Maya hücreleri Mikromanipülasyon diploid zigot seçmek için mayotik genetik analiz için gerekli. Bu micromanipulations diseksiyon mikroskobu microneedle kullanılarak yürütülmektedir. Microneedle, hücreleri taşınmaya kullanılır ve otomasyon çeşitli derecelerde mevcuttur mikromanipülatör tarafından kontrol edilir.
Abstract
Maya, son derece uysal bir model sistem birçok farklı hücresel süreçleri incelemek için kullanılır. Ortak bir laboratuvar suşu<em> Saccharomyces cerevisiae</em> Haploit ya da diploid devlet var. Iki haploids allel birleştirmek için yeteneği ve genom değişiklikler tanıtmak için yeteneği asci üretim ve diseksiyon gerektirir. Asci haploid hücrelerin üretimi diploid gerginlik üretmek için uyumlu çiftleşme tipleri ile iki maya haploid suşları çiftleşme ile başlar. Bu katı besiyeri veya sıvı ya yollarından bir dizi yapılabilir. Haploid suşlarının ya göre seçici büyüme teşvik orta diploitler seçmek için avantajlıdır. Asci, dört haploit kızı hücreleri diploid mayotik üreme kaynaklanan bir paket oluşturmak için besin fakir orta biçime girdiklerinde diploitler sonra izin verilir. Vejetatif hücreleri ve asci karışımı daha sonra asci ascospores çevreleyen zar kese sindirmek için enzim zymolyase ile tedavi edilir. Diseksiyon mikroskobu altında, tek bir bireyin asci pick up ve dört ascopores ayrı ve yerlerini değiştirebilirsiniz bir microneedle mikromanipülasyon kullanma. Disseke asci birkaç gün büyüdü ve uygun seçici ortama çoğaltma kaplama faiz belirteçler veya allel için test edilmektedir.
Protocol
Diploid suşları İnşaatı Çiftleşme tarafından diploitler üretimi için protokol Ilk suşları YPD, ya da seçici besiyeri gerekirse, tek koloniler halinde dışarı vurdu olmalıdır. Iki haploid suşları, tam tersi çiftleşme tipi (yani Mata ve MATα) olmalıdır. , Kısır bir aşılama döngü kullanarak iki haploid suşların biri bir koloni küçük bir bölümünü seçin. Yeni bir YPD plaka çizgi döngü bir kez plaka üzerinde düz bir çizgi üzerinde. Plakanın alt taraf?…
Discussion
Maya diseksiyonu istenilen işaretleri ile yeni türler seçmek için yararlı bir araçtır. Dört ascospores teorik büyüme modelini belirlerken vejetatif hücre genotipi bakmak önemlidir. Bir plazmid varsa bu ascospore (ler) plazmid almak ve manipüle olan suşları ile ilgili tahmin ve sonuçları etkileyecek etkileyecek gibi, tek, düşük veya yüksek kopya ise, bilmeniz gerekir.
Bazı suşlarının diğerlerine göre daha kısa bir süre içinde birçok ascospores üreten iyi biçim…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Yazarın laboratuvarda çalışma Kanada Sağlık Araştırma Enstitüleri, Yenilikçilik, Doğa Bilimleri ve Mühendislik Araştırma Konseyi ve Concordia Üniversitesi Kanada Vakfı tarafından finanse edilmektedir.