Препарирование Saccharomyces CEREVISIAE Сумки

Summary

Микроманипуляция дрожжевых клеток необходимо для мейоза генетического анализа или для выбора диплоидные зиготы. Эти micromanipulations осуществляются с помощью микроиглы о вскрытии микроскопом. Микроиглы используется для перемещения клетки и находится под контролем микроманипулятора, которые доступны с различной степенью автоматизации.

Abstract

Дрожжи очень послушный модель системы, которая используется для изучения различных клеточных процессов. Общая нагрузка лаборатории<em> Saccharomyces CEREVISIAE</em> Существует в любом гаплоидных или диплоидных государства. Способность сочетать аллелей от двух гаплоидов и способности вносить изменения в геноме требует производства и вскрытия сумки. Сумки продукции из гаплоидных клеток начинается с спаривания двух гаплоидных дрожжевых штаммов с совместимых типов спаривания, чтобы произвести диплоидные напряжения. Это может быть достигнуто в несколько способов как на твердой среде или в жидкости. Это выгодно, чтобы выбрать для диплоиды в среду, избирательно способствует их росту по сравнению с любым из гаплоидных штаммов. Диплоиды затем разрешили sporulate на бедных питательными веществами средой для формирования сумки, пакет из четырех гаплоидных дочерних клеток в результате мейоза воспроизводства диплоидные. Смесь растительных клеток и сумки затем обрабатывают ферментом zymolyase переварить от мембранного мешка окружающих аскоспор из сумки. Использование микроманипуляция с микроиглы под микроскопом рассечение можно подобрать индивидуальный сумки и отдельно и перемещать четыре ascopores. Расчлененный сумки выращивается в течение нескольких дней и испытаны для маркеров или аллелей интерес при посеве реплики на соответствующих селективных средах.

Protocol

Строительство диплоидных штаммов Протокол для производства диплоиды в результате скрещивания Начальная штаммы должны быть исключены на YPD или селективной среде, в случае необходимости, для получения отдельных колоний. Два гаплоидных штаммов должны быть противоположного ти…

Discussion

Дрожжи вскрытия является полезным инструментом для выбора новых штаммов с нужными маркерами. При определении теоретической модели роста из четырех аскоспор важно, чтобы смотреть на генотип вегетативные клетки. Если плазмиды присутствует, надо знать, если она не замужем, низкая или вы?…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Singer MSM System 200	Microscope	Singer Instruments	NA
D-sorbitol	Reagent	BioShop	SOR508
Tris	Reagent	BioShop	TRS001
Zymolyase 100T	Reagent	Seikagaku Corporation	120493
Yeast extract	Reagent	BioShop	YEX401
Peptone	Reagent	BioShop	PEP 403
D-glucose	Reagent	BioShop	GLU501
Yeast nitrogen base	Reagent	BioShop	YNB406
Bio-tryptone	Reagent	BioShop	TRP402
Sodium chloride	Reagent	BioShop	SOD002
Potassium acetate	Reagent	BioShop	POA 301
Agar	Reagent	BioShop	AGR003
Adenine sulfate	Reagent	BioShop	ADS201
L-uracil	Reagent	BioShop	URA 241
L-tryptophan	Reagent	BioShop	TRP 100
L-histidine	Reagent	BioShop	HIS 200
L-arginine	Reagent	Amresco	0877-100G
L-methionine	Reagent	BioShop	MET 222
L-tyrosine	Reagent	BioShop	TYR 333
L-isoleucine	Reagent	BioShop	ISO 910
L-valine	Reagent	BioShop	VAL 201
L-lysine	Reagent	BioShop	LYS 101
L-phenylalanine	Reagent	BioShop	PHA 302
L-glutamic acid	Reagent	BioShop	GLU 202
L-threonine	Reagent	BioShop	THR002
L-leucine	Reagent	BioShop	LEU 222