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Immunology and Infection

क्षेत्र और प्रयोगशाला स्थितियों के तहत जूनोटिक नेमाटोड के निदान के लिए एक सरल फेकल प्लवनशीलता विधि

Published: December 15, 2023 doi: 10.3791/66110
Automatic Translation
1, 1, 1, 1, 2
1Parasitology Department, Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Nacional Autonoma de Mexico, 2Instituto de Biología, Universidad Nacional Autonoma de Mexico

Summary

यह कार्य क्षेत्र की स्थितियों के तहत 2017 से 2021 तक मेक्सिको में कुत्तों से एकत्र किए गए फेकल नमूनों में पाए गए टोक्सोकारा कैनिस और एन्सीलोस्टोमा एसपीपी की पहचान करने के लिए एक प्लवनशीलता विधि के उपयोग का वर्णन करता है।

Abstract

क्षेत्र की परिस्थितियों में टोक्सोकारा कैनिस और एन्सीलोस्टोमा कैनिनम जैसे जूनोटिक क्षमता वाले कैनाइन परजीवियों का निदान आमतौर पर मेक्सिको में ग्रामीण और उपनगरीय क्षेत्रों में प्रयोगशाला तक सीमित पहुंच के कारण मुश्किल होता है। इस अध्ययन का उद्देश्य क्षेत्र की परिस्थितियों में 2017 से 2021 तक मेक्सिको में कुत्तों से एकत्र किए गए फेकल नमूनों में टी. कैनिस और एन्सीलोस्टोमा एसपीपी का पता लगाना है। नमूना आकार गणना के परिणामस्वरूप देश भर में 534 कुत्तों का लक्ष्य नामांकन हुआ।

शौच के बाद सीधे मलाशय या जमीन से नमूने एकत्र किए गए थे। नमूने व्यक्तिगत, कसकर सील, 4 डिग्री सेल्सियस पर प्लास्टिक बैग में संग्रहीत किए गए थे। सोडियम क्लोराइड (विशिष्ट गुरुत्व [एसपीजी] 1.20) का एक संतृप्त समाधान क्षेत्र और प्रयोगशाला स्थितियों दोनों के तहत तैयार किया गया था। संग्रह के 3 दिनों के भीतर, मल के 2-4 ग्राम एक खारा समाधान में प्रत्येक मल नमूना निलंबित करके एक प्लवनशीलता विधि का उपयोग परजीवी के लिए परीक्षण किया गया. मल को प्लवनशीलता समाधान के साथ मिलाया गया और धातु के चम्मच का उपयोग करके कुचल दिया गया।

एक बार एक समान स्थिरता हासिल की गई थी, फेकल नमूना एक छलनी का उपयोग कर एक नए प्लास्टिक कप में डाला गया था और 10-15 मिनट के लिए बैठने की अनुमति दी. मिश्रण के ऊपर से तीन बूंदों को एक निष्फल टीका लूप का उपयोग करके एकत्र किया गया था। स्लाइड्स को माइक्रोस्कोप पर रखा गया था और प्रशिक्षित परजीवीविदों द्वारा परजीवियों की पहचान की गई थी। 1,055 कुत्तों के फेकल नमूनों की सूक्ष्म रूप से जांच की गई। एन्सीलोस्टोमा एसपीपी के लिए सकारात्मक नमूनों की संख्या 833 (78.95% आवृत्ति) और टी कैनिस के लिए 222 (21.04%) थी। ये निष्कर्ष मेक्सिको में शहरी और ग्रामीण क्षेत्रों में रहने वाले कुत्तों में जूनोटिक हेल्मिन्थ्स की पहचान करने के महत्व को प्रयोगशाला में और क्षेत्र की स्थितियों के तहत एक कोप्रोपैरासिटोस्कोपिक तकनीक का उपयोग करके बताते हैं।

Introduction

गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल परजीवी सबसे आम स्वास्थ्य समस्याओं में से एक हैं जो कुत्तों को प्रभावित करतेहैं 1. अनुमान बताते हैं कि दुनिया भर में ~ 700 मिलियन घरेलू कुत्ते हैं, और लगभग 175 मिलियन को फ्री-रोमिंग2 के रूप में वर्गीकृत किया जा सकता है। कुत्तों और मनुष्यों के बीच 60 से अधिक परजीवी प्रजातियां साझा कीजाती हैं, यह सुझाव देते हुए कि कुत्ते इन परजीवियों के साथ मनुष्यों के लिए संक्रमण का स्रोत हो सकते हैं। टोक्सोकारा कैनिस और एन्सीलोस्टोमा कैनिनम दो परजीवी प्रजातियां हैं जो कुत्तों को संक्रमित करती हैं और, गलती से, मानव मेजबान। वर्तमान में, उन स्थानों के बारे में कई अध्ययन हैं जहां ये हेलमन्थ मेक्सिको में जीवित रहने और प्रजनन करने में सक्षम हैं। कुत्तों में टोक्सोकारा का प्रसार संयुक्त राज्य अमेरिका, मैक्सिको, मध्य अमेरिका और कैरिबियन4 में 0% से 87% से अधिक तक भिन्न होता है। टोक्सोकारा कैनिस और एन्सीलोस्टोमा एसपीपी, साथ ही कुत्तों में अन्य परजीवी प्रजातियां, पहले मेक्सिको 5,6,7,8,9,10,11,12,13(तालिका 1)में बताई गई हैं।

परजीवी प्रजातियां क्षेत्र व्यापकता (%) हवाला
एन्सीलोस्टोमा कैनिनम क्वेरेटारो 42.90 5
टबैस्को 15.90 6
केमपेक 35.7 – 42.9 7
युकाटन 73.8 8
बबेसिया मोरेलोस 13.60 9
वेराक्रूज़ 10.00
Coccidial oocysts युकाटन 2.30 8
टेनोसेफेलाइड्स मोरेलोस 30.3 10
डिपिलिडियम कैनिनम युकाटन 2.30 8
डिरोफिलेरिया युकाटन 7.0 – 8.3 11
जिआर्डिया टबैस्को 3.00 6
युकाटन 18.8 8
लीशमैनिया चियापास 19.00 12
फीताकृमि बाजा कैलिफोर्निया 6.79 13
टोक्सोकारा कैनिस क्वेरेटारो 22.10 5
युकाटन 6.20 8
त्रिचुरिस वल्पिस युकाटन 25.40 8
ट्रिपैनोसोमा जलिस्को 8.10 9
केमपेक 7.60
चियापास 4.5 – 42.8
क्विंटाना रू 20.1 – 21.3
टोलुका 17.50
युकाटन 9.8 – 34

तालिका 1: 2001 से 2020 तक मेक्सिको में कुत्ते परजीवियों का क्षेत्रीय प्रसार (%) 2001 से 2020 तक की गई पिछली जांच के निष्कर्षों ने मेक्सिको में कई शहरी और ग्रामीण सेटिंग्स में कैनाइन परजीवी वितरण की पहचान को सक्षम किया है। ये अध्ययन विभिन्न पारिस्थितिक तंत्रों में कैनाइन परजीवियों की दृढ़ता के लिए अनुकूल महामारी विज्ञान तत्वों की गहरी समझ प्रदान करते हैं, जो कुछ परजीवी प्रजातियों के जूनोटिक प्रभाव के व्यापक मूल्यांकन में योगदान करते हैं।

आंतों के परजीवी के जीवन चक्र चरण, जैसे कि अंडे, अल्सर, oocysts, या लार्वा मल के नमूनों में पाए जा सकते हैं। इस प्रकार, फेकल सामग्री की परीक्षा एक जानवर के परजीवियों के बारे में बहुमूल्य जानकारी प्रदान करती है। मानव मल में एन्सीलोस्टोमिडे अंडे का पता लगाने के लिए एक विधि की आवश्यकता ने 1878 में सरल फेकल स्मीयर का उपयोग किया, जिसका उपयोग गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल परजीवी का पता लगाने के लिए कई वर्षों तक किया गया था लेकिन इसे बहुत संवेदनशील नहीं माना जाता था। इस प्रकार, बेहतर कोप्रोमाइक्रोस्कोपिक तरीकों को विकसित करने की आवश्यकता उत्पन्न हुई14. 100 से अधिक साल बीत चुके हैं के बाद से ठीक करने और फेकल नमूनों में परजीवी अंडे की गिनती के लिए प्लवनशीलता तकनीक पहले15 वर्णित किया गया था. तब से, प्लवनशीलता तकनीक के कई तरीकों और वेरिएंट को उनके मेजबानों में कुछ परजीवियों का पता लगाने के लिए एक मानक माना जाता है।

उदाहरण के लिए, लेन ने 1924 में प्रत्यक्ष केन्द्रापसारक प्लवनशीलता तकनीक से जुड़ी एक विधि का वर्णन किया, जो 1 ग्राम (लेन) या 10 ग्राम (स्टोल के संशोधन) में एसपीजी 1.2 के साथ संतृप्त सोडियम क्लोराइड समाधान में तलछट को तैरने के बाद सेंट्रीफ्यूजेशन को एकीकृत करता है। प्लवनशीलता तकनीक बाद में विभिन्न एसपीजी14 के साथ समाधान का उपयोग करके संशोधित किया गया था. 1939 में, गॉर्डन और व्हिटलॉक ने परजीवी अंडों की कल्पना करने में डिट्रिटस के हस्तक्षेप के कारण स्टोल की तकनीक के नुकसान की सूचना दी और मैकमास्टर16 के रूप में जानी जाने वाली मात्रात्मक विधि विकसित की। 1979 में, ओ'ग्राडी और स्लोकोम्बे ने प्रदर्शित किया कि छलनी के समाधान, समय और जाल के आकार का विशिष्ट गुरुत्व प्लवनशीलता तकनीक17 का उपयोग करके अंडे का पता लगाने की सटीकता को प्रभावित करता है। पिछले दशकों के दौरान, क्योंकि प्लवनशीलता तकनीक में कई संशोधन किए गए हैं, प्लवनशीलता विधियों के मानकीकरण की तत्काल आवश्यकता है। वर्तमान में, जूनोटिक परजीवी की रोकथाम के संदर्भ में कैनाइन हेल्मिंथ संक्रमण का पता लगाने के लिए जूनोटिक नेमाटोड18 के संक्रामक चरणों के साथ पर्यावरण संदूषण को सीमित करने के लिए उचित कृमिनाशक उपचार लागू करना आवश्यक है।

गुणात्मक तरीकों में, फेकल प्लवनशीलता तकनीक का व्यापक रूप से उपयोग और स्वीकार किया जाता है क्योंकि इसमें अधिक उपकरण की आवश्यकता नहीं होती है, सरल, सस्ती और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य है; फिर भी इसमें एक बड़ी खामी है कि संक्रमण कीतीव्रता कम होने पर इसमें संवेदनशीलता का अभाव होता है। ऐसे अंडे, oocysts, अल्सर, या नेमाटोड लार्वा के रूप में परजीवी तत्वों की एक बड़ी संख्या की उपस्थिति को प्रकट करने की क्षमता आमतौर पर समाधान20 के घनत्व से निर्धारित किया जाता है.

पिछली रिपोर्टों ने कैनाइन नेमाटोड अंडे का पता लगाने के लिए कोप्रोपैरासिटोलॉजिकल तकनीकों की तुलना की है। मोटाइल प्रोटोजोआ का पता लगाने के संबंध में, प्रत्यक्ष फेकल स्मीयरों का उपयोग किया जाता है; जबकि अवसादन विधियां ऐसे trematodes21 के रूप में परजीवी के भारी अंडे के निदान के लिए उपयोगी होते हैं. सबसे व्यापक रूप से उपयोग किए जाने वाले क्षेत्र-आधारित नैदानिक परीक्षणों में से एक फेकल स्मीयर विधि है। हालांकि, इस तकनीक की संवेदनशीलता के निम्न स्तर को इस तथ्य के लिए जिम्मेदार ठहराया जा सकता है कि इसमें मलबे होते हैं जो परजीवी अंडे का पता लगाने में हस्तक्षेप करते हैं। उचित एसपीजी प्रदान करने वाले समाधानों के साथ एक छलनी कदम को शामिल करके, प्लवनशीलता विधि एस्केरिड और हुकवर्म अंडे का एक स्पष्ट और कम अव्यवस्थित अवलोकन प्रदान करती है। यह सूक्ष्म स्क्रीनिंग22 के लिए एक और अधिक सटीक और कुशल प्रक्रिया की ओर जाता है. इसी तरह, सरल प्लवनशीलता और प्रत्यक्ष केन्द्रापसारक प्लवनशीलता तकनीक बहुत सामान्यतः परजीवी अंडे और oocysts14 ठीक करने के लिए उपयोग किया जाता है. क्लासिक प्लवनशीलता विधियों इस तरह के मैकमास्टर विधि15 के रूप में एक गिनती कक्ष के उपयोग के आधार पर गुणात्मक या मात्रात्मक माना जा सकता है. बहरहाल, चूंकि प्लवनशीलता तकनीक में कम संवेदनशीलता होती है और पेटेंट अवधि में परजीवियों का पता लगाने पर ध्यान केंद्रित करती है, इसलिए नकारात्मक परिणामों को निर्णायक नहीं माना जाना चाहिए। हालांकि, सटीकता न केवल फेकल नमूनों की संरक्षण प्रक्रिया या प्लवनशीलता समाधान के एसपीजी पर निर्भर करती है, बल्कि उपयोगकर्ता की फेकल परीक्षाओं के संचालन में तकनीकी दक्षता और अनुभव पर भी निर्भर करती है।

नतीजतन, मल में कैनाइन परजीवी का पता लगाने के लिए अन्य तरीकों का पता लगाया गया है। यह आम तौर पर मान्यता प्राप्त है कि कुत्तों में आंतों के हेल्मिंथ संक्रमण के निदान के लिए सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल किए जाने वाले दृष्टिकोणों में से एक फ्लोटैक तकनीक है, एक बहुसंयोजक, संवेदनशील और सटीक विधि जो कुत्तों में ए कैनिनम के निदान के लिए सटीक और विश्वसनीय परिणाम देती है जब एक ट्यूब में प्लवनशीलता प्रोटोकॉल और मैकमास्टर तकनीक19 की तुलना में, 23. अवसादन विधियां फ्लूक अंडे, भ्रूण निमेटोड अंडे, और अधिकांश टैपवार्म अंडे को पुनर्प्राप्त करने के लिए उपयोगी होती हैं, जिन्हें प्लवनशीलता समाधान की सतह पर पुनर्प्राप्त नहीं किया जा सकता है क्योंकि ये संरचनाएं24 तैरती नहीं हैं। एक विधि जो प्लवनशीलता / अवसादन तकनीकों से बेहतर साबित हुई है, वह है संशोधित डबल केन्द्रापसारक प्लवनशीलता विधि, क्योंकि यह मल में सेस्टोड अंडे का पता लगाने में सक्षम बनाता है, कम समय लेने वाला है, एनोप्लोसेफला अंडे को फेकल मलबे से अलग करता है, और क्रिस्टलीकरण25 को कम करता है। इसके अलावा, इस तकनीक का उपयोग उच्च संवेदनशीलता26 के साथ एस्केरिड अंडे का पता लगाने के लिए सफलतापूर्वक किया गया है। फिर भी, इन उपरोक्त तकनीकों और केन्द्रापसारक विधियों में से कुछ जैसे कि ओवासे, इस अध्ययन में प्रस्तावित प्लवनशीलता प्रोटोकॉल के विपरीत, फॉर्मेलिन, वाणिज्यिक किट, प्रयोगशाला स्थितियों के तहत नमूना प्रसंस्करण जैसे अभिकर्मकों में नमूना संरक्षण की आवश्यकता होती है, और जस्ता सल्फेट27 जैसे अभिकर्मकों का उपयोग जो महंगे हैं और पर्यावरणीय विषाक्तता से बचने के लिए विशेष निपटान प्रक्रियाओं की आवश्यकता होती है।

उच्च एसपीजी के साथ समाधान जोड़कर प्लवनशीलता विधि की संवेदनशीलता को बढ़ाने वाली तकनीकों का उपयोग हाल ही में पसंद किया गया है। हालांकि, यह माना जाना चाहिए कि इन समाधानों का नुकसान अंतिम तैयारी में मलबे में वृद्धि है और इसलिए, परजीवी अंडे का गलत पता लगाना। इसके अलावा, सामग्री, अभिकर्मकों, लागत, पर्यावरणीय प्रभाव के मुद्दों, और केन्द्रापसारक तरीकों के उपयोग की कठिनाई की व्यावसायिक उपलब्धता एक प्लवनशीलता तकनीक14, जो प्रोटोकॉल है कि हम इस काम में मौजूद के विपरीत क्षेत्र की स्थिति में चुनौतीपूर्ण हो सकता है के चयन को प्रभावित करते हैं. टेबल नमक के साथ प्लवनशीलता समाधान की तैयारी चीनी के उपयोग पर फायदेमंद है क्योंकि खेत की स्थितियों के तहत, चीनी ततैया और मधुमक्खियों जैसे कीड़ों को आकर्षित करती है और तैयारी चिपचिपा हो जाती है। इसके अलावा, फिनोल, जिसे चिपचिपाहट से बचने के लिए चीनी समाधान में जोड़ा जाता है, या ZnSO4जैसे समाधान पर्यावरण संरक्षण दिशानिर्देशों के अनुसार ठीक से त्यागने के लिए जटिल हैं और खेत में निपटाए नहीं जा सकते हैं; एक टेबल नमक समाधान के विपरीत।

इस पांडुलिपि का लक्ष्य क्षेत्र और प्रयोगशाला स्थितियों के तहत सरल प्लवनशीलता तकनीक के अनुकूलन का उपयोग करके फेकल नमूनों में टी. कैनिस और एन्सीलोस्टोमा एसपीपी अंडे का पता लगाने के चरणों का प्रदर्शन करना है। इसके साथ वर्णित प्रोटोकॉल के बाद और बैकअप बैटरी के साथ माइक्रोस्कोप का उपयोग करके, ग्रामीण और उपनगरीय क्षेत्रों में इन कैनाइन जूनोटिक परजीवियों का निदान संभव है जब कोई प्रयोगशाला उपकरण और बुनियादी ढांचा उपलब्ध नहीं है। इस काम में वर्णित सरल प्लवनशीलता विधि त्वरित परिणाम प्रदान कर सकती है और नियमित स्क्रीनिंग के लिए एक गैर-आक्रामक और लागत प्रभावी तकनीक है।

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Protocol

कुत्तों के उपयोग और देखभाल को मेक्सिको के राष्ट्रीय और स्वायत्त विश्वविद्यालय द्वारा अनुमोदित किया गया था।

1. मल के नमूनों का संग्रह

नोट: पशु चिकित्सक या जानवर के मालिक की मदद से कुत्ते को संभालें।

  1. जंगली कुत्तों (चित्रा 1 ए) या नर्वस जानवरों के मामले में, शौच के ठीक बाद जमीन से नमूने एकत्र करें या बाद में 10 मिनट से अधिक नहीं।
  2. पानी या वैसलीन के साथ सर्जिकल दस्ताने या पतली दीवार वाले पॉलीथीन बैग को चिकनाई करें। मलाशय से फेकल नमूने एकत्र करने के लिए, सर्जिकल दस्ताने या पतली दीवार वाले पॉलीथीन बैग पहनें।
  3. प्रत्येक कुत्ते (चित्रा 1 बी) से मल के कम से कम 2 ग्राम ले लीजिए.
  4. निम्नानुसार व्यक्तिगत मल के नमूनों की पहचान करें: तिथि, स्थान (ग्लोबल पोजिशनिंग सिस्टम [जीपीएस] Google मानचित्र का उपयोग करके निर्देशांक), प्रत्येक जानवर के लिए एक पहचान संख्या निर्दिष्ट करें, कुत्ते की अनुमानित आयु, कुत्ते का लिंग, नस्ल, इनडोर या आउटडोर (जंगली) कुत्ता।
  5. एक तंग गाँठ के साथ फेकल नमूना युक्त बैग बंद करें। बैग प्रशीतित (4-8 डिग्री सेल्सियस) रखें अगर मल के नमूने संग्रह के बाद 3-4 घंटे के भीतर विश्लेषण नहीं कर रहे हैं.

2. क्षेत्र निदान के लिए संतृप्त नमक समाधान तैयार करना

नोट: यदि पानी उबालने के लिए संतुलन, मापने वाली सामग्री, स्टोव, या गैस तक पहुंच अनुपस्थित या सीमित है, तो संतृप्त खारा समाधान आसानी से पानी, सामान्य टेबल नमक, एक प्लास्टिक 12 औंस (355 एमएल) कप, और 1 एल सोडा प्लास्टिक खाली बोतल का उपयोग करके तैयार किया जा सकता है।

  1. एक खाली 1 एल सोडा की बोतल को अच्छी तरह से धो लें। बोतल को 1 स् जल से भरिए।
  2. आम टेबल नमक के साथ एक 12 औंस प्लास्टिक कप भरें।
  3. नमक को सोडा की बोतल में स्थानांतरित करें।
  4. स्क्रू कैप के साथ सोडा की बोतल को कसकर बंद करें। घोल को जोर से हिलाएं जब तक कि नमक घुल न जाए।
    नोट: सोडा की बोतल में समाधान मिलाते हुए जब तक नमक का पूरा विघटन 90 मिनट तक ले जा सकते हैं.

3. प्रयोगशाला निदान के लिए संतृप्त नमक समाधान की तैयारी

  1. 420 ग्राम आम टेबल नमक का वजन करें।
  2. 1 लीटर पानी में 420 ग्राम नमक घोलें।
  3. घोल को तब तक उबालें जब तक कि नमक घुल न जाए।
  4. अघुलनशील नमक को त्यागने के लिए घोल को छान लें।
  5. एक भारी द्रव हाइड्रोमीटर या डेंसिटोमीटर का उपयोग करके समाधान की एकाग्रता की जांच करें।
    नोट: आदर्श एकाग्रता में बेहतर परिणाम(चित्रा 2ए)प्राप्त करने के लिए 1.20 का एसपीजी है। एक अंडे की फ्लोटिंग क्षमता समाधान के साथ इसकी बातचीत से प्रभावित होती है, जो एक ही विशिष्ट गुरुत्व के साथ समाधान में तैरने के लिए अंडे की बदलती क्षमता में योगदान करती है। इसलिए, इष्टतम अंडे की वसूली प्राप्त करने के लिए, प्लवनशीलता समाधान में विशिष्ट गुरुत्व की ऊपरी सीमा पर विचार करना आवश्यक है, यह सुनिश्चित करना कि यह लक्षितपरजीवी तत्वों 6 से अधिक है।

4. प्लवनशीलता विधि

नोट: यदि फेकल नमूने बहुत शुष्क या कठोर हैं, तो उन्हें मोर्टार में मैक्रट करें।

  1. एक चम्मच का उपयोग करके, एक प्लास्टिक कप (ऊंचाई में ~ 8.5 सेमी और व्यास में ~ 5.5 सेमी) में लगभग 3 ग्राम मल रखें।
  2. एक पेस्ट प्राप्त होने तक संतृप्त नमक समाधान के 1 एमएल जोड़ें।
  3. 1 मिनट के लिए हिलाओ और संतृप्त नमक समाधान के 100 एमएल जोड़ें।
  4. मोटे कणों (चित्रा 2 बी) से बचने के लिए एक दूसरे प्लास्टिक कप में एक प्लास्टिक छलनी के माध्यम से इस निलंबन को पास करें।
  5. निलंबन को 15-20 मिनट तक खड़े रहने दें।
  6. यह सुनिश्चित करने के लिए 1 एस के लिए एक लौ में एक टीका पाश रखें कि यह अंडे, अल्सर, या oocysts(चित्रा 2C)से मुक्त है।
  7. टीका पाश ठंडा करने के लिए 5 एस के लिए प्रतीक्षा करें (चित्रा 2 डी)।
  8. टीकाकरण लूप के साथ निलंबन की सतह से तीन बूंदें लें। तीन बूंदों में से प्रत्येक को एक ग्लास स्लाइड (चित्रा 2ई-जी) पर अलग से रखें
    नोट: सुनिश्चित करें कि बूँदें एक दूसरे के संपर्क में नहीं हैं (चित्र 2H)।
  9. एक 10x उद्देश्य (चित्रा 2I) के साथ खुर्दबीन के नीचे निरीक्षण करें। एक coverslip प्लेस अगर बढ़ाई 40x करने के लिए वृद्धि हुई है.
  10. जब छोटी बूंद में एक सकारात्मक परिणाम मनाया जाता है, तो फेकल निलंबन सतह के यादृच्छिक साइटों में पेटेंट अवधि में परजीवियों की उपस्थिति को रिकॉर्ड करने के लिए प्रयोगशाला लॉगबुक में एक क्रॉस (+) असाइन करें।

5. प्लवनशीलता विधि की व्याख्या

नोट: नकारात्मक परिणाम अनिर्णायक हैं।

  1. परीक्षण की संवेदनशीलता बढ़ाने के लिए लगातार 3 दिनों से नमूनों के साथ तीन परीक्षणों की एक श्रृंखला करें।
    नोट: सकारात्मक परिणाम पेटेंट अवधि में परजीवियों की उपस्थिति का संकेत देते हैं।

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Representative Results

इस काम में, टी. कैनिस और एन्सीलोस्टोमा एसपीपी की पहचान के लिए संग्रह और कोप्रोपैरासिटोस्कोपिक प्रक्रियाओं का वर्णन किया गया है। कैनाइन हेल्मिंथ अंडे का पता लगाने के लिए सरल फेकल प्लवनशीलता विधि के अनुकूलन के पीछे तर्क यह है कि यह तकनीक लागत प्रभावी है क्योंकि समाधान, उपकरण और सामग्री सस्ती हैं। इसलिए, विधि में एक उच्च नमूना हैंडलिंग क्षमता है क्योंकि कई नमूनों को छोटी अवधि में संसाधित किया जा सकता है। इसके अलावा, सरल फेकल प्लवनशीलता विधि प्रदर्शन करना आसान है और अपेक्षाकृत संवेदनशील है।

जानवरों का नमूना आकार और पसंद मुख्य रूप से जानवरों के मालिक की इच्छा और जंगली कुत्तों के पास आने की सुरक्षा द्वारा निर्धारित सुविधा द्वारा बनाई गई थी। वर्तमान कार्य में, प्लवनशीलता विधि का उपयोग 2017 में शुरू होने वाले 4 वर्षों के दौरान मेक्सिको में कुत्तों कैनिस ल्यूपस परिचित में एन्सीलोस्टोमा एसपीपी और टी कैनिस की घटनाओं और आवृत्तियों का आकलन करने के लिए किया गया था। 1,638 कुत्तों से फेकल नमूने एकत्र किए गए और सूक्ष्म रूप से जांच की गई। कुल 1,235 कुत्ते टी. कैनिस और एन्सीलोस्टोमा एसपीपी के लिए पॉजिटिव थे। प्लवनशीलता विधि को नियोजित करने के लक्ष्यों में से एक टोक्सोकारा या एन्सीलोस्टोमा की घटना को मापने में इसकी प्रभावशीलता का प्रदर्शन करना था, लेकिन हमने उन कारकों की गहन परीक्षा आयोजित करने का भी लक्ष्य रखा जो उनके प्रसार को प्रभावित कर सकते हैं। नतीजतन, मिश्रित संक्रमण वाले 185 जानवरों को छोड़ दिया गया था। एन्सीलोस्टोमा एसपीपी के लिए सकारात्मक नमूनों की संख्या 833 (78.95% आवृत्ति) और टी कैनिस के लिए 222 (21.04%) थी। 1,050 नमूनों में से, 75.5% (793 नमूने) को सोडा की बोतल के साथ प्लवनशीलता समाधान तैयार करके और निरंतर संचालन के 4 घंटे के लिए 3 x 1.2 वी एए रिचार्जेबल बैटरी के साथ माइक्रोस्कोप का उपयोग करके एक क्षेत्र सेटिंग में संसाधित और पढ़ा गया था। शेष 257 फेकल नमूनों की प्रयोगशाला में जांच की गई।

इस अध्ययन का एक लक्ष्य एक प्लवनशीलता समाधान और एक क्षेत्र की स्थापना में एक विधि का उपयोग करना था ताकि उन क्षेत्रों में कुत्तों के दो हेल्मिंथ परजीवियों के निदान को तेज और सुविधाजनक बनाया जा सके जहां कोई प्रयोगशाला बुनियादी ढांचा या उपकरण उपलब्ध नहीं है। प्लवनशीलता विधि के क्षेत्र अनुप्रयोग ने हमें कृमिनाशक उपचार और निवारक उपायों के बारे में सिफारिशें प्रदान करने के लिए प्रत्येक सूक्ष्म पढ़ने के तुरंत बाद 400 मालिकों को निष्कर्षों को संवाद करने में सक्षम बनाया और इसलिए, मनुष्यों या साथी जानवरों में परजीवी प्रसार से बचें। इसी तरह, क्षेत्र की सेटिंग में प्लवनशीलता तकनीक ने जंगली कुत्तों की जांच करना और उन्हें व्यवहार या भोजन का उपयोग करके कृमिनाशक उपचार प्रदान करना संभव बना दिया। चित्रा 3 ए और चित्रा 3 बी क्रमशः टी कैनिस और एन्सीलोस्टोमा एसपीपी के अंडे दिखाते हैं, प्लवनशीलता समाधान और तकनीक के बाद एक क्षेत्र सेटिंग में किए गए थे। जब ताजा मल के नमूनों को एक क्षेत्र सेटिंग में प्लवनशीलता विधि के अधीन किया गया था, तो सोडा की बोतल में तैयार समाधान हेल्मिंथ अंडे को प्लवनशीलता में लाने में सक्षम था। नमक क्रिस्टल और हवा के बुलबुले के उत्पादन की तुलना प्रयोगशाला सेटिंग में पढ़े गए नमूनों से की गई थी और ऑपरेटर द्वारा कोई अंतर नहीं पाया गया था। यह अवलोकन उत्साहजनक है और ज्ञान को चुनौती देता है कि फेकल नमूनों की एकाग्रता अधिक सटीक सूक्ष्म पढ़ने की गारंटी देती है।

जब प्लवनशीलता समाधान और मल के नमूनों को प्रयोगशाला सेटिंग में संसाधित किया गया था, तो माइक्रोस्कोप के तहत रीडिंग की आकृति विज्ञान और स्पष्टता के बारे में कोई अंतर नहीं माना गया था क्योंकि मलबे की समान मात्रा परजीवियों के क्षेत्र और प्रयोगशाला कॉप्रोमाइक्रोस्कोपिकल डिटेक्शन दोनों में समवर्ती रूप से तैरती थी। चित्रा 3ए, बी क्रमशः टी. कैनिस और एन्सीलोस्टोमा एसपीपी अंडे दिखाते हैं, जो शहरी, उपनगरीय और ग्रामीण क्षेत्रों से नमूनों के परिवहन के बाद पूरी तरह से सुसज्जित प्रयोगशाला सेटिंग में संसाधित किए गए 257 नमूनों से बरामद किए गए थे। ये परजीवी अंडे क्षेत्र की स्थितियों (चित्रा 3 सी) के तहत देखे गए लोगों से रूपात्मक रूप से भिन्न नहीं थे।

इस प्रोटोकॉल ने टी कैनिस और एन्सीलोस्टोमा एसपीपी में स्थान, वर्ष के मौसम, लिंग, नस्ल, आयु और बाहरी या इनडोर स्थितियों के प्रभाव का आकलन करने के लिए पर्याप्त संख्या में निष्कर्ष उत्पन्न किए। प्रसार डेटा 0.05 के एक महत्व मूल्य के साथ एनोवा टेस्ट का उपयोग कर तुलना की गई. तालिका 2 से पता चलता है कि टी. कैनिस ने गर्म जलवायु की विशेषता वाले राज्यों की तुलना में समशीतोष्ण और शुष्क जलवायु में वितरण की काफी अधिक आवृत्ति का प्रदर्शन किया, जबकि प्रमुख गर्म, समशीतोष्ण या शुष्क जलवायु वाले क्षेत्रों में एन्सीलोस्टोमा एसपीपी की व्यापकता में कोई उल्लेखनीय भिन्नता नहीं थी। इसी तरह, एन्सीलोस्टोमा एसपीपी और टी. कैनिस गर्मियों में सबसे अधिक पाए जाते हैं। यह पाया गया कि 60.86% पुरुष एन्साइलोस्टोमियासिस के लिए सकारात्मक थे और 37.38% टोक्सोकेरियासिस के लिए। इसके अलावा, 6 महीने से कम उम्र के पिल्लों में टी कैनिस अधिक बार पाया गया था; जबकि एन्सीलोस्टोमा एसपीपी वयस्क कुत्तों में अधिक निदान किया गया था। दिलचस्प बात यह है कि कुत्तों की नस्लों के बीच कोई अंतर नहीं पाया गया। डॉग हुकवर्म ने 65.54% बाहरी कुत्तों को संक्रमित किया; फिर भी, टी कैनिस को बाहरी या इनडोर स्थिति वाले कुत्तों में समान रूप से पाया गया था।

Figure 1
चित्रा 1: कुत्तों से मल नमूना संग्रह। (ए) जंगली कुत्तों से मल के नमूने एकत्र करते समय सावधानी बरतनी चाहिए। जब संभव हो, ताजा मल एकत्र किया जाना चाहिए और प्रयोगशाला में प्रस्तुत करने और कोप्रोपैरासिटोस्कोपिक विश्लेषण के लिए प्लास्टिक की थैली में रखा जाना चाहिए। नमूने 4 डिग्री सेल्सियस पर प्रशीतित किया जाना चाहिए और संग्रह के 24 घंटे के भीतर स्टायरोफोम बक्से या अछूता धातु लिफाफे में रखा जाना चाहिए। (बी) एक मानक के रूप में तीन ग्राम मल की सिफारिश की जाती है; इसलिए, 2-5 ग्राम उचित है। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 2
चित्रा 2: एक संतृप्त नमक समाधान की तैयारी और माइक्रोस्कोपी के लिए फेकल निलंबन प्रसंस्करण। (ए) नमक से बने संतृप्त घोल का आदर्श घनत्व 1.20 से अधिक होना चाहिए। यह जांचने की अत्यधिक अनुशंसा की जाती है कि तल पर कोई क्रिस्टल नहीं हैं और समाधान पारदर्शी है। (बी) एक प्लास्टिक छलनी के माध्यम से फेकल निलंबन को पारित करने से मोटे कण निकल जाते हैं। (सी) टीकाकरण लूप को एक लौ (एक प्रयोगशाला बर्नर या एक सामान्य पोर्टेबल लाइटर) के संपर्क में आना चाहिए ताकि यह सुनिश्चित हो सके कि यह संदूषण से मुक्त है। (डी) इनोक्यूलेशन लूप को ठंडा होने दें और निलंबन की सतह पर विभिन्न साइटों से तीन बूंदें लें। (ई) कांच स्लाइड पर पहली बूंद रखने के बाद, बूंद के छलकने को कम करने के लिए स्लाइड चलती से बचें. ग्लास स्लाइड एक पतली और पारदर्शी मंच प्रदान करता है जो नमूनों के अवलोकन की अनुमति देता है। (एफ) दूसरी बूंद को कांच की स्लाइड के बीच में रखें। फेकल सस्पेंशन की सतह से दूसरी बूंद लेने से निलंबन में अंडे खोजने की संभावना बढ़ जाती है जहां परजीवी संरचनाएं असमान रूप से वितरित हो सकती हैं। (ह) तीसरी बूँद को काँच की स्लाइड पर रखिए। फेकल निलंबन की सतह से एक तीसरी बूंद दूसरे क्षेत्र के अवलोकन की अनुमति देगी जहां तैरते अंडे केंद्रित हो सकते हैं। (एच) फेकल निलंबन की सतह के विभिन्न क्षेत्रों से नेमाटोड अंडे का पता लगाने के लिए ग्लास स्लाइड पर तीन बूंदों को अलग से देखा जाता है। (I) 10x उद्देश्य का उपयोग करके माइक्रोस्कोप के नीचे नमूने का निरीक्षण करें। यदि उद्देश्य को 40x में बदल दिया जाता है, तो फेकल सस्पेंशन ड्रॉपलेट्स पर एक कवर स्लिप रखें। जब छोटी बूंद में एक सकारात्मक परिणाम मनाया जाता है, तो फेकल निलंबन सतह के यादृच्छिक साइटों में पेटेंट अवधि में परजीवियों की उपस्थिति को चिह्नित करने के लिए एक क्रॉस (+) असाइन करें। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 3
चित्रा 3: टोक्सोकारा कैनिस और एन्सीलोस्टोमा एसपीपी के अंडे 40x आवर्धन का उपयोग करके प्रकाश माइक्रोस्कोपी द्वारा पता लगाया गया। (ए) 40x आवर्धन का उपयोग करके प्रकाश माइक्रोस्कोपी द्वारा टोक्सोकारा कैनिस के अंडे का पता लगाया गया। प्लवनशीलता विधि ने मोटे पदार्थों (एक क्षेत्र सेटिंग में एकत्रित) से मुक्त स्वच्छ सूक्ष्म क्षेत्रों के दृश्य की अनुमति दी। प्लवनशीलता समाधान की तैयारी की विधि के बावजूद, अंडे दिखाई दे रहे थे और मुख्य रूप से रूपात्मक परिवर्तनों के बिना देखे गए थे। (बी) एन्सीलोस्टोमा एसपीपी के अंडे 40x आवर्धन का उपयोग करके प्रकाश माइक्रोस्कोपी द्वारा पता लगाया गया। भले ही मल की कोई एकाग्रता नहीं की गई थी (एक क्षेत्र सेटिंग में), सरल प्लवनशीलता विधि ने मल में अंडे के रूपात्मक पता लगाने की कमियों को संबोधित किया जब प्रक्रिया वर्तमान विधि के अनुसार की गई थी। (सी) टी. कैनिस और एन्सीलोस्टोमा एसपीपी के अंडे 40x आवर्धन का उपयोग करके प्रकाश माइक्रोस्कोपी द्वारा पता लगाया गया। इन अंडों की रूपात्मक विशेषताएं (एक प्रयोगशाला सेटिंग में बरामद) स्पष्ट थीं, भले ही मल के नमूनों की कोई एकाग्रता नहीं की गई थी और एक क्षेत्र सेटिंग में बरामद किए गए अंडों से अलग नहीं थी। स्केल सलाखों = 75 माइक्रोन. कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

एन्सीलोस्टोमा एसपीपी। टोक्सोकारा कैनिस
आबोहवा गर्म जलवायु 38.66ए 22.52ए
शुष्क जलवायु 29.41ए 36.03ए
समशीतोष्ण जलवायु 31.93ए 41.44बी
सोता 23.76ए 19.81एक
गर्मियां 49.81बी 50.00बी
पतझड़ 17.52एक 20.27ए
सर्दियां 8.88सी 9.90सी
लिंग पुरुष 60.86ए 62.61ए
मादा 39.13बी 37.38बी
उम्र 0-3 महीने 18.72ए 51.80ए
3-6 महीने 15.48ए 32.43बी
> 6 महीने 22.44ए 10.36सी
> 1 वर्ष 43.33बी 5.40सी
क़िस्‍म संकर नस्ल 52.78ए 55.86ए
शुद्ध नस्ल 47.22ए 44.14ए
आवास की स्थिति अंतर्द्वारीय 34.45ए 52.25ए
घर के बाहर 65.54ए 47.74बी

तालिका 2: जलवायु, मौसम, लिंग, आयु, नस्ल और आवास की स्थिति के अनुसार 4 वर्षों के दौरान मेक्सिको में कुत्तों में एन्सीलोस्टोमा एसपीपी और टोक्सोकारा कैनिस की व्यापकता (%) । आंकड़ों से संकेत बताते हैं कि गर्म, समशीतोष्ण या शुष्क जलवायु की विशेषता वाले क्षेत्रों में एन्सीलोस्टोमा एसपीपी की व्यापकता में कोई महत्वपूर्ण भिन्नता नहीं है। इसके विपरीत, टी. कैनिस गर्म जलवायु की तुलना में समशीतोष्ण और शुष्क जलवायु में विशेष रूप से उच्च प्रसार प्रदर्शित करता है। इसके अतिरिक्त, एन्सीलोस्टोमा एसपीपी और टी. कैनिस दोनों को गर्मी के मौसम में सबसे अधिक बार पहचाना जाता है। आंकड़ों के विश्लेषण से पता चलता है कि 60.86% नर कुत्तों ने एन्साइलोस्टोमियासिस के लिए सकारात्मक परीक्षण किया, जबकि 37.38% ने टोक्सोकेरियासिस के लिए सकारात्मक परीक्षण किया। इसके अलावा, टी. कैनिस आमतौर पर 6 महीने से कम आयु के पिल्लों में पाया जाता है, जबकि एन्सीलोस्टोमा एसपीपी वयस्क कुत्तों में अधिक प्रचलित है। दिलचस्प बात यह है कि विभिन्न कुत्तों की नस्लों के बीच कोई स्पष्ट अंतर नहीं देखा गया। निष्कर्ष बताते हैं कि 65.54% बाहरी कुत्ते डॉग हुकवर्म से संक्रमित हैं, जबकि टी. कैनिस इनडोर और आउटडोर कुत्तों में समान रूप से प्रचलित है। * कारक के एक स्तंभ के भीतर औसत मान (जलवायु, मौसम, लिंग, आयु, नस्ल और आवास) के बाद एक ही अक्षर एनोवा टेस्ट के अनुसार पी < 0.05 पर काफी भिन्न नहीं हैं।

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Discussion

टी . कैनिस और एन्सीलोस्टोमा एसपीपी जैसे नेमाटोड कुत्तों की छोटी आंत में निवास कर सकते हैं और मनुष्यों को प्रेषित होने की क्षमता रखते हैं। टी. कैनिस की वजह से नैदानिक संकेत युवा कुत्तों में गंभीर हैं, खराब विकास, श्वसन संबंधी मुद्दों, या पाचन तंत्र के घावों28 के रूप में प्रकट होते हैं। वयस्क कुत्तों में, संक्रमण आमतौर पर हल्का होता है। निदान एक फेकल नमूने में विशेषता अंडे की पहचान करने पर निर्भर करता है। यह स्थिति कुत्तों को कृमिनाशक उपचार निर्धारित करने के लिए लगातार कारणहै 29. टोक्सोकारा की महामारी विज्ञान को समझने के लिए, यह पहचानना आवश्यक है कि परजीवी जन्म से पहले नाल के माध्यम से और व्हेलिंग के तुरंत बाद गैलेक्टोजेनिक संक्रमण के रूप में चूसने के माध्यम से मां से पिल्ला में स्थानांतरित हो सकता है। संक्रामक अंडे का सेवन करते समय मनुष्य टी. कैनिस को अनुबंधित कर सकते हैं, जो दूषित मिट्टी या संक्रमित कुत्ते के फर जैसे विभिन्न माध्यमों से हो सकता है। इस मामले में, मनुष्य पैराटेनिक मेजबान के रूप में काम करते हैं, और जबकि कोई परजीवी प्रजनन नहीं होता है, अंडों से जारी लार्वा संभावित रूप से नुकसान पहुंचा सकते हैं, खासकर30 बच्चों के मामले में।

कुत्तों में हुकवर्म एन्सीलोस्टोमा एसपीपी के साथ संक्रमण तब होता है जब जानवर लार्वा को निगलना करते हैं या जब लार्वा त्वचा में प्रवेश करते हैं। पिल्ले एक पैराटेनिक मेजबान का उपभोग करके या लैक्टोजेनिक मार्ग31 के माध्यम से संक्रमण का अनुबंध कर सकते हैं। परिपक्व हुकवर्म रक्त पर फ़ीड करते हैं, संभावित रूप से गंभीर एनीमिया और जठरांत्र संबंधी लक्षणों के लिए अग्रणी होते हैं, खासकर युवा कुत्तों में। त्वचा के माध्यम से होने वाले संक्रमण के परिणामस्वरूप जिल्द की सूजन होती है, जो आमतौर पर संक्रमण की शुरुआत के लगभग एक सप्ताह बाद हल हो जाती है। सहायक चिकित्सा के साथ विभिन्न कृमिनाशक दवाओं को नियोजित किया गया है। हालांकि, कृमिनाशक प्रतिरोध की खबरें आई हैं। एन्सीलोस्टोमा में मनुष्यों के लिए रोगजनक होने की क्षमता है। एल 3 लार्वा के ट्रांसक्यूटेनियस ट्रांसमिशन से एक ऐसी स्थिति हो सकती है जिसे त्वचीय लार्वा माइग्रेन के रूप में जाना जाता है। ये घाव आमतौर पर कुछ महीनों में उपचार के बिना हल होते हैं। दुर्लभ मामलों में, कैनाइन हुकवर्म मानव जठरांत्र संबंधी मार्ग में पलायन कर सकते हैं, ईोसिनोफिलिक आंत्रशोथ30 उत्प्रेरण।

कुत्तों में परजीवी का सटीक, किफायती और तेजी से निदान कुत्ते के हेलमनिथेसिस के हमारे महामारी विज्ञान के ज्ञान को बढ़ाने के लिए आवश्यक है। इस कारण से, हमने टी. कैनिस और एन्सीलोस्टोमा एसपीपी का पता लगाने के लिए एक क्षेत्र सेटिंग में उपयोग की जाने वाली सरल प्लवनशीलता तकनीक के एक प्रोटोकॉल को अनुकूलित किया। वर्तमान प्रोटोकॉल में सामना किया गया एक प्रासंगिक मुद्दा जंगली कुत्तों से नमूनों का संग्रह था, क्योंकि इन जानवरों को आमतौर पर संभालना मुश्किल होता है। इसलिए, कुत्तों को देखकर और उनका पीछा करके नमूना लिया गया जब तक कि वे शौच नहीं करते, नमूना विधि को समय लेने वाली, चुनौतीपूर्ण और किसी तरह खतरनाक बना दिया। हमारे अनुभव के अनुसार, हम दृढ़ता से आश्रय कुत्तों में परजीवी अध्ययन का आकलन करने की सलाह देते हैं।

जूनोटिक हेल्मिंथ अंडे की वसूली के बारे में, गुणात्मक कोप्रोस्कोपी नैदानिक उद्देश्यों के लिए परजीवी प्रयोगशाला में आमतौर पर उपयोग की जाने वाली पद्धति बनी हुई है1. पिछले अध्ययनों में पाया गया है कि संतृप्त नमक समाधान का उपयोग करके प्लवनशीलता तकनीक प्रत्यक्ष माइक्रोस्कोपी की तुलना में अधिक विश्वसनीय है। उदाहरण के लिए, ड्राइडन और सहयोगियों ने प्लवनशीलता तकनीक द्वारा संसाधित 206 फेकल नमूनों में एन्सीलोस्टोमा एसपीपी अंडे के लिए 95.15% की संवेदनशीलता निर्धारित की और प्रत्यक्ष माइक्रोस्कोपी32 द्वारा 27.18%। यह प्लवनशीलता समाधान के घनत्व प्लवनशीलता विधि 14,20,23 के लिए एक महत्वपूर्ण कारक है कि स्वीकार किया जाता है. उन समाधानों में जो उस घनत्व तक नहीं पहुंचते हैं, परजीवी रूपों को तैरने या कभी तैरने में अधिक समय लगता है। जब एक प्लवनशीलता समाधान overasaturated है, यह मिनट के एक जोड़े में क्रिस्टलीकृत और भी पहले अगर एक coverslip20 रखा जाता है.

इस प्रोटोकॉल में प्लवनशीलता समाधान की पसंद तैयारी, सुविधा, लागत और पर्यावरणीय प्रभाव में आसानी पर आधारित थी। भले ही चीनी समाधान क्रिस्टलीकृत होने में अधिक समय लेता है, फॉर्मेलिन या फिनोल को एक संरक्षक के रूप में जोड़ा जाना चाहिए और चिपचिपा या चिपचिपा सनसनी को कम करना चाहिए; जो इस अध्ययन में प्रचलित क्षेत्र की स्थितियों के तहत एक असुविधा है। इसके अलावा, पर्यावरणीय नियमों के कारण रासायनिक अभिकर्मकों का निपटान एक जटिल मुद्दा है। इस अध्ययन में डेटा से पता चला है कि एक प्लवनशीलता समाधान तैयार करने और उबालने के लिए प्रयोगशाला उपकरणों की उपलब्धता की कमी के कारण सोडा की बोतल का उपयोग करके क्षेत्र की स्थितियों के तहत आम टेबल नमक के साथ तैयार संतृप्त समाधान, प्रयोगशाला सेटिंग में तैयार किए गए के रूप में प्रभावी था। एकमात्र बोधगम्य अंतर सोडा की बोतल को हिलाने में अधिक समय लगता है जब तक कि एक पारदर्शी समाधान नहीं देखा जा सकता है। संतृप्त समाधान तैयार करने के लिए दोनों तरीकों का उपयोग करके तैयार किए गए नमूने के लिए सूक्ष्म अवलोकन समान रूप से साफ थे। उपरोक्त कथन की पुष्टि करने के लिए बड़ी संख्या में नमूनों के साथ भविष्य में अधिक अध्ययन करना महत्वपूर्ण है। फिर भी, यह समय लेने वाला है और बोतल के अंदर समाधान को घंटों तक हिलाने के शारीरिक प्रयास की आवश्यकता होती है। प्रोटोकॉल का एक और महत्वपूर्ण कदम अंडे तैरने और सतह पर ध्यान केंद्रित करने के लिए अनुमति देने के लिए कम से कम 15 मिनट के लिए मल निलंबन खड़े दे के होते हैं. हालांकि, आराम का समय जितना लंबा होगा, उतना ही अधिक मलबा तैरेगा और कुछ घंटों के बाद, अंडे ख़राब या टूट जाएंगे। यह देखते हुए कि कोप्रोपैरासिटोस्कोपिक विधियों की संवेदनशीलता और विशिष्टता कम है और नैदानिक परीक्षणों के रूप में इन विधियों की सटीकता उपयोगकर्ता के कौशल पर निर्भर करती है, वर्तमान अध्ययन में, प्रशिक्षित और अनुभवी परजीवीविदों ने प्लवनशीलता तकनीक का प्रदर्शन किया और परजीवियों की पहचान की।

यह अध्ययन, हमारे ज्ञान के लिए, मेक्सिको में कुत्तों में एन्सीलोस्टोमा एसपीपी और टी कैनिस के प्रसार का अनुमान लगाने वाला पहला है, जो एक क्षेत्र सेटिंग में सरल प्लवनशीलता विधि के साथ जांच किए गए फेकल नमूनों का उपयोग करता है। यह यहाँ के साथ के साथ प्रदर्शित किया गया था कि प्लवनशीलता तकनीक हम इस्तेमाल किया, दशकों के बावजूद यह उपयोग में किया गया है, अभी भी एक अत्यधिक प्रभावी, किफायती, और तेजी से नैदानिक परीक्षण14 है. फिर भी, कुत्ते के हेलमन्थ्स के निदान के लिए उपयोग की जाने वाली तुलना में उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता के साथ कोप्रोपैरासिटोस्कोपिक तकनीकें हैं; जैसे अवसादन एकाग्रता, जैसा कि फॉस्ट तकनीक का मामला है। इसके अलावा, यह ध्यान रखना महत्वपूर्ण है कि फॉस्ट, जो एक एकाग्रता विधि है, को प्रोटोजोआ का पता लगाने में भी अधिक प्रभावी दिखाया गया है जैसे कि जिआर्डिया33। बहरहाल, इस अध्ययन के लिए हमने जो कोप्रोपैरासिटोस्कोपिक विधि चुनी थी, उसमें लागत जैसे कई फायदे थे। फॉस्ट तकनीक खारा-संतृप्त समाधान के साथ प्लवनशीलता की तुलना में अधिक महंगा है क्योंकि इसके लिए अतिरिक्त और महंगे उपकरण जैसे अपकेंद्रित्र की आवश्यकता होती है। अन्य एकाग्रता विधियां जैसे कि जिंक सल्फेट जैसे अभिकर्मकों का उपयोग करने वाले आम नमक की तुलना में अधिक महंगे हैं और अपकेंद्रित्र में आवश्यक वॉश की संख्या के कारण अधिक समय की आवश्यकता होती है। इसलिए, फॉस्ट तकनीक क्षेत्र के काम में इसके उपयोग के लिए सीमित है जहां अपकेंद्रित्र तक कोई पहुंच आम नहीं है।

सबसे महत्वपूर्ण बात, सरल प्लवनशीलता तकनीक की एक सीमा यह है कि यह क्रिप्टोस्पोरिडियम oocysts, Giardia cysts, या Trichuris अंडे का पता लगाने के लिए पर्याप्त संवेदनशील नहीं है। परजीवी रूपों को केंद्रित करने के लिए सेंट्रीफ्यूजेशन प्रक्रियाओं का उपयोग करने वाली तकनीकों का उपयोग इसलिए किया जाना चाहिए यदि इन प्रजातियों का निदान इरादा है। यह उजागर करना महत्वपूर्ण है कि इस अध्ययन में रिपोर्ट की गई पीढ़ी की सकारात्मकता दर को निर्णायक नहीं माना जाना चाहिए क्योंकि एक सुविधा पद्धति का उपयोग नमूना रणनीति के रूप में किया गया था। यह ध्यान रखना महत्वपूर्ण है कि ऐसी स्थितियां हो सकती हैं, जैसे कि चुनौतीपूर्ण पशु प्रबंधन वाले आश्रयों में, जहां कुत्तों में हेल्मिंथ परजीवी की पहचान करना महत्वपूर्ण हो जाता है। नतीजतन, इस प्रोटोकॉल को संयुक्त नमूनों के संग्रह को समायोजित करने के लिए भविष्य में समायोजन की आवश्यकता हो सकती है।

एक कमजोर बिंदु के रूप में, यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि सरल प्लवनशीलता विधि और NaCl के संतृप्त समाधान की तैयारी एक विशिष्ट उद्देश्य के लिए विकसित की गई थी-ज्यादातर क्षेत्र की स्थितियों के तहत कुत्ते के मल की जांच करने के लिए-लेकिन सरल प्लवनशीलता प्रक्रिया की संवेदनशीलता आम तौर पर माना जाता है कम। इसलिए, भारी परजीवी प्रजातियों के अल्सर या अंडे का पता लगाने के लिए, एक एकाग्रता तकनीक का उपयोग दृढ़ता से सुझाव दिया जाता है। सरल प्लवनशीलता विधि की कम संवेदनशीलता को देखते हुए, भले ही यह किसी क्षेत्र या प्रयोगशाला सेटिंग में किया जाता है, यह संदेह करना उचित था कि क्या यह तकनीक कैनाइन हेल्मिंथ परजीवी के महामारी विज्ञान के अध्ययन के लिए पसंद की विधि के रूप में उपयोगी होगी। बहरहाल, इस अध्ययन में कुत्तों में उच्च एन्सीलोस्टोमा एसपीपी की व्यापकता और टी. कैनिस अंडे का पता लगाने से संकेत मिलता है कि सरल प्लवनशीलता विधि, चाहे किसी क्षेत्र या प्रयोगशाला सेटिंग में की गई हो, सबूत प्रदान करने के लिए उपयोगी है जो आगे महामारी विज्ञान के अध्ययन का समर्थन कर सकती है और इन नेमाटोड के साथ कुत्तों और मनुष्यों के संक्रमण को कम करने के लिए नियंत्रण और निवारक उपायों का प्रस्ताव दे सकती है।

सरल प्लवनशीलता विधि का उपयोग करते हुए, हमने टी. कैनिस और एन्सीलोस्टोमा एसपीपी को प्रभावित करने वाले कारकों का विश्लेषण किया। कैनिस निष्कर्ष नवीनतम शोध के साथ समझौते में थे जो इंगित करता है कि परजीवी समशीतोष्ण और उष्णकटिबंधीय क्षेत्रों में विशेष रूप से अधिक प्रचलित हैं। यह पूर्व अध्ययनों के साथ संरेखित करता है जिन्होंने जांच की है कि पर्यावरणीय कारक, विशेष रूप से तापमान और वर्षा, परजीवी प्रजातियों 34,35,36की पारिस्थितिक सीमा को कैसे प्रभावित करते हैं। वर्तमान परिणामों से पता चला है कि दोनों हेलमन्थ पुरुषों को काफी अधिक अनुपात में संक्रमित करते हैं। यह अनुमान लगाना उचित है कि यह खोज इसलिए थी क्योंकि पुरुषसंक्रमण37,38के प्रति प्रतिरक्षात्मक रूप से कम प्रतिक्रियाशील हैं। आयु टी. कैनिस की व्यापकता को प्रभावित करती है क्योंकि पिल्ले इस परजीवी से अधिक प्रभावित थे। यह खोज पहले के शोध के साथ संरेखित करती है जो दर्शाती है कि यह परजीवी पिल्लों को अधिक हद तक प्रभावित करता है, जबकि वयस्क प्रतिरोध में वृद्धि करते हैं, जिसके परिणामस्वरूप संक्रमण 6,39 की संभावना कम होती है। दोनों संकर नस्ल और शुद्ध कुत्तों ने टोक्सोकारा कैनिस और एन्सीलोस्टोमा एसपीपी के तुलनीय प्रसार दिखाए। हालांकि, जंगली कुत्तों ने घरेलू सेटिंग्स में रहने वाले कुत्तों की तुलना में एन्सीलोस्टोमा एसपीपी के उच्च प्रसार का प्रदर्शन किया। यह खोज पिछली रिपोर्टों से असहमत है जोकुत्ते की नस्लों 6 के बीच अंतर का पता नहीं लगाती थी। यह निष्कर्ष निकाला जा सकता है कि संतृप्त खारा समाधान की तैयारी के भविष्य के अनुप्रयोगों और इस प्रोटोकॉल में उपयोग की जाने वाली सरल प्लवनशीलता विधि को क्षेत्र या प्रयोगशाला स्थितियों के तहत नियमित फेकल परीक्षाओं के लिए आयोजित किया जा सकता है।

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Disclosures

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए हितों का कोई टकराव नहीं है।

Acknowledgments

लेखक अनुदान PAPIIT IN218720 के माध्यम से वित्तीय संसाधन प्रदान करने के लिए Universidad Nacional Autónoma de México के Dirección General de Asuntos del Personal Académico और अनुरोधित विस्तार देने के लिए डॉ. क्लाउडिया मेंडोज़ा के आभारी हैं। यह काम मेरी प्यारी निकोल को समर्पित है, जिनका 2019 में निधन हो गया। तुम हमेशा मेरे दिल में जिंदा रहोगे।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
3 x 1.2 V AA rechargeable batteries Energizer Sold in retail stores
Bunsen burner Viresa FER-M224
Disposable 12-oz glass cup Uline Mexico S-22275 Sold in retail stores
Glass slides Velab, Mexico VEP-P20
Inoculating loop VelaQuin, Mexico CRM-5010PH 
Light Microscope VelaQuin, Mexico VE-B2
Lighter Bic J25 Sold in retail stores
One plastic cup (12 oz) Amazon ASIN B08C2CRHSH Can be any kitchen plastic reuseable cup
Plastic cups  (size of a dice or urine sample cup) diameter 5.5 cm and height 8.5 cm, two cups Amazon Layhit-Containers-ZYHD192919 Can be any kitchen plastic reuseable cup
Plastic strainer 10 cm Ecko ASIN B00TUAAVWI Can be any kitchen plastic strainer
Soda bottle Coca-Cola 1-liter Sold in retail stores
Spoon Amazon Basics ASIN B00TUAAVWI Can be any kitchen spoon
Table salt La Fina Sold in retail stores

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References

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Segura, J., Alcala-Canto, Y.,… More

Segura, J., Alcala-Canto, Y., Figueroa, A., Del Rio, V., Salgado-Maldonado, G. A Simple Fecal Flotation Method for Diagnosing Zoonotic Nematodes Under Field and Laboratory Conditions. J. Vis. Exp. (202), e66110, doi:10.3791/66110 (2023).

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