Diseksiyonu Saccharomyces cerevisiae Asci

Summary

Maya hücreleri Mikromanipülasyon diploid zigot seçmek için mayotik genetik analiz için gerekli. Bu micromanipulations diseksiyon mikroskobu microneedle kullanılarak yürütülmektedir. Microneedle, hücreleri taşınmaya kullanılır ve otomasyon çeşitli derecelerde mevcuttur mikromanipülatör tarafından kontrol edilir.

Abstract

Maya, son derece uysal bir model sistem birçok farklı hücresel süreçleri incelemek için kullanılır. Ortak bir laboratuvar suşu<em> Saccharomyces cerevisiae</em> Haploit ya da diploid devlet var. Iki haploids allel birleştirmek için yeteneği ve genom değişiklikler tanıtmak için yeteneği asci üretim ve diseksiyon gerektirir. Asci haploid hücrelerin üretimi diploid gerginlik üretmek için uyumlu çiftleşme tipleri ile iki maya haploid suşları çiftleşme ile başlar. Bu katı besiyeri veya sıvı ya yollarından bir dizi yapılabilir. Haploid suşlarının ya göre seçici büyüme teşvik orta diploitler seçmek için avantajlıdır. Asci, dört haploit kızı hücreleri diploid mayotik üreme kaynaklanan bir paket oluşturmak için besin fakir orta biçime girdiklerinde diploitler sonra izin verilir. Vejetatif hücreleri ve asci karışımı daha sonra asci ascospores çevreleyen zar kese sindirmek için enzim zymolyase ile tedavi edilir. Diseksiyon mikroskobu altında, tek bir bireyin asci pick up ve dört ascopores ayrı ve yerlerini değiştirebilirsiniz bir microneedle mikromanipülasyon kullanma. Disseke asci birkaç gün büyüdü ve uygun seçici ortama çoğaltma kaplama faiz belirteçler veya allel için test edilmektedir.

Protocol

Diploid suşları İnşaatı Çiftleşme tarafından diploitler üretimi için protokol Ilk suşları YPD, ya da seçici besiyeri gerekirse, tek koloniler halinde dışarı vurdu olmalıdır. Iki haploid suşları, tam tersi çiftleşme tipi (yani Mata ve MATα) olmalıdır. , Kısır bir aşılama döngü kullanarak iki haploid suşların biri bir koloni küçük bir bölümünü seçin. Yeni bir YPD plaka çizgi döngü bir kez plaka üzerinde düz bir çizgi üzerinde. Plakanın alt taraf?…

Discussion

Maya diseksiyonu istenilen işaretleri ile yeni türler seçmek için yararlı bir araçtır. Dört ascospores teorik büyüme modelini belirlerken vejetatif hücre genotipi bakmak önemlidir. Bir plazmid varsa bu ascospore (ler) plazmid almak ve manipüle olan suşları ile ilgili tahmin ve sonuçları etkileyecek etkileyecek gibi, tek, düşük veya yüksek kopya ise, bilmeniz gerekir.

Bazı suşlarının diğerlerine göre daha kısa bir süre içinde birçok ascospores üreten iyi biçim…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Singer MSM System 200	Microscope	Singer Instruments	NA
D-sorbitol	Reagent	BioShop	SOR508
Tris	Reagent	BioShop	TRS001
Zymolyase 100T	Reagent	Seikagaku Corporation	120493
Yeast extract	Reagent	BioShop	YEX401
Peptone	Reagent	BioShop	PEP 403
D-glucose	Reagent	BioShop	GLU501
Yeast nitrogen base	Reagent	BioShop	YNB406
Bio-tryptone	Reagent	BioShop	TRP402
Sodium chloride	Reagent	BioShop	SOD002
Potassium acetate	Reagent	BioShop	POA 301
Agar	Reagent	BioShop	AGR003
Adenine sulfate	Reagent	BioShop	ADS201
L-uracil	Reagent	BioShop	URA 241
L-tryptophan	Reagent	BioShop	TRP 100
L-histidine	Reagent	BioShop	HIS 200
L-arginine	Reagent	Amresco	0877-100G
L-methionine	Reagent	BioShop	MET 222
L-tyrosine	Reagent	BioShop	TYR 333
L-isoleucine	Reagent	BioShop	ISO 910
L-valine	Reagent	BioShop	VAL 201
L-lysine	Reagent	BioShop	LYS 101
L-phenylalanine	Reagent	BioShop	PHA 302
L-glutamic acid	Reagent	BioShop	GLU 202
L-threonine	Reagent	BioShop	THR002
L-leucine	Reagent	BioShop	LEU 222