ل<em> في المختبر</em> الأنزيمية الفحص لقياس النسخ تثبيط من قبل الغاليوم (III) وH<sub> 3</sub> 5،10،15-تريس (pentafluorophenyl) corroles
Summary
الغاليوم (III) 5،10،15- (تريس) pentafluorophenylcorrole ونظائره فريبيس تظهر منخفضة السمية لخلايا مكرومولي. توضح هذه المخطوطة على رد فعل النسخ RNA، RNA التصوير مع إيثيديوم بروميد ملطخة هلام، وقياس RNA مع الأشعة فوق البنفسجية فيس التحليل الطيفي، من أجل تقييم النسخ تثبيط من قبل corroles وتبين طريقة واضحة لتقييم الخصائص المضادة للسرطان مرشح.
Abstract
غالبا ما ينطوي العلاج الكيميائي واسعة الطيف وكلاء السامة للخلايا مع العديد من الآثار الجانبية واستهداف محدود. Corroles هي فئة من macrocycles tetrapyrrolic التي تظهر خصائص التفاضلية تثبيط الخلايا والسامة للخلايا في خطوط خلية معينة، اعتمادا على هويات المعادن بالكلاب والمجموعات الوظيفية. سلوك فريد من corroles بين functionalized نحو خطوط معينة من الخلايا يقدم إمكانية العلاج الكيميائي المستهدفة.
يتم تقييم العديد من الأدوية المضادة للسرطان من خلال قدرتها على تثبيط RNA النسخ. هنا نقدم بروتوكول خطوة بخطوة لRNA النسخ في وجود مثبطات المعروفة والمحتملة. تقييم المنتجات RNA من رد فعل النسخ التي كتبها الكهربائي هلام والأشعة فوق البنفسجية فيس الطيفي يوفر معلومات عن خصائص مثبطة للمرشحين المحتملين المضادة للسرطان المخدرات و، مع تعديلات على الفحص، أكثر حول آلية عملها.
القليلومن المعروف عن الآلية الجزيئية عمل السمسة corrole. في هذه التجربة، ونحن نعتبر مجمعين corrole: الغاليوم (III) 5،10،15- (تريس) pentafluorophenylcorrole (GA (tpfc)) والتناظرية فريبيس 5،10،15- (تريس) pentafluorophenylcorrole (tpfc). واستخدمت مقايسة RNA النسخ لدراسة خصائص مثبطة للcorroles. وقد أعدت خمسة ردود الفعل النسخ: DNA تعامل مع أكتينوميسين D، تريبتوليد triptolide، جورجيا (tpfc)، tpfc في [معقدة]: [قاعدة DNA قالب] نسبة 0.01، على التوالي، وعنصر تحكم غير المعالجة.
وقد تم تحليل ردود الفعل النسخ بعد 4 ساعات باستخدام الاغاروز الكهربائي هلام والأشعة فوق البنفسجية فيس التحليل الطيفي. هناك تثبيط واضح من قبل جورجيا (tpfc)، أكتينوميسين D، وتريبتوليد triptolide.
يمكن تعديل هذا الاختبار RNA النسخ لتقديم المزيد من التفاصيل الآلية من خلال تغيير تركيزات مجمع المضادة للسرطان، DNA، أو إنزيم البلمرة، أو التي يحتضنها DNA أو البلمرة مع مجمعاتXES قبل RNA النسخ؛ ان هذه التعديلات يفرق بين آلية تثبيط تنطوي على DNA أو الانزيم. واضاف ان المجمع بعد RNA النسخ يمكن استخدامها لاختبار ما إذا كان المجمعات تتحلل أو يتحلل الحمض النووي الريبي. ويمكن أيضا أن هذا الاختبار أن تستخدم لدراسة المرشحين المضادة للسرطان إضافية.
Introduction
غالبا ما ينطوي العلاج الكيميائي واسعة الطيف وكلاء السامة للخلايا مع آثار جانبية غير مرغوب فيها واستهداف محدود، ولكن مع مزيد من الفهم بيولوجيا السرطان، هناك الطلب المتزايد على وكلاء المضادة للسرطان مع ارتفاع فعالية استهداف السرطان وآثار جانبية أقل. 1 الخلايا السرطانية البشرية أصبحت في كثير من الأحيان تعتمد على الجين الورمي واحد المنشط أو overexpressed من أجل البقاء 2 وهكذا.، يتم تقييم العديد من الأدوية المضادة للسرطان من خلال قدرتها على تثبيط RNA النسخ. العلاجات التي تمنع التعبير عن هذه الجينات تحويل فعالة في القضاء على الخلايا السرطانية وتؤدي إلى موت الخلايا. 3 خلايا تحولت هي أكثر حساسية للاضطرابات في RNA النسخ من والمقابلة الخلايا الطبيعية. 4 الأدوية المضادة للسرطان التي تمنع النسخ من المتوقع أن تمنع بشكل انتقائي التعبير عن الجينات المسرطنة والتي هي ضرورية للخلية السرطانية إلى البقاء على قيد الحياة. 5 وبالتالي، RNA النسخ طnhibition هو وسيلة مفيدة لتحديد المرشحين المحتملين المضادة للسرطان المخدرات ومعرفة المزيد عن آلية عملها. يوضح هذا البروتوكول الذي الجا (tpfc) يمنع النسخ RNA على نفس الترتيب كما أدوية العلاج الكيميائي أكتينوميسين D وتريبتوليد triptolide. مقارنات مماثلة يمكن إجراؤها باستخدام هذا البروتوكول مع غيرها من المرشحين المضادة للسرطان المخدرات. أكتينوميسين D هو النسخ مثبط RNA التي تستخدم عادة لعلاج السرطان الحمل الأرومة الغاذية، وسرطان الخصية، ورم WILM، وrhabdomyosacoma، وساركوما 6 في يوينغ. تم أكتينوميسين D المستخدمة في علاج السرطان منذ ما يقرب من خمسين عاما منذ أن تم الموافقة عليها من أول مرة من قبل ادارة الاغذية والعقاقير في 1964.Triptolide هو المانع النسخ الانتقائي التي تم التحقيق فيها في التجارب المختبرية ومختلف النماذج الحيوانية الحاملة للورم لمدة 30 عاما. 7
طبيعة macrocyclic محبة للجهتين من corroles يضفي مزايا هامة على أصناف الأدوية الأخرى مثل جزيئات صغيرة أو البيولوجيةالصورة. يسمح 8-14 الحرف macrocyclic لنفاذية الخلوية أكبر من المتوقع لمثل هذه الجزيئات الكبيرة، وكانت كبيرة بما يكفي للتفاعل مع أسطح الجزيئات، مثل تلك البروتينات. ومن المعروف 8 Corroles على شكل مجمعات noncovalent ضيقة مع الجزيئات الحيوية والمخدرات. 10 وبالإضافة إلى سمية الخلايا الكامنة في إطار corrole، لقد أثبتنا أن أعمال corrole المسلفنة كما جزيء الناقل عن وكلاء العلاج الكيميائي، وتحديدا أنثراسيكلين دوكسوروبيسين المخدرات الإقحام DNA. عندما تعطى معه في corrole المسلفنة مع دوكسوروبيسين، لوحظ وجود زيادة 3 أضعاف في IC 50 من دوكسوروبيسين لDU-145 الخلايا. 9 الإطار corrole مستقر ولديه الكامنة الامتصاصية ومضان الخصائص التي، عندما بين functionalized، الخضوع لتحولات الامتصاصية فريدة والتي يمكن استخدامها لتوصيف 10 Functionalization من السقالة لا affec بطبيعتهار خصائص photophysical من corrole، 9-15 ولكن، كما رأينا مع corrole المسلفنة، وتعديل انتقائي إطار corrole يمكن أن تتغير بشكل كبير خصائصه البيولوجية (16). ونحن تقييمها من قبل ستة metallocorroles ضد سبعة خطوط الخلايا السرطانية البشرية. وتشير النتائج إلى أن سمية تجاه الخلايا السرطانية البشرية تعتمد على أيون الفلز محددة، فضلا عن استبدال مجموعة وظيفية. على سبيل المثال، corroles الغاليوم المسلفنة شهدت امتصاص الخلوية عالية وتوغلت بشكل انتقائي في نواة الدماغ خلايا سرطان البروستاتا النقيلي (DU-145)؛ الخلايا نفسها corrole، على الرغم من أنها لا تخترق نواة من خطوط الخلايا الأخرى، يسلك أكبر سمية الخلايا لسرطان الثدي (MDA-MB-231)، سرطان الجلد (SK-MEL-28)، والمبيض (OVCAR-3) السرطان من ل سرطان البروستاتا. 9
المقايسات خلية القاعدة الأولية تشير إلى أن هذه المركبات تظهر الوعد كما المضادة للسرطان العوامل العلاجية، والتي تستحق فورثالتحقيق إيه في آلية العمل. ويلاحظ النسخ تثبيط مع بعض المجمعات الفلزية العضوية 17-27 وسعينا لدراسة هذه العملية كآلية محتملة لسلوك السامة للخلايا من عائلة corrole. يوفر هذا الاختبار النسخ طريقة واضحة وغير مكلفة، وسطحي لتقييم تثبيط النسخ، الأمر الذي سيؤدي إلى مزيد من المعلومات التفصيلية حول آثار هذه الجزيئات في الخلايا الحية.
هنا، وتثبيط النسخ من الغاليوم (III) 5،10،15- يتم اختبار (تريس) pentafluorophenylcorrole (GA (tpfc)) والتناظرية فريبيس لها 5،10،15- (تريس) pentafluorophenylcorrole (tpfc) (الشكل 1). وخلافا لبعض المجمعات المعدن الانتقالية، الغاليوم (III) غير نشط الأكسدة ويست متورطة مباشرة في عملية الأكسدة من المسارات الأيضية القائم على الأكسدة وبالتالي 28 بغض النظر، الغاليوم (III) لا يحمل خصائص السامة للخلايا، وقد تم التحقيق لأغراض علاجية. الغاليوم هو ثاني أكثر المعادن واعد للعلاجات المضادة للسرطان بعد البلاتين وشهدت العديد من الدراسات والتحقيقات؛ وقد تم تقييم النترات والأملاح كلوريد الغاليوم في التجارب السريرية ضد الكبدي، سرطان الغدد الليمفاوية، سرطان المثانة، وأمراض أخرى. 29-34 الغاليوم (III) هو بالتالي مثالية للالمضادة للسرطان دراسات corrole. وتشير البيانات الأولية جورجيا (tpfc) وtpfc لديهم انخفاض GI 50، وتركيز الدواء الضروري لمنع 50٪ من تكاثر الخلايا القصوى، مع مختلف خطوط الخلايا السرطانية (انظر الشكل 2)؛ هذا يؤكد صحة مزيد من التجارب على هذين المركبين لتحديد خصائصها مثبطة. قارنا هذه المركبات مع الأدوية المضادة للسرطان شيوعا أكتينوميسين D وتريبتوليد triptolide. أكتينوميسين D intercalates DNA، RNA يمنع استطالة، ويدفع الخلايا في خلية خط معين في تركيزات بيكو مولي أظهرت 6،35-37 تريبتوليد triptolide لمنع نمو الورم؛ فإنه يلزم لXPB البشرية / ERCC3، وس فرعيةعامل و النسخ TFIIH، مما يؤدي إلى تثبيط RNA البلمرة II النشاط. 6-7،38-40
بينما هو معلوم أن corroles يحمل خصائص السامة للخلايا، هناك القليل من المعلومات عن مختلف آليات الناشئة عن functionalization. أن تثبيط Corrole من الحمض النووي الريبي النسخ تقديم مزيد من التبصر في تفاعلها مع الجزيئات الكبيرة الحيوية. المجمعات الأخرى المعروفة لربط الحمض النووي، مثل dirhodium (II، II) المجمعات والكروم (III) المجمعات، الروثينيوم (II) المجمعات polypyridyl، الروديوم (III) المجمعات، وغيرها مختلف، تعرضوا لفحوصات الحمض النووي الريبي النسخ، 18- 27 مما أدى إلى فهم أكبر لتفاعلها مع الجزيئات الكبيرة الحيوية. هذه التجربة السهلة والمتاحة على نطاق واسع هي أيضا اختبار أولي جيد لتقييم خصائص سمية الخلايا من جزيء معين، وتحديد ما إذا كانت مزايا الاختبار مزيد البيولوجي. الفحص RNA النسخ يسمح أيضا للعديد من التعديلات، مثل varyinز كمية من مركب أو الإنزيمات المستخدمة؛ متفاوتة فترة الحضانة وفترة رد الفعل ونقاط الوقت عينة. ومتفاوتة DNA طول قالب وتسلسل، وبين المتغيرات الأخرى ذات الاهتمام، وبالتالي يحتمل توفير كمية كبيرة من البيانات. هذا الاختبار النسخ هو أيضا متاحة بسهولة إلى مجموعات بأسعار معقولة مع جميع المكونات رد فعل الضرورية المقدمة، على الرغم من أن مكونات يمكن شراء وأعد بشكل فردي. في هذه التجارب، ونحن نستخدم مجموعة المتاحة تجاريا المعروف أن ارتفاع العائد. 41
لتقييم النسخ تثبيط، ونحن نستخدم طريقتين: الاغاروز الكهربائي هلام والأشعة فوق البنفسجية فيس التحليل الطيفي. الاغاروز الكهربائي للهلام هو وسيلة بسيطة وفعالة لفصل وتحديد، وتنقية 0.5- إلى DNA و RNA شظايا 25 كيلو بايت. يمكن استخدام 42 UV-فيس التحليل الطيفي لتحديد التركيز والنقاء من الحمض النووي الريبي. 43
Protocol
Representative Results
Discussion
يوضح هذا الاختبار أن إضافة جورجيا (tpfc) يمنع النسخ RNA نسبيا إلى الحمض النووي ملزم المجمعات المضادة للسرطان المعروف أكتينوميسين D وتريبتوليد triptolide. سلوك السامة للخلايا من جورجيا (tpfc) (GI 50 = 58،1 حتي 154،7 ميكرومتر) قد ونظرا لخواصها مثبطة. منذ لم يلاحظ أي تثبيط النسخ في tpf…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
نحن نتقدم بخالص الشكر الدكتور سيندي N. تشيو للمساعدة في هلام الكهربائي، واندي تشو ومايكل Grodick للتبرع السخي من الحمض النووي وانزيم قيود. ونحن نعترف بامتنان أستاذ J. هيث وأستاذ D. بروبير للوصول السخي على المعدات والمواد. نشكر الدكتور كارن Sorasaenee للحصول على اقتراحات مفيدة. نشكر ماري H. تانغ لخلق التوضيح المستخدمة في العرض التخطيطي في شريط الفيديو. تم توفير التمويل من قبل جونسون آند جونسون وUSC Y86786.
Materials
| Name of Material/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| Actinomycin D | Sigma-Aldrich | A1410 | Store at 2-8 °C , protect from light |
| Triptolide | Sigma-Aldrich | T3652 | Store at 2-8 °C , protect from light |
| nuclease-free H2O | Life Technologies | AM9938 | |
| MEGAscript T7 Transcription Kit | Life Technologies | AM1334 | Store at –20 °C |
| Ethidium Bromide | Sigma-Aldrich | E7637 | CAUTION: For proper handling procedures of ethidium bromide, please see: http://www.sciencelab.com/msds.php?msdsId=9927667 |
| Tris Acetate | Sigma-Aldrich | T6025 | |
| Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) | Sigma-Aldrich | EDS | |
| UltraPure Agarose | Life Technologies | 16500-100 | |
| mini Quick Spin RNA Columns | Roche Life Science | 11814427001 | Store at 2-8 °C , do not freeze |
| 1 kb DNA Ladder | New England Biolabs | N3232S | Store at –20 °C |
Referências
- Weinstein, I. B. Addiction to oncogenes—The Achilles heel of cancer. Science. 297, 63-64 (2002).
- Derheimer, F. A., Chang, C. W., Ljungman, M. Transcription inhibition: A potential strategy for cancer therapeutics. Eur. J. Cancer. 41 (16), 2569-2576 (2005).
- Koumenis, C., Giaccia, A. Transformed cells require continuous activity of RNA polymerase II to resist oncogene-induced apoptosis. Mol. Cell. Biol. 17 (12), 7306-7316 (1997).
- Stellrecht, C. M., Chen, L. S. Transcription Inhibition as a Therapeutic Target for Cancer. Cancers. 3 (4), 4170-4190 (2011).
- Bensaude, O. Inhibiting eukaryotic transcription: Which compound to choose? How to evaluate its activity. Transcription. 2 (3), 103-108 (2011).
- Liu, Q. Triptolide and its expanding multiple pharmacological functions. International Immunopharmacology. 11 (3), 377-383 (2011).
- Mahammed, A., Gray, H. B., Weaver, J. J., Sorasaenee, K., Gross, Z. Amphiphilic corroles bind tightly to human serum albumin. Bioconjugate Chemistry. 15 (4), 738-746 (2004).
- Lim, P. Differential cytostatic and cytotoxic action of metallocorroles against human cancer cells: Potential platforms for anticancer drug development. Chemical Research in Toxicology. 25 (2), 400-409 (2012).
- Bendix, J., Dmochowski, I. J., Gray, H. B., Mahammed, A., Simkhovich, L., Gross, Z. Structural, electrochemical, and photophysical properties of gallium(III) 5,10,15-tris(pentafluorophenyl)corrole. Angewandte Chemie-International Edition. 39 (22), 4048-4051 (2000).
- Hwang, J. Y., Gross, Z., Gray, H. B., Medina-Kauwe, L. K., Farkas, D. L. Ratiometric spectral imaging for fast tumor detection and chemotherapy monitoring in vivo. Journal of Biomedical Optics. 16 (6), 1-6 (2011).
- Agadjanian, H. Tumor detection and elimination by a targeted gallium corrole. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (15), 6105-6110 (2009).
- Hwang, J. Y. Photoexcitation of tumor-targeted corroles induces singlet oxygen-mediated augmentation of cytotoxicity. Journal of Controlled Release. 163 (3), 368-373 (2012).
- Hwang, J. Y., et al. Investigating photoexcitation-induced mitochondrial damage by chemotherapeutic corroles using multimode optical imaging. Journal of Biomedical Optics. 17 (1), 11 (2012).
- Hwang, J. Y. A Mechanistic Study of Tumor-Targeted Corrole Toxicity. Molecular Pharmaceutics. 8 (6), 2233-2243 (2011).
- Saltsman, I., Mahammed, A., Goldberg, I., Tkachenko, E., Botoshansky, M., Gross, Z. Selective substitution of corroles: Nitration, hydroformylation, and chlorosulfonation. Journal of the American Chemical Society. 124 (25), 7411-7420 (2002).
- Gershman, Z., Goldberg, I., Gross, Z. DNA Binding and Catalytic Properties of Positively Charged Corroles. Angewandte Chemie. 46 (23), 4320-4324 (2007).
- Fu, P. K., Bradley, P. M., Turro, C. Stabilization of duplex DNA structure and suppression of transcription in vitro by bis(quinone diimine) complexes of rhodium(III) and ruthenium(II). Inorganic Chemistry. 42 (3), 878-884 (2003).
- Sorasaenee, K., Fu, P. K. -. L., Angeles-Boza, A. M., Dunbar, K. R., Turro, C. Inhibition of Transcription in Vitro by Anticancer Active Dirhodium(II) Complexes. Inorg. Chem. 42 (4), 1267-1271 (2003).
- Aguirre, J. D., Lutterman, D. A., Angeles-Boza, A. M., Dunbar, K. R., Turro, C. Effect of axial coordination on the electronic structure and biological activity of dirhodium(II,II) complexes. Inorganic Chemistry. 46 (18), 7494-7502 (2007).
- Raja, N. S., Nair, B. U. Chromium(III) complexes inhibit transcription factors binding to DNA and associated gene expression. Toxicology. 251 (1-3), 61-65 (2008).
- Gao, F., Chen, X., Wang, J. Q., Chen, Y., Chao, H., Ji, L. N. In Vitro Transcription Inhibition by Ruthenium(II) Polypyridyl Complexes with Electropositive Ancillary Ligands. Inorganic Chemistry. 48 (13), 5599-5601 (2009).
- Chen, X., Gao, F., Zhou, Z. X., Yang, W. Y., Guo, L. T., Ji, L. N. Effect of ancillary ligands on the topoisomerases II and transcription inhibition activity of polypyridyl ruthenium(II) complexes. Journal of Inorganic Biochemistry. 104 (5), 576-582 (2010).
- Chen, X., Gao, F., Yang, W. Y., Sun, J., Zhou, Z. X., Ji, L. N. Effects of intercalative ligands on the DNA binding, DNA topoisomerase II and DNA transcription inhibition of polypyridyl ruthenium(II) complexes. Inorganica Chimica Acta. 378 (1), 140-147 (2011).
- Chen, X., Gao, F., Yang, W. Y., Zhou, Z. X., Lin, J. Q., Ji, L. N. Structure-activity relationship of polypyridyl ruthenium(II) complexes as DNA intercalators, DNA photocleavage reagents, and DNA topoisomerase and RNA polymerase inhibitors. Chemistry & Biodiveristy. 10 (3), 367-384 (2013).
- Chifotides, H. T., Fu, P. K., Dunbar, K. R., Turro, C. Effect of equatorial ligands of dirhodium(II,II) complexes on the efficiency and mechanism of transcription inhibition in vitro. Inorganic Chemistry. 43 (3), 1175-1183 (2004).
- Pauly, M., Kayser, I., Schmitz, M., Dicato, M., Del Guerzo, A., Kolber, I., Moucheron, C., Kirsch-De Mesmaeker, A. In vitro inhibition of gene transcription by novel photo-activated polyazaaromatic ruthenium(II) complexes. Chemical Communications. 10, 1086-1087 (2002).
- Richardson, D. R. Iron and gallium increase iron uptake from transferring by human melanoma cells: Further examination of the ferric ammonium citrate-activated iron uptake process. Biochimica et Biophysica Acta. 1536 (1), 43-54 (2001).
- Collery, P., Keppler, B., Madoulet, C., Desoize, B. Gallium in cancer treatment. Critical Reviews in Oncology / Hematology. 42 (3), 283-296 (2002).
- Hedley, D. W., Tripp, E. H., Slowiaczek, P., Mann, G. J. Effect of gallium on DNA synthesis by human T-cell lymphoblasts. Pesquisa do Câncer. 48 (11), 3014-3018 (1988).
- Chitambar, C. R., Narasimhan, J., Guy, J., Sem, D. S., O’Brien, W. J. Inhibition of ribonucleotide reductase by gallium in murine leukemic L1210 cells. Pesquisa do Câncer. 51, 6199-6201 (1991).
- Seidman, A. D. Continuous infusion gallium nitrate for patients with advanced refractory urothelial tract tumors. Cancer. 68, 2561-2565 (1991).
- Chitambar, C. R. Medical applications and toxicities of gallium compounds. International Journal of Environmental Research and Public Health. 7 (5), 2337-2361 (2010).
- Chitambar, C. R. Gallium-containing anticancer compounds. Future Medicinal Chemistry. 4 (10), 1257-1272 (2012).
- Trask, D. K., Muller, M. T. Stabilization of type I topoisomerase-DNA covalent complexes by actinomycin D. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 85 (5), 1417-1421 (1988).
- Chang, T. C., Tsai, L. C., Hung, M. W., Chu, L. L., Chu, J. T., Chen, Y. C. Effects of transcription and translation inhibitors on a human gastric carcinoma cell line. Potential role of Bcl-X(S) in apoptosis triggered by these inhibitors. Biochemical Pharmacology. 53 (7), 969-977 (1997).
- Mischo, H. E., Hemmerich, P., Grosse, F., Zhang, S. Actinomycin D induces histone gamma-H2AX foci and complex formation of gamma-H2AX with Ku70 and nuclear DNA helicase II. The Journal of Biological Chemistry. 280 (10), 9586-9594 (2005).
- Titov, D. V. XPB, a subunit of TFIIH, is a target of the natural product triptolide. Nature Chemical Biology. 7 (3), 182-188 (2011).
- Leuenroth, S. J., Crews, C. M. Triptolide-induced transcriptional arrest is associated with changes in nuclear substructure. Cancer Researcg. 68 (13), 5257-5266 (2008).
- Vispé, S. Triptolide is an inhibitor of RNA polymerase I and II-dependent transcription leading predominantly to down-regulation of short-lived mRNA. Molecular Cancer Therapeutics. 8 (10), 2780-2790 (2009).
- . MEGAscript T7 Transcription Kit User Guide. Current Protocols in Molecular Biology. , (2014).
- Fleige, S., Pfaffl, M. W. RNA integrity and the effect on the real-time qRT-PCR performance. Molecular Aspects of Medicine. 27 (2-3), 126-139 (2006).
- . . Quick Spin Columns Protocol. , (2013).
- . . RNA quality control. , (2007).
- Sabris, R. W. . Handbook of biological dyes and stains: synthesis and industrial application. , (2010).
