Cervello Banking: Utilizzare al meglio il vostro campioni di ricerca

Summary

Banche del cervello e campionatura sistematica di materiale biologico costituisce la base per stereologia imparziale e massimizza il potenziale dei dati ottenuti da ogni campione.

Abstract

Tutti stereologia è un metodo per precisione ed efficienza stimare il numero totale dei neuroni (o tipo di cellula) in una data area di interesse¹. Per raggiungere questo obiettivo 60-10 sezioni sistematica dovrebbe essere sondato che copre l'intera struttura. Tipicamente si tratta di elaborazione 1 / 5 sezioni che lascia una notevole quantità di materiale non trasformato. Al fine di massimizzare il materiale, vi proponiamo un metodo poco costoso per conservare tessuto fissato come parte di un piano a lungo termine di stoccaggio di ricerca. Come tessuto è tagliato e lavorato per il desiderato macchia o anticorpi, si alternano sezioni dovrebbero essere sistematicamente messo in antigene conservare a -20 ° C per elaborazioni future. Utilizzando piastre da 24 pozzetti, le sezioni possono essere messi in ordine per il recupero futuro. Utilizzando questo metodo, i tessuti possono essere conservati e trattati per immunoistochimica nel corso degli anni.

Protocol

Parte 1: Pre-trattamento dei tessuti Tessuto deve essere ben perfusi con paraformaldeide, glutaraldeide, o formalina. Questo può essere raggiunto attraverso standard di perfusione transcardial tipicamente usato per raccogliere altri organi. Nel presente studio il soggetto era profondamente sedato con cloridrato di ketamina (10 mg / kg, im), eutanasia con una dose eccessiva di sodio pentobarbital (25 mg / kg, iv) e perfusi transcardially con 0,1 M PBS fino a completo dissanguato. Questa è seguita da una solu…

Discussion

Campionamento sistematico è un metodo poco costoso scopo di massimizzare il materiale di ricerca. Questa strategia di campionamento è stato progettato per rispettare le regole di stereologia imparziale che richiede il campionamento sistematico in tutta la regione. E 'fondamentale che l'ordine delle sezioni per ogni serie è mantenuta. Nel nostro laboratorio abbiamo utilizzato con successo questo metodo per il settore bancario sia criceto e non umani sezioni cervello dei primati. Finora abbiamo raccolto sezioni…

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
Ethylene glycol		Fisher	E178-4
Polyvinyl pyrrolidone		Fisher	BP431-500
Thermal Scientific Embedding Medium		Fisher