の解剖サッカロマイセスセレビシエ ASCI

Summary

酵母細胞のマニピュレーションは、減数分裂の遺伝学的分析のために必要とされるか、二倍体の受精卵を選択する。これらmicromanipulationsは、解剖顕微鏡のマイクロニードルを用いて実施されています。マイクロニードルは、細胞を再配置するために使用され、自動化の様々な程度で使用可能なマニピュレータによって制御されます。

Abstract

酵母は、多くの異なる細胞プロセスを研究するために使用される非常に扱いやすいモデル系である。共通の実験室株<em>サッカロマイセスセレビシエ</em>一倍体または二倍体の状態のいずれかに存在する。 two半数体から対立遺伝子を組み合わせることができるし、ゲノムへの変更を導入する能力は、ASCIの生産と解剖が必要になります。半数体細胞からのASCIの生産は二倍体株を生成するために互換性のある交配型を持つ2つの酵母の一倍体株の交配から始まります。これは、固体培地上または液体のいずれかのいくつかの方法で行うことができます。それは選択的に半数体株のどちらに比べて彼らの成長を促進する培地で二倍体のために選択することが有利である。二倍体は、ASCI、二倍体の減数分裂生殖から生じる4倍体の娘細胞の束を形成するために栄養の乏しい培地で胞子形成するために許可されています。栄養細胞とASCIの混合物を次いで、ASCIの子のう胞子を包む膜の嚢を離れて消化する酵素のザイモリアーゼで扱われます。一個ASCIを拾う四ascoporesを分離して再配置できます解剖顕微鏡下でマイクロニードルでマイクロマニピュレーションを使用する。解剖ASCIは、数日間増殖し、適切な選択培地にレプリカプレーティングによって興味のマーカーまたは対立遺伝子のためにテストされています。

Protocol

二倍体菌株の構築交配による二倍体の生産のためのプロトコル必要に応じて、単一のコロニーを生成する場合、最初の株はYPD、または選択培地上で三振してください。 two半数体株は、逆の交配型（すなわち、MATAとMATα）でなければならない。 無菌接種ループを使用しては、2つの半数体株の一つから、コロニーの小さな部分を選択。新しいYPDプレートストリークループ一回…

Discussion

酵母の解離は、目的のマーカーを使用して新しい株を選択すると便利なツールです。 four子のう胞子の理論的な成長パターンを決定する際には、栄養細胞の遺伝子型を調べることが重要です。プラスミドが存在する場合、これは子嚢胞子（s）はプラスミドを受信し、操作している菌株について予測し、結論に影響を及ぼすとなる影響を与えるとして、それは、単一のローまたはハイコピーで?…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Singer MSM System 200	Microscope	Singer Instruments	NA
D-sorbitol	Reagent	BioShop	SOR508
Tris	Reagent	BioShop	TRS001
Zymolyase 100T	Reagent	Seikagaku Corporation	120493
Yeast extract	Reagent	BioShop	YEX401
Peptone	Reagent	BioShop	PEP 403
D-glucose	Reagent	BioShop	GLU501
Yeast nitrogen base	Reagent	BioShop	YNB406
Bio-tryptone	Reagent	BioShop	TRP402
Sodium chloride	Reagent	BioShop	SOD002
Potassium acetate	Reagent	BioShop	POA 301
Agar	Reagent	BioShop	AGR003
Adenine sulfate	Reagent	BioShop	ADS201
L-uracil	Reagent	BioShop	URA 241
L-tryptophan	Reagent	BioShop	TRP 100
L-histidine	Reagent	BioShop	HIS 200
L-arginine	Reagent	Amresco	0877-100G
L-methionine	Reagent	BioShop	MET 222
L-tyrosine	Reagent	BioShop	TYR 333
L-isoleucine	Reagent	BioShop	ISO 910
L-valine	Reagent	BioShop	VAL 201
L-lysine	Reagent	BioShop	LYS 101
L-phenylalanine	Reagent	BioShop	PHA 302
L-glutamic acid	Reagent	BioShop	GLU 202
L-threonine	Reagent	BioShop	THR002
L-leucine	Reagent	BioShop	LEU 222