du développement embryonnaire (HH 40).

Abstract

La recherche en anatomie, en embryologie et en biologie du développement s’est largement appuyée sur l’utilisation d’organismes modèles. Afin d’étudier le développement chez les embryons vivants, des organismes modèles, tels que le poulet, sont souvent utilisés. Le poulet est un excellent organisme modèle en raison de son faible coût et de son entretien minimal, mais il présente des défis d’observation car il est enfermé dans une coquille d’œuf opaque. Afin de bien voir l’embryon pendant qu’il se développe, la coquille doit être fenêtrée ou retirée. Des techniques de fenêtrage et d’ex ovo ont été développées pour aider les chercheurs dans l’étude du développement embryonnaire. Cependant, chacune des méthodes présente des limites et des défis. Nous présentons ici une technique simple et optimisée de culture ex ovo d’embryons de poulet qui permet d’observer le développement embryonnaire du stade HH 19 aux stades tardifs de développement (HH 40), lorsque de nombreux organes se sont développés. Cette technique est facile à adopter dans les classes de premier cycle et les laboratoires de recherche plus avancés où des manipulations d’embryons sont effectuées.

Introduction

L’ovoculture ex a joué un rôle important dans l’étude du développement du poulet^{1, 2}. Cette méthode de culture a été utilisée pour étudier les maladies neurologiques, le développement des membres, le développement craniofacial, et comme modèle pour étudier les malformations associées au diabète ^{3, 4, 5}.

Il existe de nombreuses variantes de la technique ex ovo. L’approche la plus courante consiste à utiliser une tasse en polystyrène^6,7,8 ou un bol en verre⁵. Dans ces méthodes, la tasse ou le bol est tapissé d’une pellicule plastique pour bercer l’embryon, un couvercle est placé su....

Protocol

Remarque: Toutes les fournitures sont énumérées dans le tableau 1.

1. Stockage du poulet embryons

1. Incuber des œufs de poule de la souche Gallus gallus horizontalement à 37 ^o C avec environ 40% d'humidité et tourner oeufs une ou deux fois par jour. Mise oeufs est important de prévenir l'embryon d'adhérer à la coquille.
2. Ne pas tourner l'œuf dans le 24 heures avant la mise en place de la culture contraire l'embryon sera situé ventrale à la masse de jaune et sera endommagé lors de l'ouverture de l'œuf à l'étape 3. En outre, garder les œufs à 4 ^o C degrés pour ....

Results

Cette ex ovo méthode permet pour l'observation des embryons de stade précoce de développement (HH 19/20) à un stade avancé de développement (HH 40-41) (figure 1a et 1b). Mise en place de la culture à HH 19-20 augmente de survie des embryons dans la culture. Avant la rotation de la tête (avant 53 HPF) de survie est très faible dans la culture et après l'étape 21, l'embryon a tendance à coller davantage à la coquille sur l'élimination de façon moins d'embryons intacts sont obtenu.......

Discussion

Ex ovo culture et de fenêtrage à la fois des avantages et des défis. Ici, nous comparons les avantages et les défis de la tasse de styromousse ex ovo et la méthode de fenêtrage à notre ex optimisé ovo méthode présentée ici. Notre méthode permet la manipulation et l'observation aisée de l'embryon de poulet aux derniers stades de développement et nos améliorations à l'ex ovo traditionnelle méthode ^{1, 2, 3} en font en outre très facile à utiliser dans les c.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Pénicilline/Streptomycine	Sigma	P4458	Faire de petites aliquotes pour éviter les épisodes de gel/dégel
Boîte de Pétri			9,5 cm x 9,5 cm
Pesée Bateau	Fischer Scientific	8732113	88 x 88 x 23 mm
Conteneur Ziplock	Ziplock	N/A	12 cm x 12 cm x 6 cm