Spot исправить ткани Every Time в нескольких тканевых блоков
Summary
Цель образца ориентации Tag (SPOT), чтобы функционировать в качестве инструмента ориентации, чтобы помочь в идентификации личности ткани в нескольких парафиновых блоков тканей. Эти протоколы показывают, как легко построены из общих, недорогих материалов и гистологии служит надежным визуальным маркером, в парафиновых блоков и секций.
Abstract
Мульти-ткани парафиновые блоки обеспечивают высокую пропускную способность анализ с повышенной эффективностью, экспериментальной единообразия и уменьшения времени и стоимости. Тканевые микрочипы составляют большинство мульти-ткани парафиновых блоков, но и все чаще исследователи с использованием не-облеченные блоки, содержащие большие тканей из нескольких лиц, которые могут обеспечить многие преимущества тканевых микрочипов без значительных инвестиций в планировании и оборудования. Важным компонентом любого анализа мульти-ткани является метод ориентации, используемый для идентификации каждого отдельного ткани. Хотя существуют методы для поддержания правильной ориентации и идентификации тканей в нескольких тканевых блоков, большинство не очень хорошо подходит для не-облеченные блоков, может потреблять драгоценное пространство в массиве и / или трудно производить в стандартной гистологии лаборатории. Образец Ориентация тегов (спот) простой, низкая стоимость ориентации инструмента, что отчетливо видно в парафиновые блоки и всех срезов FOг надежная идентификация образцов в выстроенных и не выстроились макеты. Месте обеспечивает преимущества по сравнению с существующими методами ориентации для не-выстроены блоков, как это не требует какого-либо прямого модификации ткани и обеспечивает гибкость в расположении тканевых частей.
Introduction
Возможность вставлять образцы тканей из нескольких лиц в одном парафинового блока позволяет легко бок о бок сравнение между лечения и физических лиц, устраняет вариабельность между слайдами, а также снижает стоимость и объем работы секционирования и окрашивания образцов. Эти многофункциональные блоки ткани обычно получают либо в виде тканевых микрочипов (TMA) или парафиновых блоков, содержащих ткани из нескольких индивидуумов в макете не-массива. Обслуживание идентичности образца имеет решающее значение для успеха любого анализа нескольких тканей. Исследователи использовали ТМА, так как их развитие с целью повышения эффективности анализа, снизить вариацию между слайдами, ценные ресурсы ткани, и сократить время и стоимость экспериментов 1. Правильное положение ТМА может быть достигнуто с помощью различных методов, в том числе пустых пространств, строк или столбцов между ядрами ткани 2-4, асимметричным расположением основных групп 3, 5 (например, Controл против лечения), "маяка" ядра 6, и назначенные ядра ориентации, находящиеся за пределами матрицы ТМА 3. Хотя эти методы хорошо работают для ТМА, наиболее отнимают основную ТМА пространство и TMAS с пробелов и пробелов в идентификаторы могут стать запутанным, как сердечники ткани исчерпаны в течение долгого времени. Кроме того, эти методы не подходят для использования в нескольких тканевых блоков без формате массива, потому что они полагаются на аномалии в плотно упорядоченной структуре единых микрочипов ядер, как идентификаторы. Большинство блоков не-облеченные нескольких тканей должны учитывать неоднородные ткани и, по определению, не отображать структурированную сетку массив, который делает эти аберрации выделяются в качестве ориентиров.
Хотя существует много преимуществ в использовании ТМА, один из самых больших недостатков является небольшой размер сердечников, которые не всегда представитель в основном гетерогенной ткани 1. Номера выстроенные блоки мульти-ткани обеспечивают многие из тон приносит пользу из ТМА, но содержат большие образцы ткани или целые органы из исследований на животных. Тканевые микрочипы, использующие один сердечники имеют различные согласование с участками цельной ткани на основе белка, представляющего интерес, и многие требуют несколько ядер для повышения согласованности 7-11. Из-за сложности и гетерогенной природы некоторых биомаркеров фенотипов, ТМА, используя даже большое число ядер (> 10) по-прежнему может быть недостаточно и может потребоваться другие, чем микрочипов для анализа 8 методов. Кроме того, ТМА строительство отнимает много времени, технически сложных, и требует первоначальных затрат и инвестиций в или доступ к ткани arrayer. Номера для упорядоченной блоки мульти-ткани могут быть сделаны в любой основной лаборатории со значительно меньшими затратами времени и усилий и реальной альтернативой для исследований, которые требуют больше ткани, чем массивы позволяют или в качестве средства, чтобы сократить расходы и упростить анализ.
Номера выстроены несколько блоки ткани аналогично требует надежной иразориентации маркер для отслеживания идентификацию образца, однако, развитие этих маркеров был ограничен. Большая часть литературы, описывающей ориентацию ткани фокусируется на правильном физиологическом ориентации для встраивания отдельных частей ткани, такие как татуировки ткани с чернилами 12, предварительно вложение тканей в агар-желатин до обработки 13, и маркировка определенные ткани с вырезами 14 или 15 швов , Хотя функциональный, эти методы не являются идеальными в качестве маркеров в нескольких тканевых блоков из-за ограничений. Шов будет срезы через быстро и не может быть виден в каждой секции. Предварительно вложение методы с использованием агар-желатин может сохранить ткани в правильном положении во время обработки и вложения, но не обеспечивает визуальный сигнал, чтобы дифференцировать между несколькими образцами в парафиновый блок и слайдов. Пазы или краситель на ткани может осложнить анализ или закрывают важные морфологические детали. Кроме того, идентичность тканив блоке не объединенным в массивы нескольких тканей может осуществляться с помощью встраивания кусочки ткани в асимметричном расположении, но это требует 3 или более кусочки ткани и может не позволять для оптимального расположения тканей для анализа.
Образец Ориентация тегов (SPOT) была разработана в качестве простого и недорогого способа четко определить тканей в нескольких тканевых блоков и предлагает множество преимуществ по сравнению с существующими методами ориентации. Пятно небольшое, красочные, ядро состоит из гидроксиэтил агарозном геле обработки и маркировки ткани красителя, и проникли с парафином (рис 2С). Ядро пятно встроен в конце рядом с одной ткани в парафин блока мульти-ткани и выглядит как яркие точки в блоке и в каждом разделе (рис 1А – D), четко указав правильную ориентацию блока и секций для облегчения идентификации ткани.
Protocol
Representative Results
Discussion
Успешное подготовка и использование пятен требует тщательного соблюдения нескольких технических этапов. Таяние гидроксиэтил агарозы должно быть сделано медленно и на слабом огне. Быстро плавления при высокой температуре может привести к какой-либо аварии агарозы для менее оптималь?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Авторы хотели бы поблагодарить д-ра Brent Харрис для обеспечения критический обзор рукописи. Эти исследования были проведены в Lombardi всеобъемлющем онкологический центр Гистопатология & Tissue общей ресурс, который поддерживается частично NIH / NCI грант P30-CA051008. Содержание исключительно ответственности авторов и не обязательно отражают официальную точку зрения Национального института рака, Национального института здравоохранения.
Materials
| HistogelTM Specimen Processing Gel | Thermo Scientific | HG-4000-012 | http://www.thermoscientific.com/en/product/richard-allan-scientific-histogel-specimen-processing-gel.html |
| Tissue Marking Dye | Triangle Biomedical Sciences, Inc. | TMD-5 | Any tissue marking dye would most likely be sufficient. |
| Arraymold Kit A 2 mm (60 core) | Arraymold | 20015A | Any manual tissue arrayer would work similarly. |
Riferimenti
- Jawhar, N. Tissue microarray: a rapidly evolving diagnostic and research tool. Ann. Saudi. Med. 29 (2), 123-127 (2009).
- Dhir, R. Tissue microarrays: an overview. Methods Mol. Bio. 441, 91-103 (2008).
- Parsons, M., Grabsch, H. How to make tissue microarrays. Diagn. Histopath. 15 (3), 142-150 (2009).
- Saxena, R., Bade, S. Ch. 7 Tissue Microarray – Construction and Quality Assurance. Immunohistochemical Staining Methods 6th ed. , (2013).
- Nocito, A., Kononen, J., Kallioniemi, O., Sauter, G. Tissue microarrays (TMAs) for high-throughput molecular pathology research. Int. J. Cancer. 94, 1-5 (2001).
- Rangel, C. The tissue microarray: helpful hints. J.Histotech. 25 (2), 93-100 (2002).
- Hammer, A., Williams, B., Dietz, H., Hamilton-Dutoit, S. High-throughput immunophenotyping of 43 ferret lymphomas using tissue microarray technology. Vet. Path. 44, 196-203 (2007).
- Eckel-Passow, J., Lohse, C., Sheinin, Y., Crispen, P., Krco, C., Kwon, E. Tissue microarrays: one size does not fit all. Diagn Pathol. 5, 48-57 (2010).
- Lin, Y., Hatem, J., Wang, J., Quinn, A., Hicks, D., Tang, P. Tissue microarray-based immunohistochemical study can significantly underestimate the expression of HER2 and progesterone receptor in ductal carcinoma in situ of the breast. Biotech. Histochem. 86 (5), 345-350 (2011).
- Wampfler, J., et al. Determining the optimal numbers of cores based on tissue microarray antibody assessment in non-small cell lung cancer. J Cancer Sci. Ther. 3, 120-124 (2011).
- Quagliata, L., Schlageter, M., Quintavalle, C., Tornillo, L., Terracciano, L. M. Identification of new players in hepatocarcinogenesis: Limits and opportunities of using tissue microarray (TMA). Microarray. 3, 91-102 (2014).
- Miettinen, M. A simple method for generating multitissue blocks without special equipment. Immunohistochem. Mol. Morphol. 20 (4), 410-412 (2012).
- Jones, M., Calabresdi, P. Agar-gelatin for embedding tissues prior to paraffin processing. BioTechniques. 42, 569-570 (2007).
- Carson, F., Hladik, C. . Histotechnology: A Self-Instructional Text. , (2009).
- Suvarna, S., Layton, C., Bancroft, J. . Bancroft’s Theory and Practice of Histological Techniques. 7th ed. , (2013).
