Banking cérebro: Fazer oa maioria de espécimes sua Pesquisa

Summary

Bancário cérebro e amostragem sistemática de material biológico fornece a base para estereologia imparcial e maximiza o potencial de dados obtidos de cada espécime.

Abstract

Estereologia imparcial é um método para estimar com precisão e eficiência o número de neurônios total (ou outro tipo de célula) em uma determinada área de interesse¹. Para atingir este objetivo 6-10 seções sistemática deve ser sondado cobrindo toda a estrutura. Normalmente, isso envolve o processamento 05/01 seções que deixa uma quantidade significativa de matérias não transformadas. A fim de maximizar o material, propomos um método barato para a preservação do tecido fixado no âmbito de um plano de pesquisa de longo prazo de armazenamento. Como o tecido é cortado e processado para a desejada mancha ou anticorpos, seções alternadas devem ser sistematicamente colocado em antígeno preservar a -20 ° C para processamento futuro. Usando placas de 24 poços, seções podem ser colocados em ordem para recuperação futura. Usando este método, o tecido pode ser armazenada e processada para imuno-histoquímica ao longo de anos.

Protocol

Parte 1: Pré-processamento de tecido Tecido deve ser bem perfundidos com paraformaldeído, glutaraldeído ou formalina. Isto pode ser conseguido através de perfusão transcardial padrão normalmente utilizado para a colheita de outros órgãos. No presente estudo o assunto estava profundamente sedado com cloridrato de cetamina (10 mg / kg, im), sacrificados com uma overdose de pentobarbital sódico (25 mg / kg, iv) e perfundidos transcardially com 0,1 M PBS até que esteja completamente sangrar. Isso é seg…

Discussion

Amostragem sistemática é um método barato pretende maximizar material de pesquisa. Esta estratégia de amostragem foi desenvolvido em conformidade com a legislação de estereologia imparcial que requer amostragem sistemática em toda a região. É fundamental que a ordem das secções para cada série é mantida. Em nosso laboratório temos utilizado com sucesso este método para operações bancárias tanto hamster e não-humanos seções cérebro dos primatas. Até agora, nós coletamos seções cérebro perto de …

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
Ethylene glycol		Fisher	E178-4
Polyvinyl pyrrolidone		Fisher	BP431-500
Thermal Scientific Embedding Medium		Fisher