Waiting
Processando Login

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Immunology and Infection
Click here for the English version

Immunology and Infection

الحقن داخل القلبية وكمية من المعلمات العدوى في نموذج الماوس من التهاب Endophthalmitis البكتيرية

Published: February 6, 2021 doi: 10.3791/61749
Automatic Translation
*1,2, *1, 2,3, 4, 2,3, 1,2,3
1Department of Microbiology and Immunology, University of Oklahoma Health Sciences Center, 2Department of Ophthalmology, Dean McGee Eye Institute, 3Dean McGee Eye Institute, 4Department of Cell Biology and Department of Family and Preventive Medicine, University of Oklahoma Health Sciences Center
* These authors contributed equally

Summary

نحن نصف هنا طريقة الحقن داخل في الواقع والكمية البكتيرية اللاحقة في نموذج الماوس من التهاب بطانة الرحم البكتيرية. ويمكن تمديد هذا البروتوكول لقياس الاستجابات المناعية المضيفة والبكتيرية والمضيفة الجينات التعبير.

Abstract

الالتهابات البكتيرية داخل العين تشكل خطرا على الرؤية. يستخدم الباحثون نماذج حيوانية للتحقيق في العوامل المضيفة والبكتيرية ومسارات الاستجابة المناعية المرتبطة بالعدوى لتحديد الأهداف العلاجية القابلة للتطبيق واختبار الأدوية لمنع العمى. وتستخدم تقنية الحقن داخل الجسم لحقن الكائنات الحية، والمخدرات، أو غيرها من المواد مباشرة في تجويف الزجاجة في الجزء الخلفي من العين. هنا، أظهرنا تقنية الحقن هذه لبدء العدوى في عين الماوس وتقنية تحديد البكتيريا داخل العين. نمت عصيات cereus في الدماغ ضخ القلب وسائل الإعلام السائلة لمدة 18 ساعة و resuspended إلى تركيز 100 وحدات تشكيل مستعمرة (CFU)/0.5 μL. تم تخدير فأر C57BL/6J باستخدام مزيج من الكيتامين والزيلازين. باستخدام الحقن المجهري البيوليتر والإبر الشعرية الزجاجية، تم حقن 0.5 ميكرولتر من تعليق عصيات في الزجاج الزجاجي منتصف عين الماوس. أما حقن العين التحكم في الاضلاع مع وسائل الاعلام العقيمة (السيطرة الجراحية) أو لم يتم حقن (السيطرة المطلقة). وفي 10 ساعات بعد الإصابة، تم قتل الفئران، وتم حصاد العيون باستخدام ملاقط جراحية معقمة ووضعت في أنبوب يحتوي على PBS معقم 400 ميكرولتر والخرز الزجاجي المعقم 1 ملم. بالنسبة لـ ELISAs أو مقايسات النخاع ، تمت إضافة مثبط البروتينات إلى الأنابيب. لاستخراج RNA، تمت إضافة المخزن المؤقت تحلل المناسبة. تم التجانس العينين في التجانس الأنسجة لمدة 1-2 دقيقة. تم تخفيف المتجانس بشكل متسلسل 10 أضعاف في برنامج تلفزيوني وتتبع المخفف على لوحات أجار. تم تخزين ما تبقى من المتجانس في -80 درجة مئوية لم مقايسات إضافية. تم احتضان اللوحات لمدة 24 ساعة وتم تحديد كمية CFU لكل عين. هذه التقنيات تؤدي إلى التهابات قابلة للتكرار في عيون الماوس وتسهيل كمية البكتيريا القابلة للحياة ، والاستجابة المناعية المضيفة ، و omics للتعبير الجيني المضيف والبكتيري.

Introduction

التهاب بطانة الدماغ البكتيري هو عدوى مدمرة تسبب الالتهاب ، وإذا لم يتم علاجه بشكل صحيح ، يمكن أن يؤدي إلى فقدان البصر أو العمى. نتائج Endophthalmitis من دخول البكتيريا إلى المناطق الداخلية للعين1,2,3,4,5. مرة واحدة في العين، والبكتيريا تكرار، وإنتاج السموم وغيرها من العوامل الضارة، ويمكن أن يسبب ضررا لا رجعة فيه لخلايا الشبكية الحساسة والأنسجة. يمكن أن يكون الضرر العيني أيضا بسبب التهاب، وذلك بسبب تنشيط الممرات الالتهابية مما يؤدي إلى تدفق الخلايا الالتهابية في المناطق الداخلية من العين1,5,6. يمكن أن يحدث التهاب الأنف بعد جراحة داخل العين (بعد العملية), إصابة اختراق للعين (ما بعد الصدمة), أو من انتشار النقيلي للبكتيريا في العين من موقع تشريحي مختلف (الذاتية)7,8,9,10. تشمل علاجات التهاب إندورفم البكتيرية المضادات الحيوية أو الأدوية المضادة للالتهابات أو التدخل الجراحي3،4،11. حتى مع هذه العلاجات، قد تضيع الرؤية أو العين نفسها. التشخيص البصري بعد التهاب بطانة الأوعية البكتيرية عموما يختلف تبعا لفعالية العلاج، وحدة البصرية في العرض، وفوعة الكائن الذي يصيب.

عصيات cereus (B. cereus) هي واحدة من مسببات الأمراض البكتيرية الرئيسية التي تسبب التهاب endophthalmitis ما بعد الصدمة7,12. غالبية حالات التهاب إندورفان ب. cereus لها مسار سريع، والتي يمكن أن تؤدي إلى العمى في غضون أيام قليلة. السمات المميزة لB. التهاب بطانة الأوعية الدموية تشمل تطور سريع التهاب داخل العين, ألم العين, فقدان سريع للبصر، والحمى. B. cereus ينمو بسرعة في العين مقارنة مع البكتيريا الأخرى التي تسبب عادة التهابات العين2,4,12 وتمتلك العديد من عوامل الفوعة. ولذلك، فإن نافذة التدخل العلاجي الناجح قصيرة نسبيا1، 2، 3، 4، 5، 6، 7، 11، 12، 13، 14، 15، 16، 17، 18، 19، 20، 21، 22، 23، 24، 25. عادة ما تنجح علاجات هذه العدوى في علاج التهاب إندورفوم الناجم عن مسببات الأمراض الأخرى الأقل ضراوة ، ولكن التهاب إندورفان ب. cereus يؤدي عادة إلى أكثر من 70٪ من المرضى الذين يعانون من فقدان كبير للرؤية. حوالي 50٪ من هؤلاء المرضى الخضوع لـ evisceceration أو enucleation العين المصابة7,16,22,23. الطبيعة المدمرة والسريعة لـ B. cereus endophthalmitis تستدعي العلاج الفوري والسليم. وقد حدد التقدم المحرز مؤخرا في تمييز الآليات الأساسية لتطوير الأمراض الأهداف المحتملة للتدخل19،26،27. نماذج الماوس التجريبية من B. cereus endophthalmitis لا تزال مفيدة في تمييز آليات العدوى واختبار العلاجات المحتملة التي قد تمنع فقدان البصر.

كانت العدوى التجريبية داخل العين للفئران مع B. cereus نموذجًا أساسيًا لفهم العوامل البكتيرية والمضيفة ، بالإضافة إلى تفاعلاتها ، أثناء التهاب إندورف28. يحاكي هذا النموذج حدث ما بعد الصدمة أو ما بعد الجراحة، حيث يتم إدخال البكتيريا في العين أثناء الإصابة. هذا النموذج هو استنساخ للغاية وكان مفيدا لاختبار العلاجات التجريبية وتوفير البيانات لتحسين مستوى الرعاية1,6,19,29,30. مثل العديد من نماذج العدوى الأخرى، يسمح هذا النموذج للسيطرة المستقلة على العديد من المعلمات من العدوى، وتمكن من فحص كفاءة واستنساخ نتائج العدوى. وقد درست الدراسات في نموذج مماثل في الأرانب على مدى العقود القليلة الماضية آثار ب. عوامل الفوعة cereus في العين2,4,13,14,31. عن طريق حقن ب. cereus سلالات متحولة تفتقر إلى عوامل الفوعة الفردية أو متعددة، يمكن قياس مساهمة هذه العوامل الفوعة في شدة المرض من خلال نتائج مثل تركيز البكتيريا في ساعات مختلفة من ما بعد الإصابة أو فقدان وظيفة بصرية13،14،27،31،32. وبالإضافة إلى ذلك، تم فحص عوامل المضيف في هذا النموذج عن طريق إصابة سلالات الماوس بالضربة القاضية تفتقر إلى عوامل المضيف التهابية محددة26،29،33،34،35. النموذج هو أيضا مفيدة لاختبار العلاجات المحتملة لهذا المرض عن طريق حقن مركبات جديدة في العين بعد العدوى30,36. في هذه المخطوطة، نحن وصف بروتوكول مفصل يتضمن إصابة عين الماوس بـ B. cereus، حصاد العين بعد العدوى، وتحديد كمية الحمل البكتيري داخل العين، والحفاظ على العينات لمقايس معلمات إضافية لشدة المرض.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

تم تنفيذ جميع الإجراءات بناء على التوصيات الواردة في دليل رعاية واستخدام المختبرات وجمعية البحوث في الرؤية وبيان طب العيون لاستخدام الحيوانات في بحوث العيون والرؤية. تمت الموافقة على البروتوكولات من قبل لجنة الرعاية والاستخدام الحيواني المؤسسية لمركز العلوم الصحية بجامعة أوكلاهوما (أرقام البروتوكول 15-103 و 18-043 و 18-087).

1. الإبر الزجاج العقيمة

  1. بدوره على إبرة سحب ماصة.
  2. اضبط مقبض المقبض حتى تظهر الشاشة 12.6.
  3. فتح الباب وتغذية يدويا أنبوب الشعيرات الدموية 5 ميكرولتر من خلال المشبك العلوي ودهم سخان حتى نصف أنابيب يمتد تحت خيوط (الشكل 1A).
  4. تأكد من أن أنبوب الشعيرات الدموية في الأخدود "V" في المشبك العلوي. تشديد المشبك العلوي.
  5. مع فتح المشبك السفلي، قم بضبط الشريحة الرأسية يدويًا حتى يصل المشبك السفلي إلى الحد الأعلى. تأكد من أن الأنبوب في الأخدود "V" في المشبك السفلي. تشديد المشبك السفلي.
  6. أغلق الباب وتأكد من أن ضوء "جاهز" مضاء. اضغط على زر ابدأ لبدء سخان وسحب تسلسل (الشكل 1B).
  7. ضمان سخان إيقاف تلقائيا بعد سحب الحرارة والجاذبية أنبوب شعرية عن بعضها البعض(الشكل 1C),والشريحة يتحرك إلى أسفل.
  8. افتح الباب. بينما عقد الجزء العلوي من أنبوب الشعرية، فك المشبك العلوي. إزالة أنبوب الشعيرات الدموية العليا ووضعها جانبا.
  9. عقد أنبوب الشعرية في الشريحة السفلية وفك المشبك السفلي. إزالة أنبوب الشعري السفلي ووضعها جانبا.
  10. استخدام ممشوق microelectrode مع 0.05 ميكرومتر الألومنيوم طحن جلخ لوحة لت شطب أنبوب الشعيرات الدموية المسحوبة لإنشاء الإبر الحقن.
  11. ما يكفي من الماء على طحن المياه على لوحة لتغطية السطح (الشكل 1D).
  12. قم بتشغيل الـ beveller بحيث يبدأ في الدوران عند 60 دورة في الدقيقة. ضع أنبوب الشعيرات الدموية المسحوبة في المشبك الماص في الأخدود "V". تشديد المشبك وضبط زاوية المشبك الماص إلى 30 درجة.
  13. ضبط غيض من الحافة المدببة من أنبوب شعرية مسافة ما يقرب من ثلثي بعيدا عن مركز دوران لوحة طحن.
  14. خفض أنبوب الشعيرات الدموية فرضت عن طريق ضبط مقبض التحكم الخشنة في الجزء العلوي من المتلاعب. الاستمرار في خفض أنبوب الشعيرات الدموية حتى غيض من أنبوب شعري يمتد تحت سطح الماء والاتصالات سطح جلخ من لوحة طحن.
  15. مراقبة التقدم المطوق باستخدام المجهر المرفق بالبر. بعد 5 دقائق، ضبط السيطرة غرامة لرفع إبرة الزجاج من لوحة طحن.
  16. إزالة إبرة الزجاج ووضعها تحت 10x التكبير للتحقق من غيض من أنبوب الشعرية (الشكل 1E, F).
  17. لضمان عدم وجود انسدادات، أدخل الإبرة الزجاجية في حامل ماصة على حقنة ودفع الهواء إلى أنبوب 1 مل من الإيثانول 99٪. إذا كانت فقاعات الهواء تتشكل عند طرف الإبرة ، فإن الإبرة لا يوجد بها انسداد ويمكن استخدامها للضنجن الدقيق. هذه العملية أيضا يضمن عقم الإبر الزجاجية.
  18. يمكن أن يحمل أنبوب واحد من الشعيرات الدموية ما يصل إلى 5 ميكرولتر سائل. وضع علامة على أنبوب الشعيرات الدموية في 10 أقسام لحساب المسافات على الإبرة لوضع علامة لكميات 0.5 ميكرولتر. وضع علامة على مقياس مع تلك المسافة التي تحمل 0.5 ميكرولتر للتحضير في المستقبل. لإبرة 5 ميكرولتر، مسافات 0.7 مم عن بعضها يعادل 0.5 ميكرولتر(الشكل 1G).

2. عصيات cereus الثقافة

  1. تنفيذ كافة الإجراءات في هذا القسم تحت شروط السلامة البيولوجية المستوى 2.
  2. مخزون الفريزر من B. cereus ATCC 14579 لعزل مستعمرة واحدة على 5٪ من صفيحة أجار الدم الأغنام واحتضان بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية(الشكل 2A).
  3. Pipette 5 مل من حقن القلب الدماغ العقيم (BHI) مرق في أنبوب 10 مل معقم snap-cap (الشكل 2B). باستخدام حلقة أو إبرة معقم، واختيار مستعمرة واحدة من B. cereus ATCC 14579 من لوحة أجار وتطعيم BHI السائل.
  4. دوامة العينة لفترة وجيزة. ضع أنبوب الانطباق في حاضنة دوارة. تعيين درجة الحرارة عند 37 درجة مئوية والسرعة في 200 دورة في الدقيقة. بعد 18 ح، وإزالة الثقافة من الحاضنة (الشكل 2B).

3. التخفيف البكتيري للحقن داخل فيريال

  1. تنفيذ كافة الإجراءات في هذا القسم تحت شروط السلامة البيولوجية المستوى 2.
  2. حساب حجم ثقافة B. cereus بين عشية وضحاها لإضافة إلى 10 مل من BHI الطازجة لتحقيق 200 مستعمرة تشكيل وحدات لكل ميكرولتر (CFU / μL). على سبيل المثال، ثقافة بين عشية وضحاها من B. cereus في BHI يكرر إلى ما يقرب من 2 × 108 CFU / مل، والتي يمكن بعد ذلك أن تضعف إلى 200 CFU/μL عن طريق الأنابيب 10 ميكرولتر من ثقافة بين عشية وضحاها في 10 مل من BHI الطازجة.
  3. Pipette 1 مل من الثقافة المخففة حديثا في أنبوب microcentuge 1.5 مل. الحفاظ على هذا الأنبوب على الجليد حتى الحقن داخل فيريال. تنفيذ الحقن intravitreal داخل 60 دقيقة من تخفيف الثقافة البكتيرية.

4. الماوس الحقن داخل في الواقع

  1. تنفيذ كافة الإجراءات في هذا القسم تحت شروط السلامة البيولوجية المستوى 2.
  2. قم بإعداد موقع الإجراء عن طريق وضع اللوحات الطبية على جدول التشغيل.
  3. تشغيل على ناينكتور وفتح صمام الغاز على خزان الهواء المضغوط تعلق على ناخن microinctor. ضبط منظم خزان حتى تسليم الغاز هو ما يقرب من 60 psi.
  4. على المُخنِج الصغير، اضغط على وضع حتى تظهر الشاشة "التوازن". اضغط على "موازنة" ووضع ماوس الكمبيوتر على جدول التشغيل. قم بتوصيل حامل الماصات الفولاذ المقاوم للصدأ بالأنابيب المرفقة بـ "التعبئة/ الإخراج" من المحاقن. هذا الأنبوب متصل دائماً بالمحقن.
  5. أدخل الإبرة الشعرية إلى الطرف الآخر من حامل الماصات عن طريق الشد ضيق موصل حامل الماصات حول الإبرة.
  6. بدوره على المجهر العيون وتشغيل ضوءه إلى كثافة 50٪. ضبط المجهر على موقع الإجراء على طاولة التشغيل وضبط المجهر إلى التركيز المطلوب.
  7. قبل أن يبدأ الإجراء، تأكد من تخدير الماوس بشكل كاف عن طريق اختبار منعكس سحب دواسة. تأكد من اتباع بروتوكول IACUC المعتمد للتخدير.
  8. ضع الماوس المُهدَّد على اللوحات الطبية السفلية مع أنفها المُشار إليه إلى اليمين ويتكئ على جانبه الأيسر.
  9. ننظر في العين اليمنى من الماوس من خلال المجهر ophthalmic وفتح الأغطية عن طريق فتح ملقط من ملقط العمل العكسي على جانبي العين لفضح موقع الحقن (الشكل 3C).
  10. ملء إبرة شعرية مع التخفيف 200 CFU/μL عن طريق النقر على اليسار لوحة الماوس متصلة إلى الحقن المجهري(الشكل 3D).
  11. تأمين رأس الحيوان مع اليد اليسرى ووضع طرف إبرة في limbus من العين. مع الإبرة في وضع شطبة حتى وزاوية 45 درجة، ثقب عين الماوس، ولكن تأكد من أن يتم إدخال طرف حاد فقط من الإبرة (~ 0.5 مم) عند الحقن.
  12. بمجرد إدخال طرف الإبرة، قم بتحريك اليد اليسرى من رأس الماوس إلى لوحة الماوس وانقر بزر الماوس الأيمن على لوحة الماوس لحقن 0.5 ميكرولتر من تخفيف عنق الرحم B. cereus. لمنع التسرب، ترك طرف إبرة داخل العين الماوس لمدة 2-3 ثانية قبل إزالة (الشكل 3E)1،19،26،27،32،34،36،37،38.
  13. الافراج عن ملقط ووضع الماوس في قفص الذي يجلس على وسادة الاحترار. مراقبة هذه الفئران حتى أنها قد تعافى من التخدير (الشكل 3F).
  14. مرة واحدة يتم استرداد الفئران من التخدير، والعودة القفص إلى الرف السليم. إذا كانت الفئران سوف تخضع لتحليل وظيفة شبكية العين عن طريق التصوير الكهربائي، ينبغي أن تعاد أقفاص إلى غرفة مظلمة للتكيف الظلام السليم.

5. إعداد أنبوب الحصاد

  1. مكان 1 مم حبات زجاجية معقم في 1.5 مل برغي قبعة أنابيب.
  2. تعقيم هذه الأنابيب في الأوتوكلاف على إعداد جاف. اترك الأنابيب تبرد لدرجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام.
  3. أضف 10 مل من 1x ملح مُخزن بالفوسفات (PBS) إلى أنبوب طرد مركزي معقم 15 مل.
  4. أضف قرصًا من قرص كوكتيل مثبطات البروتياز في الأنبوب. مزيج من دوامة19،27،29،34،35.
  5. ماصة 400 ميكرولتر من 1x الفوسفات المخزنة المالحة (PBS) التي تحتوي على مثبطات البروتياز في كل أنبوب الحصاد autoclaved. تسمية الأنابيب ومكان على الجليد. (الشكل 4A).

6. حصاد العينين

  1. تنفيذ كافة الإجراءات في هذا القسم تحت شروط السلامة البيولوجية المستوى 2.
  2. القتل الرحيم الماوس عن طريق استنشاق CO2. استخدم طريقة ثانوية لتأكيد القتل الرحيم.
  3. عقد رئيس الماوس القتل الرحيم آمنة وفتح ملقط تلميح غرامة على جانبي العين المصابة. دفع إلى أسفل نحو الرأس إلى proptose العين. مرة واحدة في ملقط وراء الكرة الأرضية من العين، والضغط على ملقط معا. سحب ملقط بعيدا عن الرأس لفصل مقلة العين (الشكل 4B).
  4. ضع مقلة العين على الفور في أنبوب حصاد المسمى. ضع أنابيب على الجليد لمدة لا تزيد عن 60 دقيقة (الشكل 4C).

7. عد البكتيريا داخل العين

  1. تنفيذ كافة الإجراءات في هذا القسم تحت شروط السلامة البيولوجية المستوى 2.
  2. تأكد من أن جميع أنابيب الحصاد مغلقة بإحكام ومتوازنة أثناء وجودها في التجانس الأنسجة (الشكل 5A). بدوره على التجانس الأنسجة لمدة 1 دقيقة لتجانس العينات. انتظر 30 s، ثم تشغيل لمدة دقيقة أخرى. ضع أنابيب على الجليد (الشكل 5B, C).
  3. تخفيف تسلسلي كل عينة 10 أضعاف عن طريق نقل تسلسلي 20 ميكرولتر من تجانس في 180 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني عقيم 1X. تمييع حتى يتم التوصل إلى عامل من 10-7 (الشكل 5D).
  4. تسمية كل صف من الحارة، لوحة BHI مربع مع عوامل التخفيف المناسبة. نقل 10 ميكرولتر من كل تخفيف في صف واحد إلى أعلى لوحة BHI التي تميل حوالي 45 درجة. السماح للعمّل عينة حتى تصل تقريبا إلى أسفل لوحة، ثم وضع لوحة مسطحة (الشكل 5E)39.
  5. عندما يتم امتصاص العينة في agar BHI، نقل لوحة إلى حاضنة 37 درجة مئوية. يجب أن تبدأ المستعمرات لتكون مرئية 8 ح بعد وضعها في الحاضنة.
  6. إزالة لوحة من الحاضنة قبل نمو مستعمرات B. cereus يتداخل مع تحديد المستعمرات الفردية (الشكل 5F).
  7. للحصول على تمثيل دقيق للتركيز في العينة، عد الصف الذي يحتوي على ما بين 10-100 مستعمرات. على سبيل المثال، صف مع جزء التخفيف من 10-4 التي لديها 45 مستعمرة سيكون تركيز 4.5 × 105 CFU / مل.
  8. لحساب العدد الإجمالي للبكتيريا لكل عين، اضرب التركيز بنسبة 0.4، وهو ما يمثل حجم المليلتر من 1x PBS المستخدمة لتجانس العين. على سبيل المثال، فإن تركيز 4.5 × 105 CFU / مل سوف يترجم إلى 1.8 × 105 CFU B. cereus لكل عين.

8. حفظ العينات

  1. ضع عينات متجانسة في صندوق ثلاجة المسمى ووضع هذا المربع في ثلاجة -80 درجة مئوية. ويمكن استخدام هذه العينات في وقت لاحق لتحليل الوسيط الالتهابي من قبل ELISA.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

توليد inoculum استنساخ ودقة إجراء الحقن داخل فيريال هي الخطوات الرئيسية في تطوير نماذج من التهاب بطانة الرحم الميكروبية. هنا، أظهرنا إجراء الحقن داخل في الواقع باستخدام الغرام إيجابية عصيات cereus. حقننا 100 CFU/0.5 ميكرولتر من B. cereus في منتصف الزجاجي لخمسة فئران C57BL6. بعد 10 ح بعد الظهر، لاحظنا نمو العين من B. cereus إلى ما يقرب من 1.8 × 105 CFU / العين. يوضح الشكل 1 بناء إبر زجاجية لتوصيل البكتيريا إلى منتصف في منتصف عين الماوس. عصيات cereus المتزايد على صفيحة agar الدم وفي أنابيب الثقافة يظهر في الشكل 2. ويبين الشكل 3 إجراء الحقن داخل في الواقع الماوس باستخدام نظام حقن الهواء المضغوط. يوضح الشكل 4 عملية حصاد العينين المصابتين بعد الإصابة بالضوضاء اللاحقة المطلوبة. ويبين الشكل 5 تقنية التجانس العينين المصابين. يوضح الشكل 6 عدد البكتيريا داخل العين من خمس عيون ماوس مختلفة عند 10 ح بعد الإصابة. الشكل 7 يصور الإجراء العام والتمثيل الرسومي لحقن الماوس داخل في الواقع.

Figure 1
الشكل 1: صنع الإبر الزجاجية الممشوقة. وأدلت الإبر الزجاجية من ماصات صغيرة يمكن التخلص منها باستخدام إبرة / ماصة سحب وmipipette مطوق. (A) أنبوب الشعيرات الدموية الزجاجية المثبّتة في إبرة / ماصة سحب. (B, C) إنشاء إبر الزجاج باستخدام الجهد المطلوب. (D) يغلف الزجاج micropipettes. (E, F) ميكروبيبتات الزجاج قبل وبعد شطب. (E) تحجيم الإبر الزجاجية. المسافة بين نقطتين أسود يحمل 0.5 μL. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

Figure 2
الشكل 2: عصيات cereus ATCC 14579. (A) عصية cereus المتزايد على صفيحة أجار الدم. المستعمرات الفردية من B. cereus عادة عرض مناطق واضحة من الانحلال على لوحة أجار الدم. (ب) الثقافات بين عشية وضحاها العكرة من B. cereus. (C) الغرام تلطيخ من B. cereus. ب. cereus هي الجرام إيجابية على شكل قضيب البكتيريا. (D) ميكروجراف إلكترون من عصيات cereus. هذا ميكروجراف الإلكترون يظهر قضيب على شكل عصية cereus مع الشعر مثل هياكل تسمى flagella. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

Figure 3
الشكل 3: حقن الماوس داخل في الواقع. يتم تنفيذ إجراء الحقن باستخدام حاقن الهواء المضغوط مع عرض مجال التشغيل باستخدام المجهر التجاري (A) الكيتامين والمخدرات xylazine لتخشين الماوس. (ب) إدارة الكيتامين والزيلازين عن طريق الحقن داخل الصفاق ل التخدير الماوس. (C) لقط الجلد حول العين مرة أخرى إلى proptose العين. (D) ملء الإبر مع البكتيريا باستخدام حاقن الهواء المضغوط. (E) الحقن داخل فيريال. (F) رصد الماوس المصاب بعد التخدير. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

Figure 4
الشكل 4: العين المصابة بالماوس الحصاد. بعد العدوى، بعد نقطة الوقت المطلوب، حصاد عيون الماوس المصابة باستخدام ملاقط عقيمة. (أ) برنامج تلفزيوني يحتوي على حبات زجاجية معقمة. (ب) حصاد العين المصابة. (C) أنبوب الحصاد التي تحتوي على العين الماوس. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

Figure 5
الشكل 5: معالجة العين المحصودة للعد البكتيري داخل العين. (أ) أنبوب الحصاد مع العين المصابة فرضت بإحكام على التجانس الأنسجة. (B) كانت العيون المصابة متجانسة مرتين لمدة 1 دقيقة لكل منهما. تخفيف المسار (D) من تجانس العين (C) والطلاء اللاحق (E) للكمية البكتيرية. (E) ممثل فرد عصية cereus مستعمرة بعد تخفيف المسار. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

Figure 6
الشكل 6: عد البكتيريا داخل العين في 10 ح بعد الإصابة. M، رقم الماوس. CFU، وحدات تشكيل مستعمرة. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

Figure 7
الشكل 7: حقن الماوس داخل في الواقع. (A) المخطط الانسيابي الشامل للماوس intravitreal إجراء الحقن. (B) عرض رسومي للحقن داخل فيري. خلال العملية، يتم إدخال الإبر الزجاجية المعقمة المشطورة التي تحتوي على ثقافة B. cereus في منتصف في منتصف عين الماوس، ويتم تسليم B. cereus باستخدام نظام الحقن المجهري المضغوط بالهواء. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

حتى مع توافر المضادات الحيوية القوية ، والأدوية المضادة للالتهابات ، وجراحة استئصال فيريك ، يمكن أن يؤدي التهاب بطانة الأوعية البكتيرية إلى تعمية المريض. كانت الدراسات السريرية مفيدة في دراسة التهاب إندورفوم. ومع ذلك، فإن النماذج التجريبية من endophthalmitis توفر نتائج سريعة وقابلة للتكرار يمكن ترجمتها إلى التقدم في مستوى الرعاية، مما يؤدي إلى نتائج بصرية أفضل للمرضى.

حجم الزجاجة للعين الماوس هو ما يقرب من 7 ميكرولتر40. هذا الحجم الصغير يسمح فقط لكمية محدودة من المواد التي يمكن حقنها. ولا ينبغي حقن وحدات تخزين أكبر من 1.0 ميكرولتر من أجل تجنب تلف العين. وتتطلب العملية معدات محددة وممارسات محددة للتقنيات لضمان قابلية التكاثر والدقة. وقد درست Endophthalmitis في الرئيسيات ، الخنازير ، الأرانب ، الفئران ، الخنازير وغينيا والفأر28،41،42،43،44،45. من بين الأنواع الأكبر ، تكون العيون أقرب بكثير في الحجم إلى العين البشرية ، ويمكن إجراء الحقن داخل العينين الكبيرة دون معدات خاصة. باستثناء الفأر ، فإن غياب سلالات الضربة القاضية والكواشف لدراسة الاستجابات المناعية المضيفة في نماذج حيوانية أخرى يحد من فائدتها في التهاب إندورفثالم التجريبي.

يحدث التهاب إندورفوميه في معظم الأحيان كمضاعفات لجراحة إعتام عدسة العين. ويمكن أن تحدث هذه العدوى أيضا بعد اختراق صدمة العين أو العدوى الجهازية. نتيجة بصرية في هذا المرض يعتمد جزئيا على الفوعة من مسببات الأمراض التي تصيب. في الفئران، تعتمد النتيجة البصرية أيضًا على حالتها المناعية. وقد تم تسهيل فهم آليات المرض المرضية من خلال دراسة المرض في النماذج الحيوانية التجريبية28. بروتوكول حقن الماوس intravitreal وتحديد كمي من المعلمات العدوى يمكن تكييفها لدراسة endophthalmitis بدأت مع أي نوع تقريبا من مسببات الأمراض البكتيرية أو الفطرية28. وعلاوة على ذلك، يمكن أيضا تطبيق هذا البروتوكول وتعديله لدراسة التغيرات التشريحية، والعمليات الالتهابية، وملامح التعبير الجيني لكل من البكتيريا والمضيف أثناء العدوى.

حقن الماوس intravitreal وتحليل لاحق من المعلمات العدوى تتكون من عدة خطوات حاسمة(الشكل 7). يجب أن يتم إنشاء إبرة الزجاج بدقة، ووضع علامة، وتعقيمها. نهاية حادة من إبرة الزجاج مشطوفة والتحجيم السليم يحدد التسليم الكافي للبكتيريا وثقب الكرة الأرضية. إذا كانت نهاية الإبرة قصيرة وغير مشطوفة بشكل مناسب ، فقد تخلق ثقبًا كبيرًا في الكرة الأرضية يمكن أن يسبب تسربًا وتلوثًا في الكرة الأرضية ونتائج مرض غير دقيقة. ولذلك، فمن المستحسن لمراقبة micropipettes الزجاج في حين يغلف تحت 10x زوم بصري من المجهر حقل مشرق. لضمان تسليم الكمية الصحيحة من البكتيريا ، يجب حساب التخفيفات مسبقًا ، ويجب وضع علامة على مقياس الحجم المناسب على الإبرة الزجاجية. قد تختلف المعلمات لسحب الإبرة و شطبها باستخدام أنواع أخرى من المعدات.

أسلوب الحقن داخل في الواقع الموصوفة يستخدم نظام الحقن المجهري المضغوط بالهواء من أجل التسليم السليم للبكتيريا في عين الفأر1. الاستخدام المناسب لهذا المُصاب بالناسل الدقيق أمر حاسم بالنسبة لبارامترات العدوى القابلة للتكرار. منذ ضغط الهواء يحدد سرعة التسليم, القوة المفرطة قد حقن بسرعة حجم أكبر في العينين, مما تسبب في الضغط داخل العين المفرط و / أو تمزق الكرة الأرضية. ولذلك، فإن التوصية هي استخدام ضغط من 10-13 psi لملء وحقن أثناء الإجراء. مشكلة أخرى محتملة هي تسرب المحلل البكتيري من الإبر الزجاجية بعد الملء. تسرب يمكن أن يؤدي إلى حقن وحدات التخزين غير دقيقة في عيون الماوس. تحقق دائماً من التوصيلات بين نظام الحقن، الأنابيب، والإبر الزجاجية قبل الحقن.

حقن كميات دقيقة من البكتيريا أمر حيوي لإعادة إنتاج التهاب endophthalmmm التجريبي. تتطلب نماذج مختلفة endophthalmitis التجريبية تلقيح أعداد محددة من البكتيريا12،28،46،47،48،49. بالنسبة لـ B. cereus endophthalmitis ، هناك حاجة إلى حقن 100 CFU لبدء عدوى قابلة للتكاثر1. منذ نمو البكتيريا يعتمد على متوسطة النمو والظروف، يجب تكرار بيئة النمو، وسائل الإعلام، والتخفيف في كل مرة. لذلك، فمن المستحسن لاختبار ظروف الثقافة قبل التجربة لإعادة إنتاج inoculum دقيقة في حجم مناسب للحقن. كما ذكر أعلاه، والحد الأعلى للحقن intravitreal في عيون الماوس هو 1.0 μL28. ارتفاع حجم مفرط الضغط داخل العين التي يمكن أن تؤدي إلى الزرق، وفصل شبكية العين من الجزء الخلفي، أو تمزق الكرة الأرضية. الحقن داخل فيريال والعدوى الناتجة في الفئران قد لا تحاكي تماما B. cereus endophthalmitis في الإنسان. معظم النماذج الحيوانية من الأمراض البشرية محدودة في هذه الطريقة. يتم حقن كميات معروفة من B. cereus في العين بعد نمو وسائل الإعلام الغنية بالمغذيات. بالنسبة للحالات السريرية من التهاب إندورفثال B. cereus ، فإن الكميات التي تصيبها غير معروفة وتختلف مصادر التلوث. ومع ذلك، فإن مزايا استخدام الكائنات الحية المميزة وسلالات الماوس وتوليد دورات العدوى القابلة للتكرار تفوق هذه القيود.

والحصاد السليم للعينين المصابتين هو خطوة أخرى حاسمة. إن الحفاظ على الظروف المتعفنة أمر ضروري لتجنب أي تلوث متقاطع يمكن أن يتعارض مع تفسير البيانات. ولذلك، فإن التوصية هي لتطهير منضدة وجميع الأدوات مع الإيثانول 70٪ قبل الحصاد. أعداد البكتيريا زيادة سريعة داخل البيئة الزجاجية أثناء العدوى، والتي قد تسبب تورم في العين. لذلك، ينبغي توخي الحذر لإزالة العين بلطف أثناء الحصاد منع تمزق الكرة الأرضية. وعلاوة على ذلك، يجب أن يتم تشديد غطاء أنبوب الحصاد التي تحتوي على العين المصابة بشكل كاف قبل وضع الأنبوب في التجانس الأنسجة. وسوف يؤدي الغطاء فضفاضة في تسرب وتلوث من تجانس الأنسجة مما يؤدي إلى كمية غير دقيقة من البكتيريا في أنابيب تسرب. كما أن إجراء تجانس العين يرفع درجات حرارة الأنابيب. لذلك، فمن المستحسن تجانس 1 دقيقة في كل مرة. ويمكن أن تؤثر درجات الحرارة المرتفعة على كمية بعض بارامترات العدوى. في حين أن هذه الطريقة لا توفر عدد البكتيريا داخل مواقع محددة للعين، عندما يقترن أساليب النسيج، يمكننا تقدير حيث يمكن أن تكون موضعية البكتيريا. تم الإبلاغ عن توطين B. cereus في العين أثناء endophthalmitis في الأرانب ، التي تكون عيناها أكبر وأكثر سهولة في تشريحها في الأقسام الفرعية. 2

حقن داخل فيريال يحاكي تسليم الكائنات الحية إلى الجزء الخلفي من العين، الذي يبدأ العدوى. هذه الخطوة الأولية يسهل الدراسة النوعية والكمية للمعلمات العدوى في نموذج الماوس استنساخه للغاية من endophthalmitis التجريبية. وتستخدم هذه النماذج أيضا لتقدير التهاب العين عن طريق تحديد كمية النخاع في الخلايا العدلات المتسللة، تحديد أنواع خلايا محددة عن طريق تدفق cytometry ، وقياس السيتوكينات chemokines بواسطة PCR في الوقت الحقيقي و / أو ELISA ، ومراقبة بنية العين من قبل الهستوباتولوجيا1،6،19، 20،26،27،34،35،38. يتم حصاد عيون الماوس المصابة مع مسيلات مختلفة اعتمادا على نوع من المعلمات العدوى التي يتعين قياسها. لتحليل التعبير الجيني، مطلوب عازلة تحلل مختلفة26. للفحص الهدولوجي، يتم وضع العينين المحصودة في محلول تثبيتي. العديد من الفئران خروج المغلوب الجينية يسهل أيضا دراسة دور مختلف العوامل المناعية والخلايا. الحقن داخل باطن الأرض هو بالتالي تقنية الدعامة الأساسية للباحثين في مجال العدوى داخل العين والعلاجات.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

ولا يوجد لدى أصحاب البلاغ أي منازعات مالية للكشف عنها.

Acknowledgments

يشكر المؤلفان الدكتور فنغ لي ومارك ديتمار (أوهسك P30 الحية تصوير الحيوان الأساسية، عميد معهد أ. ماكغي للعيون، أوكلاهوما سيتي، OK، الولايات المتحدة الأمريكية) على مساعدتهم. وقد تم دعم أبحاثنا من قبل المعاهد الوطنية للصحة المنح R01EY028810، R01EY028066، R01EY025947، وR01EY024140. كما تم دعم أبحاثنا من قبل P30EY21725 (منحة NIH CORE لتصوير الحيوانات الحية وتحليلها، والبيولوجيا الجزيئية، والتصوير الخلوي). كما تم دعم بحثنا من قبل برنامج التدريب ما قبل الدكتوراه في مجال الرؤية في NEI 5T32EY023202، ومنحة دعم أبحاث مؤسسة الصحة المشيخية، ومنحة غير مقيدة لعميد معهد أ. ماكغي للعيون من البحوث للوقاية من العمى.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
2-20 µL pipette RANIN L0696003G NA
37oC Incubator Fisher Scientific 11-690-625D NA
Bacto Brain Heart Infusion BD 90003-032 NA
Cell Microinjector MicroData Instrument, Inc. PM2000 NA
Fine tip forceps Thermo Fisher Scientific 12-000-122 NA
Glass beads 1.0 mm BioSpec 11079110 NA
Incubator Shaker New Brunswick Scientific NB-I2400 NA
Microcapillary Pipets 5 Microliters Kimble 71900-5 NA
Micro-Pipette Beveler Sutter Instrument Co. BV-10 NA
Microscope Axiostar Plus Zeiss NA
Microscope OPMI Lumera Zeiss NA
Mini-Beadbeater-16 BioSpec Model 607 NA
Multichannel pipette 30-300 µL Biohit 15626090 NA
Multichannel pipette 5-100 µL Biohit 9143724 NA
Needle/Pipette Puller Kopf 730 NA
PBS GIBCO 1897315 Molecular grade
Protease Inhibitor Cocktail Roche 4693159001 Molecular grade
Reverse action forceps Katena K5-8228 NA

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Ramadan, R. T., Ramirez, R., Novosad, B. D., Callegan, M. C. Acute inflammation and loss of retinal architecture and function during experimental Bacillus endophthalmitis. Current Eye Research. 31 (11), 955-965 (2006).
  2. Callegan, M. C., Booth, M. C., Jett, B. D., Gilmore, M. S. Pathogenesis of gram-positive bacterial endophthalmitis. Infection and Immunity. 67 (7), 3348-3356 (1999).
  3. Durand, M. L. Bacterial and Fungal Endophthalmitis. Clinical Microbiology Reviews. 30 (3), 597-613 (2017).
  4. Callegan, M. C., Engelbert, M., Parke, D. W., Jett, B. D., Gilmore, M. S. Bacterial endophthalmitis: Epidemiology, therapeutics, and bacterium-host interactions. Clinical Microbiology Reviews. 15 (1), 111-124 (2002).
  5. Livingston, E. T., Mursalin, M. H., Callegan, M. C. A Pyrrhic Victory: The PMN Response to Ocular Bacterial Infections. Microorganisms. 7 (11), 537 (2019).
  6. Ramadan, R. T., Moyer, A. L., Callegan, M. C. A role for tumor necrosis factor-alpha in experimental Bacillus cereus endophthalmitis pathogenesis. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 49 (10), 4482-4489 (2008).
  7. Davey, R. T., Tauber, W. B. Posttraumatic endophthalmitis: The emerging role of Bacillus cereus infection. Reviews of Infectious Dissease. 9 (1), 110-123 (1987).
  8. Ramappa, M., et al. An outbreak of acute post-cataract surgery Pseudomonas sp. endophthalmitis caused by contaminated hydrophilic intraocular lens solution. Ophthalmology. 119 (3), 564-570 (2012).
  9. Coburn, P. S., et al. Bloodstream-To-Eye Infections Are Facilitated by Outer Blood-Retinal Barrier Dysfunction. PLoS One. 11 (5), 015560 (2016).
  10. Ness, T., Pelz, K., Hansen, L. L. Endogenous endophthalmitis: Microorganisms, disposition and prognosis. Acta Ophthalmologica Scandinavica. 85 (8), 852-856 (2007).
  11. Novosad, B. D., Callegan, M. C. Severe bacterial endophthalmitis: Towards improving clinical outcomes. Expert Review of Ophthalmology. 5 (5), 689-698 (2010).
  12. Mursalin, M. H., Livingston, E. T., Callegan, M. C. The cereus matter of Bacillus endophthalmitis. Experimental Eye Research. 193, 107959 (2020).
  13. Callegan, M. C., et al. Relationship of plcR-regulated factors to Bacillus endophthalmitis virulence. Infection and Immunity. 71 (6), 3116-3124 (2003).
  14. Beecher, D. J., Pulido, J. S., Barney, N. P., Wong, A. C. Extracellular virulence factors in Bacillus cereus endophthalmitis: Methods and implication of involvement of hemolysin BL. Infection and Immunity. 63 (2), 632-639 (1995).
  15. Callegan, M. C., et al. Contribution of membrane-damaging toxins to Bacillus endophthalmitis pathogenesis. Infection and Immunity. 70 (10), 5381-5389 (2002).
  16. Cowan, C. L. Jr, Madden, W. M., Hatem, G. F., Merritt, J. C. Endogenous Bacillus cereus panophthalmitis. Annals of Ophthalmology. 19 (2), 65-68 (1987).
  17. Callegan, M. C., et al. Virulence factor profiles and antimicrobial susceptibilities of ocular Bacillus isolates. Current Eye Research. 31 (9), 693-702 (2006).
  18. Callegan, M. C., et al. Bacillus endophthalmitis: Roles of bacterial toxins and motility during infection. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 46 (9), 3233-3238 (2005).
  19. Mursalin, M. H. Bacillus S-layer-mediated innate interactions during endophthalmitis. Frontiers in Immunology. 11 (215), (2020).
  20. Moyer, A. L., Ramadan, R. T., Novosad, B. D., Astley, R., Callegan, M. C. Bacillus cereus-induced permeability of the blood-ocular barrier during experimental endophthalmitis. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 50 (8), 3783-3793 (2009).
  21. Callegan, M. C., et al. Efficacy of vitrectomy in improving the outcome of Bacillus cereus endophthalmitis. Retina. 31 (8), 1518-1524 (2011).
  22. David, D. B., Kirkby, G. R., Noble, B. A. Bacillus cereus endophthalmitis. British Journal of Ophthalmology. 78 (7), 577-580 (1994).
  23. Vahey, J. B., Flynn, H. W. Jr Results in the management of Bacillus endophthalmitis. Ophthalmic Surgery. 22 (11), 681-686 (1991).
  24. Wiskur, B. J., Robinson, M. L., Farrand, A. J., Novosad, B. D., Callegan, M. C. Toward improving therapeutic regimens for Bacillus endophthalmitis. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 49 (4), 1480-1487 (2008).
  25. Alfaro, D. V., et al. Experimental Bacillus cereus post-traumatic endophthalmitis and treatment with ciprofloxacin. British Journal of Ophthalmology. 80 (8), 755-758 (1996).
  26. Coburn, P. S., et al. TLR4 modulates inflammatory gene targets in the retina during Bacillus cereus endophthalmitis. BMC Ophthalmology. 18 (1), 96 (2018).
  27. Mursalin, M. H., et al. S-layer Impacts the Virulence of Bacillus in Endophthalmitis. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 60 (12), 3727-3739 (2019).
  28. Astley, R. A., Coburn, P. S., Parkunan, S. M., Callegan, M. C. Modeling intraocular bacterial infections. Progress in Retinal and Eye Research. 54, 30-48 (2016).
  29. Parkunan, S. M., et al. CXCL1, but not IL-6, significantly impacts intraocular inflammation during infection. Journal of Leukocyte Biology. 100 (5), 1125-1134 (2016).
  30. LaGrow, A. L., et al. A Novel Biomimetic Nanosponge Protects the Retina from the Enterococcus faecalis Cytolysin. mSphere. 2 (6), 00335 (2017).
  31. Beecher, D. J., Olsen, T. W., Somers, E. B., Wong, A. C. Evidence for contribution of tripartite hemolysin BL, phosphatidylcholine-preferring phospholipase C, and collagenase to virulence of Bacillus cereus endophthalmitis. Infection and Immunity. 68 (9), 5269-5276 (2000).
  32. Callegan, M. C., et al. The role of pili in Bacillus cereus intraocular infection. Experimental Eye Research. 159, 69-76 (2017).
  33. Miller, F. C., et al. Targets of immunomodulation in bacterial endophthalmitis. Progress in Retinal and Eye Research. 73, 100763 (2019).
  34. Parkunan, S. M., Astley, R., Callegan, M. C. Role of TLR5 and flagella in Bacillus intraocular infection. PLoS One. 9 (6), 100543 (2014).
  35. Parkunan, S. M., et al. Unexpected roles for Toll-Like receptor 4 and TRIF in intraocular infection with Gram-positive bacteria. Infection and Immunity. 83 (10), 3926-3936 (2015).
  36. Coburn, P. S., et al. Disarming Pore-Forming Toxins with Biomimetic Nanosponges in Intraocular Infections. mSphere. 4 (3), 00262-00319 (2019).
  37. LaGrow, A., et al. Biomimetic nanosponges augment gatifloxacin in reducing retinal damage during experimental MRSA endophthalmitis. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 60 (9), 4632 (2019).
  38. Novosad, B. D., Astley, R. A., Callegan, M. C. Role of Toll-like receptor (TLR) 2 in experimental Bacillus cereus endophthalmitis. PLoS One. 6 (12), 28619 (2011).
  39. Jett, B. D., Hatter, K. L., Huycke, M. M., Gilmore, M. S. Simplified agar plate method for quantifying viable bacteria. Biotechniques. 23 (4), 648-650 (1997).
  40. Yu, D. Y., Cringle, S. J. Oxygen distribution in the mouse retina. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 47 (3), 1109-1112 (2006).
  41. Beyer, T. L., O'Donnell, F. E., Goncalves, V., Singh, R. Role of the posterior capsule in the prevention of postoperative bacterial endophthalmitis: experimental primate studies and clinical implications. British Journal of Ophthalmology. 69 (11), 841-846 (1985).
  42. Tucker, D. N., Forster, R. K. Experimental bacterial endophthalmitis. Archives of Ophthalmology. 88 (6), 647-649 (1972).
  43. Alfaro, D. V., et al. Experimental pseudomonal posttraumatic endophthalmitis in a swine model. Treatment with ceftazidime, amikacin, and imipenem. Retina. 17 (2), 139-145 (1997).
  44. Silverstein, A. M., Zimmerman, L. E. Immunogenic endophthalmitis produced in the guinea pig by different pathogenetic mechanisms. American Journal of Ophthalmology. 48 (5), 435-447 (1959).
  45. Ravindranath, R. M., Hasan, S. A., Mondino, B. J. Immunopathologic features of Staphylococcus epidermidis-induced endophthalmitis in the rat. Current Eye Research. 16 (10), 1036-1043 (1997).
  46. Kumar, A., Singh, C. N., Glybina, I. V., Mahmoud, T. H., Yu, F. S. Toll-like receptor 2 ligand-induced protection against bacterial endophthalmitis. The Journal of Infectious Diseases. 201 (2), 255-263 (2010).
  47. Mylonakis, E., et al. The Enterococcus faecalis fsrB gene, a key component of the fsr quorum-sensing system, is associated with virulence in the rabbit endophthalmitis model. Infection and Immunity. 70 (8), 4678-4681 (2002).
  48. Sanders, M. E., et al. The Streptococcus pneumoniae capsule is required for full virulence in pneumococcal endophthalmitis. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 52 (2), 865-872 (2011).
  49. Hunt, J. J., Astley, R., Wheatley, N., Wang, J. T., Callegan, M. C. TLR4 contributes to the host response to Klebsiella intraocular infection. Current Eye Research. 39 (8), 790-802 (2014).

Tags

علم المناعة والعدوى، العدد 168، عدوى العين البكتيرية، الكم البكتيري داخل العين، معلمات عدوى العين، الحقن داخل العين، الحقن داخل العين، التهاب الدماغ
الحقن داخل القلبية وكمية من المعلمات العدوى في نموذج الماوس من التهاب Endophthalmitis البكتيرية
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Mursalin, M. H., Livingston, E.,… More

Mursalin, M. H., Livingston, E., Coburn, P. S., Miller, F. C., Astley, R., Callegan, M. C. Intravitreal Injection and Quantitation of Infection Parameters in a Mouse Model of Bacterial Endophthalmitis. J. Vis. Exp. (168), e61749, doi:10.3791/61749 (2021).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter