Doğru DOKU Çok doku blokları her zaman nokta
Summary
Numune Oryantasyon Etiketi (Spot) amacı çoklu doku parafin bloklar bireysel doku tanımlanmasında yardımcı olmak için bir oryantasyon aracı olarak işlev etmektir. Bu protokoller, ortak, düşük maliyetli histolojisi malzemelerden kolayca inşa edilmiş ve parafin bloklar ve kesitlerde güvenilir bir görsel belirteç olarak hizmet eder gösterilmektedir.
Abstract
Çok doku parafin blokları verimlilik artışı, deneysel bütünlüğü ve azaltılmış zaman ve maliyet ile yüksek verimlilik analizi sağlar. Doku mikrodizileri çoklu doku parafin bloklar çoğunluğunu oluşturan, ancak giderek, araştırmacılar planlama ve teçhizat önemli yatırım yapmadan doku mikrodizilerinin avantajları birçok sağlayabilir birden bireylerden daha dokuları içeren olmayan dizilmiş blok kullanıyor. Herhangi bir çok doku analizi önemli bir bileşeni, her bir doku tanımlamak için kullanılan yönlendirme yöntemidir. Yöntemler uygun oryantasyon ve çoklu doku blokları dokuların belirlenmesi korumak için mevcut olmasına rağmen, pek çok, bir dizi içindeki değerli alanı tüketebilir dizilmemiş bloklar için çok uygun değildir ve / veya standart histoloji laboratuarda üretilmesi zordur. Numune Oryantasyon Etiketi (Spot) açıkça parafin blok ve tüm doku kesitlerinde fo görünür basit, düşük maliyetli yönlendirme aracıdizilmiş olan ve olmayan dizilmiş düzenleri r güvenilir örnek tanımlama. Nokta o dokuya doğrudan bir değişiklik gerektirmez olmayan dizilmiş blokları için varolan yönlendirme yöntemlerine göre avantajlar sağlamaktadır, doku parçalarının düzenlemesinde esneklik sağlar.
Introduction
Tek bir parafin blok içinde birden kişilerden doku örnekleri embed yeteneği, tedavi ve bireyler arasında kolay yan yana karşılaştırma sağlayan slaytlar arasındaki değişkenliği ortadan kaldırır ve kesit ve örneklerin boyanması maliyetini ve iş yükünü azaltır. Bu çok-doku blokları tipik olmayan bir dizi düzeninde birden bireylerden alınan doku içeren her iki doku mikrodizileri (TMA) ya da parafin bloklar olarak üretilir. Örnek kimlik Bakım herhangi bir çok doku analizi başarısı için kritik öneme sahiptir. Araştırmacılar, analiz verimliliğini artırmak slaytlar arasındaki farklılıkları azaltmak, değerli doku kaynaklarını korumak, zaman ve deneyler 1 maliyetini azaltmak için onların gelişimi beri TMAlar kullanarak olmuştur. TMAlar Doğru yönlendirme doku çekirdekleri 2-4 çekirdek gruplarının asimetrik düzenleme 3, 5 (örneğin, contro arasındaki boşluk, satır veya sütun olmak üzere, çeşitli yöntemler kullanılarak yapılabilirTedavi vs l) "işaret" çekirdek 6 ve TMA matrisin 3 dışında bulunan özel oryantasyon çekirdek. Bu yöntemler TMAlar için iyi çalışır rağmen, çoğu doku çekirdekleri zamanla tükenmiş gibi tanımlayıcıları kafa karıştırıcı hale gelebilir olarak boşluklar ve boşluk değerli TMA çekirdek alanı ve TMAlar tüketir. Onlar tanımlayıcı olarak tekdüze mikroarray çekirdek sıkıca sunumda anomaliler güveniyor çünkü Ayrıca, bu yöntemler bir dizi formatında olmadan çoklu doku bloklarında kullanılmak için uygun değildir. Çoğu olmayan dizilmiş çok doku blokları bu sapmaları yerlerinden olarak kılan yapısal dizi ızgara görüntülemek yok, tanımı gereği, düzgün olmayan dokuları uyum ve olmalıdır.
Bir TMA, en büyük dezavantajlardan birini kullanarak pek çok avantajı olmasına rağmen, her zaman büyük ölçüde heterojen dokusu 1 temsilcisi değildir çekirdeklerin, küçük boyutudur. Sigara dizilmiş çok doku blokları t birçok sağlamako bir TMA faydaları, ancak daha büyük doku örnekleri, ya da hayvan çalışmalarından elde edilen tüm organları içerir. Tek çekirdeği kullanarak Doku mikrodizileri ilgi protein dayalı tüm doku bölümleri ile uyumu değişen ve birçok artan uyum 7-11 için birden fazla çekirdeği gerektirir. Nedeniyle karmaşıklığı ve bazı biyomarker fenotipleri heterojen doğası, TMAlar hala yetersiz olabilir çekirdek bile çok sayıda (> 10) ile ve analiz 8 mikrodizilerinden farklı yöntemler gerektirebilir. Ayrıca, TMA inşaat teknik olarak zor bir zaman tüketen, ve doku arrayer başlangıç maliyeti ve yatırımı veya erişimi gerektirir. Sigara dizilmiş çok doku blokları önemli ölçüde daha az zaman ve çaba ile herhangi bir temel laboratuvar yapılan ve diziler izin vermek veya maliyetlerini düşürmek ve analizi basitleştirmek için bir araç olarak daha fazla doku gerektiren çalışmalar için geçerli bir alternatif olabilir.
Sigara dizilmiş çok doku blokları benzer güvenilir gerektiren veyaientation markör Örnek kimlik izlemek için, ancak, bu markerlerin gelişimi sınırlanmıştır. Doku yönünü anlatan literatürün çoğu bu tür mürekkep 12 ile doku dövme gibi bireysel doku parçaları, gömme için doğru fizyolojik yönü üzerinde duruluyor, işlemden önce 13 agar-jelatin içinde dokuların ön gömme ve çentik 14 veya dikiş 15 ile bazı dokuların işaretleme . Işlevsel olsa da, bu yöntemler nedeniyle sınırlamalara çoklu doku blokları belirteçleri olarak ideal değildir. Bir dikiş hızla aracılığıyla bölümlere edilecek ve her bölümde görünür olmayabilir. Işleme ve gömme sırasında doğru yönlenmede doku devam edebilir agar jelatin teknikler kullanılarak ön gömme ancak parafin bloğu ve slaytlar çoklu numuneler arasında ayırt etmek için bir görsel işaret temin etmez. Doku üzerindeki çentikler veya boya analizi komplike veya önemli morfolojik ayrıntıları occlude. Alternatif olarak, doku, kimlikolmayan bir dizilmiş çoklu doku bloğu bir asimetrik düzenlemesinin doku parçalarının yerleştirilmesi vasıtasıyla yapılmaktadır, ancak bu 3 ya da daha fazla doku parçaları gerektirir ve analiz için dokuların uygun düzenleme için yeterli olmayabilir edilebilir.
Numune Oryantasyon Etiketi (Spot) açıkça çoklu doku bloklar halinde dokuları tespit etmek kolay ve ucuz bir yöntem olarak geliştirilen ve mevcut oryantasyon yöntemleri üzerinde birçok faydalar sunmaktadır. NOKTA Hidroksietil agaroz jeli işleme ve doku işaretleme boyası, oluşan ve parafin (Şekil 2C) ile infiltre küçük, renkli, çekirdeğidir. NOKTA çekirdeği çok doku parafin blok içinde tek bir dokuya sonraki ucunda gömülü ve blok ve her bölümde bir parlak renkli nokta olarak görünür – açıkça blok ve bölümlerin doğru yönünü gösteren (Şekil 1A D) Kolay doku tanımlama için.
Protocol
Representative Results
Discussion
Noktalar Başarılı hazırlanması ve kullanımı birkaç teknik adımda dikkatli bağlılık gerektirir. Hidroksietil agaroz Erime yavaş ve düşük ısıda yapılmalıdır. Yüksek ısıda hızla Erime optimum sonuçlar daha az agaroz bazı arıza neden olabilir. Işlenmesi için parçalar halinde boya yüklü fişler keserken, her parçanın kalınlığı fazla 4.5 mm ve 7 mm'yi aşmaz emin olun. bunlar kalınlığında üniform 5 mm gibi yuvarlatılmış uçları atık olarak kaldırılır. 5 mm'den az ade…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Yazarlar yazının eleştiri sağlamak için Dr. Brent Harris teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışmalar NIH / NCI hibe P30-CA051008 kısmen desteklenen Lombardi Kapsamlı Kanser Merkezi Histopatoloji ve Doku Paylaşılan kaynağın gerçekleştirilmiştir. Içeriği sadece yazarların sorumluluğundadır ve mutlaka Ulusal Kanser Enstitüsü veya Ulusal Sağlık Enstitüleri resmi görüşlerini temsil etmemektedir.
Materials
| HistogelTM Specimen Processing Gel | Thermo Scientific | HG-4000-012 | http://www.thermoscientific.com/en/product/richard-allan-scientific-histogel-specimen-processing-gel.html |
| Tissue Marking Dye | Triangle Biomedical Sciences, Inc. | TMD-5 | Any tissue marking dye would most likely be sufficient. |
| Arraymold Kit A 2 mm (60 core) | Arraymold | 20015A | Any manual tissue arrayer would work similarly. |
Riferimenti
- Jawhar, N. Tissue microarray: a rapidly evolving diagnostic and research tool. Ann. Saudi. Med. 29 (2), 123-127 (2009).
- Dhir, R. Tissue microarrays: an overview. Methods Mol. Bio. 441, 91-103 (2008).
- Parsons, M., Grabsch, H. How to make tissue microarrays. Diagn. Histopath. 15 (3), 142-150 (2009).
- Saxena, R., Bade, S. Ch. 7 Tissue Microarray – Construction and Quality Assurance. Immunohistochemical Staining Methods 6th ed. , (2013).
- Nocito, A., Kononen, J., Kallioniemi, O., Sauter, G. Tissue microarrays (TMAs) for high-throughput molecular pathology research. Int. J. Cancer. 94, 1-5 (2001).
- Rangel, C. The tissue microarray: helpful hints. J.Histotech. 25 (2), 93-100 (2002).
- Hammer, A., Williams, B., Dietz, H., Hamilton-Dutoit, S. High-throughput immunophenotyping of 43 ferret lymphomas using tissue microarray technology. Vet. Path. 44, 196-203 (2007).
- Eckel-Passow, J., Lohse, C., Sheinin, Y., Crispen, P., Krco, C., Kwon, E. Tissue microarrays: one size does not fit all. Diagn Pathol. 5, 48-57 (2010).
- Lin, Y., Hatem, J., Wang, J., Quinn, A., Hicks, D., Tang, P. Tissue microarray-based immunohistochemical study can significantly underestimate the expression of HER2 and progesterone receptor in ductal carcinoma in situ of the breast. Biotech. Histochem. 86 (5), 345-350 (2011).
- Wampfler, J., et al. Determining the optimal numbers of cores based on tissue microarray antibody assessment in non-small cell lung cancer. J Cancer Sci. Ther. 3, 120-124 (2011).
- Quagliata, L., Schlageter, M., Quintavalle, C., Tornillo, L., Terracciano, L. M. Identification of new players in hepatocarcinogenesis: Limits and opportunities of using tissue microarray (TMA). Microarray. 3, 91-102 (2014).
- Miettinen, M. A simple method for generating multitissue blocks without special equipment. Immunohistochem. Mol. Morphol. 20 (4), 410-412 (2012).
- Jones, M., Calabresdi, P. Agar-gelatin for embedding tissues prior to paraffin processing. BioTechniques. 42, 569-570 (2007).
- Carson, F., Hladik, C. . Histotechnology: A Self-Instructional Text. , (2009).
- Suvarna, S., Layton, C., Bancroft, J. . Bancroft’s Theory and Practice of Histological Techniques. 7th ed. , (2013).
