Beyin Bankacılık: Araştırma Örneklerinin En iyi şekilde

Summary

Beyin bankacılık ve biyolojik materyalin sistematik örnekleme tarafsız stereology temelini sağlar ve olası veri her numune elde edilen en üst düzeye çıkarır.

Abstract

Hakkında tarafsız stereology, doğru ve etkili bir şekilde belirli bir ilgi alanında toplam nöron sayısı (ya da diğer hücre tipi) tahmin etmek için bir yöntemdir¹. Bu hedefe ulaşmak için tüm yapıyı kapsayan 6-10 sistematik bölümden probed olmalıdır. Tipik olarak bu, önemli bir miktarda işlenmemiş malzeme yaprağı 1 / 5 bölüm işleme içerir. Malzeme maksimize etmek için, uzun vadeli bir depolama araştırma planının parçası olarak sabit doku korumak için ucuz bir yöntem öneriyoruz. Doku istenen leke veya antikor, alternatif bölümler için dilimlenmiş ve işlenmiş olarak sistematik ileride işlenmek üzere -20 ° C'de muhafaza antijen konulmalıdır. 24-kuyucuğu kullanma, bölümler gelecek alımı için yerleştirilebilir. Bu yöntemi kullanarak, doku saklanır ve yıl boyunca immünohistokimya için işlenmiş olabilir.

Protocol

Bölüm 1: Ön-işleme doku Doku paraformaldehid, glutaraldehid, ya da formalin ile perfüze edilmelidir. Bu, genellikle diğer organlarda hasat için kullanılan standart transcardial perfüzyon yoluyla elde edilebilir. Bu çalışmada bu konuda derin sodyum pentobarbital (25 mg / kg, iv), aşırı dozda ötenazi ketamin hidroklorür (10 mg / kg, im), sedasyon ve tamamen exsanguinated kadar 0.1 M PBS ile transcardially perfüze. Bu 5 dakika (~ 1 litre) PBS içinde% 4 paraformaldehid çözümü ile takip edil…

Discussion

Sistematik örnekleme, araştırma malzemesi en üst düzeye çıkarmak için tasarlanmış ucuz bir yöntem. Bu örnekleme stratejisinin bölge genelinde sistematik örnekleme gerektirir tarafsız stereology kurallarına uyacak şekilde tasarlanmıştır. Bu, her dizi için bölümlerin sırasını muhafaza olduğunu kritik öneme sahiptir. Laboratuarımızda başarıyla hamster ve insan dışı primat beyin bölümlerde her iki banka için bu yöntemi kullanmıştır. Şimdiye kadar, yaklaşık 20.000 vervet maymun <e…

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
Ethylene glycol		Fisher	E178-4
Polyvinyl pyrrolidone		Fisher	BP431-500
Thermal Scientific Embedding Medium		Fisher