Brain Bank: Göra det bästa av din forskning Prover

Summary

Brain bank och systematisk provtagning av biologiskt material utgör grunden för objektiva stereology och maximerar de potentiella uppgifter som erhålls från varje prov.

Abstract

Objektiva stereology är en metod för korrekt och effektivt beräkna det totala neuron nummer (eller annan celltyp) i ett visst område av intresse¹. För att uppnå detta mål 6-10 systematiska sektioner bör sonderade täcker hela strukturen. Vanligtvis innebär behandling 1 / 5 sektioner som lämnar en stor mängd material obearbetade. För att maximera materialet, föreslår vi en billig metod för att bevara fast vävnad som en del i en långsiktig lagring forskningsplan. Eftersom vävnad är skivad och bearbetas för önskad fläcken eller antikropp, alternativa sektioner systematiskt bör placeras i antigen bevara vid -20 ° C för framtida bearbetning. Använda 24-brunnars plattor, kan sektionerna placeras i ordning för framtida hämtning. Med denna metod kan vävnad lagras och behandlas för immunohistokemi under loppet av år.

Protocol

Del 1: Förbehandling av vävnad Vävnad skall vara väl perfusion med paraformaldehyd, glutaraldehyd eller formalin. Detta kan uppnås genom vanliga transcardial perfusion vanligtvis används för att skörda andra organ. I den aktuella studien i ämnet var djupt sederad med ketamin hydroklorid (10 mg / kg im), avlivas med en överdos av natrium pentobarbital (25 mg / kg, iv) och perfusion transcardially med 0,1 M PBS tills det är helt exsanguinated. Detta följs av en 4% paraformaldehyd lösning i PBS i 5 …

Discussion

Systematisk provtagning är en billig metod som syftar till att maximera forskningsmaterial. Denna provtagning strategi är utformad för att uppfylla reglerna för objektiva stereology som kräver systematisk provtagning i hela regionen. Det är avgörande att ordningen på avsnitten för varje serie bibehålls. I vårt laboratorium har vi framgångsrikt använt denna metod för bank både hamster och icke-mänskliga primater delar hjärnan. Hittills har vi samlat nära till 20.000 grön markatta (Chlorocebus aethi…

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
Ethylene glycol		Fisher	E178-4
Polyvinyl pyrrolidone		Fisher	BP431-500
Thermal Scientific Embedding Medium		Fisher