Medição de temperatura de corpo do mouse usando o termômetro infravermelho durante passiva anafilaxia sistêmica e avaliação de alergia alimentar
Summary
Aqui nós apresentamos um novo método para medir com precisão as diferenças de temperatura de corpo em anafilaxia sistêmica passiva (PSA) e modelos de rato de alergia alimentar usando um termômetro infravermelho. Este procedimento tem sido duplicado com precisão em resultados anteriores de PSA.
Abstract
Medição de temperatura de corpo do mouse é de suma importância para a investigação de alergias e sintomas de choque anafiláticas. Sondas retais para leituras de temperatura é comum, e eles têm provados ser precisos e inestimável a este respeito. No entanto, este método de medição da temperatura requer os ratos a ser anestesiada para inserir a sonda sem prejuízo para o animal. Isso limita a capacidade de observar outros fenótipos do mouse simultaneamente. A fim de investigar outros fenótipos durante a medição de temperaturas, sondas retais não são ideais, e um outro método é desejado. Aqui, apresentamos um método não invasivo de medição de temperatura que incorra a exigência de anestesia do mouse, mantendo a confiabilidade igual a sondas retais em medir a temperatura do corpo. Nós usamos um termômetro infravermelho que detecta as temperaturas de superfície de corpo em intervalos entre 2 e 150 mm. Este método de medição de temperatura do corpo é bem sucedido em confiantemente, replicando as tendências de mudança de temperatura durante experimentos de anafilaxia sistema passivo em camundongos. Nós mostramos que as temperaturas de superfície do corpo são aproximadamente 2,0 ° C inferior a medições da sonda retal, mas o grau de queda de temperatura segue a mesma tendência. Além disso, podemos usar a mesma técnica para observar ratos em um modelo de alergia alimentar para avaliar os níveis de temperatura e atividade simultaneamente.
Introduction
Medição da temperatura corporal tem sido uma parte essencial de monitorar os efeitos dos sintomas de choque anafiláticas em animal modelos1,2. Diferenças de temperatura tem sido tradicionalmente medidas pelo termômetros retal em ratos3,4. Com estas medidas, investigadores confiantemente tem retratado as diferenças de temperatura entre variáveis; no entanto, esse método é um procedimento demorado e faz com que a aflição de ratos, que podem aumentar a temperatura do corpo. Sondagem retal também pode causar na mucosa rasgando e infecção3. Além disso, os ratos devem ser anestesiados para humanamente inserir a sonda rectal para medir a temperatura3. Este é um processo lento, e proíbe a medição das temperaturas sucessivas dentro de um curto período de tempo. Além disso, fenótipos de atividade de ratos não podem ser observados durante esse tempo, até que o anestésico é completamente desgastado, que é outro processo demorado. Mais recentemente, outros métodos confiáveis para medir a temperatura do corpo tem usado implantado subcutaneamente transmissor infravermelho passivo tags ou transmissores de rádio que incluem uma temperatura sensor3,5,6. Embora eles são aceitos como a prática ideal por alguns pesquisadores, esses métodos não são amplamente utilizados por causa de altos custos iniciais e angústia aos ratos, devido a implantação cirúrgica de um sensor de temperatura sob a pele ou outra parte do corpo.
Para demonstrar que uma diferença de temperatura é um reflexo preciso de sintomas em um modelo de doença1,2, ratos devem ser acordado durante a medição de temperatura e ser capaz de voltar à sua atividade normal fenotípica imediatamente antes e após a medição. Nesse sentido, buscamos um método pelo qual isto poderia ser alcançado.
Nosso objetivo era exatamente e barata medir a temperatura do corpo do mouse, sem a necessidade de anestesia e sem restrições à atividade, para permitir a observação dos fenótipos comportamentais durante e após o tempo de medição de temperatura. Para atingir este objetivo, era evidente que uma técnica menos invasiva do que a temperatura retal padrão sondas foi necessária. Termometros infravermelho têm sido utilizados há décadas na medicina clínica, especialmente em pediatria, para obter leituras precisas da temperatura. Tem sido um método alternativo que permitiu que os clínicos com rapidez e precisão obter medições de temperatura em bebês e crianças exigentes que são ativamente móveis. Estamos implementado essa mesma técnica em ratos e desenvolveu um método bem sucedido para obter temperaturas sem anestesia. Importante, mostramos que esse método é capaz de replicar os resultados de anafilaxia sistêmica passiva bem estabelecida em relação a mudanças de temperatura, enquanto também ser capaz de observar a atividade do mouse durante a medição. Além disso, nós usamos o mesmo método para avaliar a temperatura do corpo dos ratos alimento-alérgica, enquanto simultaneamente investiga outros sintomas, para demonstrar que a temperatura do corpo é de fato um reflexo preciso do nível de atividade e fenótipo geral da rato.
Protocol
Representative Results
Discussion
O protocolo descrito foi criado com o objetivo de medir a temperatura do corpo sem o uso de anestesia. Apesar de sua relativa facilidade com que temperatura leituras podem ser obtidas, existem várias advertências que acomodar esta técnica, além dos efeitos mais óbvios como lidar com stress e temperaturas ambientes diferentes.
Primeiro, a fim de manter as leituras de temperatura consistente durante todo o experimento, o local onde a temperatura está sendo medida deve ser predeterminado us…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Pesquisa no Kawakami lab foi apoiada pelo NIH concede: R01 AR064418-01A1, R01 HL124283-01, R21 AI 115534-01 e R41AI124734-01.
Materials
| Non-contact infrared thermometer | SinoPie | DT-8861 | |
| Anti-dinitrophenyl (DNP) IgE | Sigma Aldrich | D8406-.2MG | |
| PrecisionGlide 30G needle | BD | 305128 | |
| PrecisionGlide 26G needle | BD | 305111 | |
| 1 mL syringe | BD | 309659 | |
| Dinitrophenyl – human serum albumin | Biosearch Technologies | D-5059-10 | |
| Ovalbumin from chicken egg white | Sigma Aldrich | A5503-50G | |
| Imject Alum | ThermoFisher Scientific | 77161 | |
| Animal Feeding Needles, disposable | Fisher Scientific | 01-208-87 |
Referências
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