Summary
פרוטוקול זה מתאר את השימוש של תגובות צימוד אמיד של חומצה וdiaminoalkanes isonicotinic כדי ליצור ligands הגישור המתאים לשימוש בסינתזה של מתחמי פלטינה multinuclear, המשלבים היבטים של התרופות נגד סרטן BBR3464 וpicoplatin.
Introduction
תרופות נגד סרטן פלטינום יישארו אחד מבני המשפחה בשימוש נרחב ביותר של סוכנים בטיפול בסרטן בבני אדם 1. למרות ההצלחה שלהם, הם מוגבלים ביישומם על ידי לוואי תלוי מינון לוואי קשה 2-4. מינונים מוגבלים שיכול להינתן לחולים גם אומר שגידולים יכולים לפתח עמידות 5. כמו סמים כזה, חדשים ממשיכים להיות שפותחו כדי לשפר את פרופיל תופעות לוואי ולהתגבר על התנגדות שנרכשה, כמו phenanthriplatin 6 וphosphaplatin 7.
בסוף 1990s, תרופת הפלטינה trinuclear פותחה, BBR3464 (ערכה 1) 8, כלומר עד 1,000 x יותר ציטוטוקסיות במבחנה מסמי פלטינה, ציספלטין המוביל. BBR3464 הוא גם מסוגלת להתגבר על התנגדות שנרכשה בפנל של שורות תאי הסרטן אנושיות 9. למרבה הצער, הפעילות המוגברת של BBR3464 מתאימה על ידי 50 - 100 - לקפל רעילות גבוהה יותר, אשרמגביל את השימוש בו 10-12. כמו כן, נפגעת בקלות בגוף, כלומר קטן של התרופה מגיע לגרעיני סרטן שלמים 9.
Picoplatin היא תרופה על בסיס פלטינה מונונוקלארים המכילה ליגנד 2-methyl-פירידין (ערכה 1) 13. הקבוצה מתיל של תרופה זו מגנה עליו מפני התקפה של נוקלאופילים ביולוגיים; בפרט ציסטאין ומתיונין המכיל פפטידים / חלבונים 14-16. ככזה, התרופה היא יציבה למדי ויש לו ריכוז גבוה בהרבה המגיע לגרעינים בסרטן בהשוואה לשתי BBR3464 וציספלטין 17. תגובתיות מופחתת שלה גם אומרת יש picoplatin מינון המכסימלי נסבל גבוה יותר בהשוואה לBBR3464 וציספלטין 10,18,19.
פרויקט זה ולכן ביקש לשלב את המאפיינים של BBR3464 וpicoplatin לייצר תרופות חדשות כי הם מסוגלים להתגבר על התנגדות שנרכשה המציגות יציבות ביולוגית משופרת ותופעות effe פחות חמורCTS (למשל, איור 1). בעשותו כן, מגוון רחב של מתחמי פלטינה dinuclear הוכנו עם ligands bispyridine גישור 20. Ligands מבוצעים באמצעות תגובות צימוד אמיד עם חומצת isonicotinic, או נגזרות שלה כמו 2-methyl-isonicotinic חומצה, diaminoalkanes באורך משתנה. תגובה שווה ערך שומה אחד ligands עם שני שווי שומה של transplatin תשואות מתחמים הרצויים פלטינה (1 Scheme).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1 סינתזה של N, N '-. (, Alkane-1-n diyl) diisonicotinamide
- ייבש צוואר בודד או בקבוק תחתית עגול שלושה צוואר בתנור (100 º C, 1 שעות) כדי להבטיח את כל הלחות מוסרת.
- הוספת חומצה מוצקה isonicotinic, או הנגזר שלו, לבקבוק יחד עם בר בחישה מגנטי. אם יגנד diaminoalkane (ים) הינו מוצקים בטמפרטורת חדר, ולאחר מכן 0.5 שומה (לשומות מספר חומצת isonicotinic) הוא הוסיף לבקבוק בשלב זה.
- מכסה את הצוואר (ים) של הבקבוק עם septa גומי ולהחליף את האוויר בבקבוק עם חנקן או באמצעות זרם חנקן רציף או באמצעות השימוש בבלוני חנקן מלא.
- שימוש במחט מזרק ואת מזרק כדי להוסיף dimethylformamide נטול מים או dimethylsulfoxide (4 מיליליטר ל500 מ"ג של חומצת isonicotinic או חומצת 2-methyl-isonicotinic) לפזר המוצק. אם המוצקים לא מתמוססים בקלות, ולאחר מכן לחמם את הפתרון בעדינות.
- הוסף 7 שווי שומה (להר של חומצת isonicotinic בשימוש) של triethylamine (בסיס חלש) ו0.5 שווי שומה של diaminoalkane. אם הפתרון הוא נוזלי בטמפרטורת חדר, ולאחר מכן להוסיף 1.5 שווי שומה.
- הוספה מקבילה שומה אחד אנהידריד 1-propylphosphonic (סוכן צימוד) עם ערבוב רציף ולאפשר את התגובה כדי להשלים מעל 5-12 שעה.
2. טיהור ligands
- לbispyridine ligands נעשה באמצעות ligands diaminoalkane עם 10 או יותר קבוצות מתילן, להמתין למוצרים כדי לזרז מפתרון כתגובה מתקדמת.
- לbispyridine ligands נעשה באמצעות diaminooctane, לזרז את המוצר על ידי הוספה ~ 40 מיליליטר של מים.
- לbispyridine נעשה באמצעות diaminoalkanes של שניים עד שש קבוצות מתילן, להוסיף ~ 40 מיליליטר של מים ומאפשר התרכובות להתגבש על 1-3 ימים.
- אסוף כל יגנד bispyridine ידי סינון ואקום וrecrystallize מכ 400-500 מיליליטר מים רותחים ל200מ"ג של ליגנד. הערה: עוד מים נחוצים לligands bispyridine כבר בשל המסיסות במים המופחת בהרבה שלהם.
- הוספת NaOH וKOH (pH 9) לפתרון על מנת להבטיח כי התרכובות הן בסיסים חופשיים על גיבוש מחדש.
3. סינתזה וטיהור של קומפלקסי הפלטינה Dinuclear
- באופן מלא לפזר טרנס diamminodichloridoplatinum (II), transplatin, במים חמים (70-80 מעלות צלזיוס) (150 מיליליטר ל200 מ"ג transplatin) כדי לייצר פתרון בצבע חום צהוב בהיר.
- הוספה מקבילה שומה 0.5 של ליגנד bispyridine ומערבבים את הפתרון בטמפרטורה עד להמסת ליגנד (פתרון ברור). לחכות לפתרון להפוך ליד חסר צבע, מכבה את האש, ומערבבים בטמפרטורת חדר לכמה שעות נוספות.
- הסר את הממס על ידי אידוי סיבובי, אשר תניב אבקה בצבע צהובה.
- לטהר, מורכב הפלטינה (es) על ידי ההמסה בכמות מינימאלית של מים חמים (~ 50 &# 186, C). אם מוצקים בצבע צהובים או לבנים הנותרים נמצאים, ואז לסנן את אלה.
- הוספת אצטון לפתרון עד משקע לבן נוצר שנראה טופס פולימריים של מתחמי המתכת ומייצג עד 10% מתוצר התגובה. המשך תוספת של אצטון (~ 20-30 מיליליטר נוסף) ועד לא יותר משקע מופיע. הערה: המשקע הלבן הזה הוא טומאה.
- הסר את המשקע הזה על ידי סינון התוכן באמצעות נייר ניילון מסנן (0.2 גודל נקבובית מיקרומטר) וסיבובי מתאדה הפתרון שנותר ליובש, אשר יניבו מוצר טהור. הערה: במידת צורך, ניתן לבצע צעדי ממטרים אצטון לאחר מכן נוספים עד המורכב הוא טהור.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Ligands bispyridine וקומפלקסי הפלטינה שלהם בהתאמה dinuclear מתאפיינים 1 H, 13 C ו195 Pt תמ"ג (לוחות 1 ו -2), וספקטרוסקופית מסת יינון electrospray. נקודות היתוך מדויקות ניתן לקבוע באמצעות סריקת calorimetry ההפרש וטהרה נקבעה על ידי מיטב ניתוח יסודות לתוכן אחוז C, H ו-N. רוב השימוש הוא 1 H NMR כפי שהוא מהיר וקל לשימוש, נותנים תוצאות בתוך דקות של בידוד של המוצרים הסופיים עם תהודות שיכולים בודאות להוכיח צימוד אמיד ותיאום פלטינה (לוחות 1 ו -2) בהצלחה.
יש חומצת Isonicotinic שלוש תהודות; שתי כפילויות באזור ארומטי (7 עד 9 עמודים לדקה) ותהודה רחבה מאוד סביב 13 עמודים לדקה לפרוטון החומצה קרבוקסילית. כל תהודות פרוטון diaminoalkane ממוקמות באזור אליפטי בין עמודים לדקה 1 ו -4. כמו tהוא באורך של עליות שרשרת diaminoalkane רבות של תהודות תילן להיות שווה ערך, ובתור שכזה, פחות פסגות הם נצפו באזור אליפטי מאשר היה צפויה; למרות שהם באופן משמעותי יותר אינטנסיביים וניתן להקצות באופן רופף על ידי האינטגרציות שלהם (לוחות 1 ו -2). לדוגמא ראה איורים 1 ו -2 למבנה הכימי ו1 ספקטרום H NMR של N, N '- (אוקטן-1 ,8-diyl) bis (isonicotinamide), ביאו, ליגנד. בשל סימטריה במולקולה חמש תהודות אליפטי בדרך כלל ניתן לצפות ליאו; אבל ארבע הפסגות תילן ביותר הפנימיות כולם מגנטי שווה ערך ולהופיע כתהודה גדולה אחד ב~ עמודים לדקה 1.2.
התהודה הפרוטון האמין של שרשרת diaminoalkane מנותקת ממוקמת באזור אליפטי והיא התהודה החשובה ביותר כפי שהוא נע downfield באופן משמעותי, לאזור ארומטי, עם לא צימודo החומצה קרבוקסילית. התהודה הפרוטון אמיד שלאחר מכן הוא ראה סביב 8.7 עמודים לדקה לכל ligands אלה, כתהודת שלישייה רחבה יחסית (איור 2).
תיאום של קבוצת הפלטינה לligands bispyridine הוא ציין דרך משמרות סלקטיבית של התהודות ריחניות של ליגנד (0.15 עמודים לדקה downfield המשמרת של התהודות הא ו0.07 עמודים לדקה upfield המשמרת של תהודות Hb) והשמירה על צימוד פלטינה על התהודה כפיל עבור פרוטונים חה (איור 3). תיאום של קבוצות הפלטינה ליגנד bispyridine גם ניתן להבחין בקלות באמצעות 195 Pt NMR. ההיסט הכימי של תהודה פלטינה קשור באופן ישיר לסוגים של אטומים מתואמים 21. ligands Chlorido משמרת 195 תהודות Pt downfield (לכיוון 0 עמודים לדקה) ואני (מ ') ino ligands להעביר את התהודות upfield (לכיוון -2500 עמודים לדקה). מתחמי הפלטינה dinuclear מסונתזים כאן להראות r בודד esonance סביב -2300 עמודים לדקה בשל בבוקר 3 x ino (מ ') ומדינת תיאום chlorido x 1 (איור 4) 22. טומאת transplatin unreacted הייתה להראות כמו תהודה סביב -2100 עמודים לדקה ואילו אם שני ligands הגיב עם מולקולה בודדת transplatin (4 בבוקר x (מ ') סביבת ino) אז טומאה זו תהיה upfield של -2400 עמודים לדקה 22.
1 ערכת המבנים הכימיים של תרופות הפלטינה picoplatin וBBR3464 והערכה סינתטית הכללית לסינתזה של ligands bispyridine וקומפלקסי הפלטינה dinuclear המיוחסים להם.; R = H או 3 CH; . N = 1-6 יונים מונה למתחמי הפלטינה הושמטו; על ידי שימוש בשיטה המתוארת כאן הם מלחי dichloride.
"/> Tp_upload/51740/51740fig1highres.jpg
איור 1 המבנה הכימי של N, N '-.. (אוקטן-1 ,8-diyl) bis (isonicotinamide) יגנד, ביאו, ושיטת מספור הפרוטון המשמשת להקצאה של התהודות בH NMR 1 שים לב לשקילות מארבעת הפרוטונים מתילן (הוא) במרכזה של המולקולה.
איור 2 1 H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz) ספקטרום של N, N '-. (אוקטן-1 ,8-diyl) bis (isonicotinamide), יאו שים לב למיקום של התהודה אמיד שלישיית בסביבות 8.7. עמודים לדקה, עד 1-2 עמודים לדקה לתהודה אמין diaminooctane לפני הצימוד.
= "Jove_content" עבור: לשמור-together.within-page = "תמיד"> 
איור 3. H NMR 1 (D 2 O, 400 MHz) ספקטרום של טרנס [{Pt (NH 3) 2 Cl 2} μ-יאו] 2 +. הערה צימוד הפלטינה על התהודה Ha ארומטיים ב8.82 עמודים לדקה.
איור 4. 195 Pt תמ"ג (D 2 O, 400 MHz) ספקטרום של טרנס [{Pt (NH 3) 2 Cl}.] 2 + 2 μ-יאו הערה התהודה רחבה אחת סביב -2300 עמודים לדקה שהוא עולה בקנה אחד עם סביבת Cl PTN 3; N = ine בבוקר (מ ').
טבלת 1 1 נתונים אפיון H NMR של ligands bispyridine בDMSO-d 6 ב400 MHz D = כפיל..; t = שלישייה; q = רביעייה; מ '= multiplet.
טבלה 2. 1 נתונים אפיון H NMR של קומפלקסי הפלטינה dinuclear בD 2 </> חזק O ב 400 MHz D = כפיל.; t = שלישייה; q = רביעייה; מ '= multiplet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
בעבודה זו קומפלקסי הפלטינה dinuclear היו מסונתזים כסוכנים אנטי סרטני פוטנציאליים. בעשותו כן ligands bispyridine הגישור היו מסונתז באמצעות תגובת צימוד אמיד באמצעות חומצת isonicotinic וdiaminoalkanes באורך משתנה. בעבר הסינתזה של bispyridine ligands ואנלוגים תילם עם 2 עד 8 קבוצות מתילן וקומפלקסי הפלטינה שלהם כבר דיווחה. במאמר זה, שיטת הסינתזה וטיהור כבר מתוקנת שהופך אותו מהר יותר וזול יותר והוכיחה את זה על ידי סינתזה ligands bispyridine עם 8, 10 ו12 קבוצות מתילן (הקצר ביותר עם שמונה קבוצות מהתיל, ביאו, נעשה כדי להשוות החדש שיטת טיהור לשיטה הישנה יותר). Dinuclear מתחמי פלטינה גם נעשו באמצעות ligands אלה.
הסינתזה של ligands bispyridine הושלמה בממס נטול מים ותחת אווירת חנקן אינרטי באמצעות triethylamine כבסיס חלש ואנהידריד propylphosphonic כסוכן הצימוד. כך או DMF או DMSO יכול לשמש כממס, אם כי חומצת isonicotinic מתמוססת טובה יותר בDMSO ממה שהוא עושה בDMF. גם עבור חימום ממס, עדין תחת זרם של מים חמים זורם יכול לשמש כדי לסייע לפירוק.
שיטה ישנה זו נדרשת פעמים מורחבות תגובה (כמה ימים) ותהליך טיהור מרובה צעד כולל מיצוי נוזל / נוזל נגד אתר diethyl ונטרול עם 3 NaHCO, אשר כעת מתבטל. תגובות סינתזת יגנד החברה הושלמו בעניין של שעות בטמפרטורת חדר לאחר כל המגיבים מתווספים יחד בצעד אחד. Ligands bispyridine לזרז מפתרון עם התוספת של מים (לligands עם 8 או פחות קבוצות מתיל) ולזרז מפתרון על היווצרות לligands הקבוצה מתילן 10 ו12. ניתן recrystallized כל ligands ממים רותחים ובמקרים מסוימים recrystall האיטי שלהםנפלתי על קרקע פורה יכולה להניב גבישים מתאימים לעקיף X-ray.
מתחמי הפלטינה dinuclear נעשים על ידי מגיב שתי שומות של transplatin לשומה אחד ligands bispyridine. השפעת טרנס labializing של ligands chlorido מבטיחה כי המוצר העיקרי הוא תיאום של תרופות הפלטינה דרך אתר יחיד בligands bispyridine (אטום החנקן של הטבעת). יש קומפלקסי הפלטינה dinuclear מסיסות טובה כמו מלחי dication בשני מים, DMF וDMSO.
טיהור מושגת באמצעות ממטרים השבר באמצעות אצטון. הטומאה מזוהות משקעים לפני שהמוצר והוא הוסר על ידי סינון דרך נייר סינון נקבובית צר. חשוב לציין כי הממטרים אצטון עובד טוב יותר עם כמות הולכת וגדלה של מוצר כדי להיות מטוהרת. בסכומים פחות מ 200 מ"ג, השיטה לא עובדת, כמו גם ויכולים להידרש משקעי אצטון חוזרים ונשנים. בסכומים סביב 200 מ"ג אויותר שמצאנו כי צעדי ממטרים אצטון בודדים בדרך כלל נדרשים בלבד.
בעוד מאמר זה מפרט את הסינתזה של ליגנד הספציפי וקומפלקסי פלטינה, ניתן ליישם את הטכניקות המשמשות כאן כדי לסנתז מגוון רחב הרבה יותר של ligands וקומפלקסי פלטינה multinuclear. לדוגמא, עם קבוצות מגן מתאימות ligands diaminoalkane אחר, כגון spermine וspermidine, ניתן להשתמש בם כדי להפוך את ligands bispyridine. ligands bispyridine ללא סימטרי יכול גם להתבצע באמצעות חומצת isonicotinic בצד אחד ו -2 מתיל isonicotinic חומצה בצד השני. יכול להיות שנוצר ligands הלא הסימטרי אלה באמצעות השימוש בFmoc / BOC-הגנה על קצה אחד של רשתות diaminoalkane. האמין לא מוגן של הרשת ניתן הגיב עם נגזר isonicotinic באמצעות תגובות הצימוד אמיד שתוארו. קבוצת ההגנה אז ביקע מהשרשרת diaminoalkane והנגזרת של חומצת isonicotinic שונה מחוברת באמצעותתגובת צימוד אמיד אחרת. מתחמי הפלטינה Trinuclear יכולים גם פוטנציאל להתבצע באמצעות כל אחת מligands אלה באמצעות התאמה של שיטה באמצעות ligands מבוסס pyrazolyl לעשות trinuclear, כמו BBR3464, קומפלקסי 22.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
יש המחברים אין לחשוף.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| D2O | Aldrich | 151882 | 99.9% D |
| DMSO-d6 | Aldrich | 156914 | 99.96% D |
| 1,8-diaminooctane | Aldrich | D22401 | 98% |
| 1,10-diaminodecane | Aldrich | D14204 | 98% |
| 1,12-diaminododecane | Aldrich | D1,640-1 | 98% |
| Isonicotinic acid | Aldrich | I17508 | 99% |
| 1-Propylphosphonic anhydride solution | Aldrich | 431303 | 50 wt% in ethyl acetate |
| Trans-diaminodichloridoplatinum(II) | Aldrich | P1525 | |
| Dimethylsulfoxide | Sigma-Aldrich | Z76855 | >99.9%, anhydrous |
| N,N’-dimethylformamide | Sigma-Aldrich | 227056 | 99.8%, anhydrous |
| Triethylamine | Sigma-Aldrich | T0886 | >99% |
| Nylon filter membranes | Whatman | 7402-004 | Pore size, 0.2 µm |
| Magnetic stirring hotplate | |||
| Magnetic stirring bar | |||
| Round bottom or three neck flask | |||
| Rubber septums of sufficient size for chosen round bottom or three neck flask | |||
| 5 ml hypodermic syringes | |||
| Hypodermic needles | |||
| Rubber party ballons | |||
| Rubber bands | |||
| A source of N2 gas | |||
| Rotary evaporator | |||
| Drying oven | |||
| NMR tubes | |||
| NMR spectrometer | |||
| 500 ml beakers | |||
| Glass or plastic pipettes |
References
- Wheate, N. J., Walker, S., Craig, G. E., Oun, R. The status of platinum anticancer drugs in the clinic and in clinical trials. Dalton Trans. 39, 8113-8127 (2010).
- Kiernan, M. C. The pain with platinum: oxaliplatin and neuropathy. Eur. J. Cancer. 43, 2631-2633 (2007).
- Markman, M., et al. Clinical features of hypersensitivity reactions to carboplatin. J Clin. Oncol. 17, 1141-1145 (1999).
- Ding, D., Allman, B. L., Salvi, R. Review: Ototoxic characteristics of platinum antitumor drugs. Anatomical Rec. 295, 1851-1867 (2012).
- Galluzzi, L., et al.
- Park, G. Y., Wilson, J. J., Song, Y., Lippard, S. J. Phenanthriplatin, a monofunctional DNA-binding platinum anticancer drug candidate with unusual potency and cellular activity profile. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 109, 11987-11992 (2012).
- Moghaddas, S., et al. next generation platinum antitumor agents: A paradigm shift in designing and defining molecular targets. Inorg. Chim. Acta. 393, 173-181 (2012).
- Farrell, N. P. Platinum formulations as anticancer drugs clinical and pre-clinical studies. Curr. Top. Med. Chem. 11, 2623-2631 (2011).
- Wheate, N. J., Collins, J. G. Multi-nuclear platinum complexes as anti-cancer drugs. Coord. Chem. Rev. 241, 133-145 (2003).
- Gourley, C., et al. A phase I study of the trinuclear platinum compound, BBR3464, in combination with protracted venous infusional 5-fluorouracil in patients with advanced cancer. Cancer Chemoth. Pharmacol. 53, 95-101 (2004).
- Calvert, A. H., et al. Phase II clinical study of BBR3464, a novel, bifunctional platinum analogue, in patients with advanced ovarian cancer. Eur. J. Cancer. 37, (2001).
- Jodrell, D. I., et al. Phase II studies with BBR3464, a novel tri-nuclear platinum complex, in patients with gastric or gastro-oesophageal adenocarcinoma. Eur. J. Cancer. 40, 1872-1877 (2004).
- William, W. N., Glisson, B. S. Novel strategies for the treatment of small-cell lung carcinoma. Nat. Rev. Clin. Oncol. 8, 611-619 (2011).
- Raynaud, F., et al. cis-Amminedichloro(2-methylpyridine) Platinum(II) (AMD473), a novel sterically hindered platinum complex: In vivo activity, toxicology, and pharmacokinetics in mice. Clin. Cancer Res. 3, 2063-2074 (1997).
- Holford, J., et al. biochemical and pharmacological activity of the novel sterically hindered platinum co-ordination complex cis-[amminedichloro(2-methylpyridine)] platinum(II) (AMD473). Anti-Cancer Drug Des. 13, 1-18 (1998).
- Munk, V. P., et al. Investigations into the interactions between DNA and conformationally constrained pyridylamine platinum(II) analogues of AMD473. Inorg. Chem. 42, 3582-3590 (2003).
- Wheate, N. J., Collins, J. G. Multi-nuclear platinum drugs: A new paradigm in chemotherapy. Curr. Med. Chem. - Anti-Cancer Agents. 5, 267-279 (2005).
- Beale, P., et al. A phase I clinical and pharmacological study of cis-diamminedichloro(2-methylpyridine) platinumm II (AMD473). British journal of cancer. 88, 1128-1134 (2003).
- Sessa, C., et al. Clinical and pharmacological phase I study with accelerated titration design of a daily times five schedule of BBR3464, a novel cationic triplatinum complex. Ann. Oncol. 11, 977-983 (2000).
- Brown, S. D., et al. Combining aspects of the platinum anticancer drugs picoplatin and BBR3464 to synthesize a new family of sterically hindered dinuclear complexes; their synthesis, binding kinetics and cytotoxicity. Dalton Trans. 41, 11330-11339 (2012).
- Still, B. M., Anil Kumar, P. G., Aldrich-Wright, J. R., Price, W. S. 195Pt NMR - Theory and application. Chem. Soc. Rev. 36, 665-686 (2007).
- Wheate, N. J., Cullinane, C., Webster, L. K., Collins, J. G. Synthesis, cytotoxicity, cell uptake and DNA interstrand cross-linking of 4,4'-dipyrazolylmethane-linked multinuclear platinum anti-cancer complexes. Anti-Cancer Drug Des. 16, 91-98 (2001).
