Summary

ב אלקטרופולציה הרחם של גנום רב-תכליתי שילוב צבע (MAGIC) סמנים כדי להתאים אישית אסטרוציטים עכבר קליפת המוח

Published: May 21, 2020
doi:

Summary

אסטרוציטים לפרוש את קליפת המוח באופן אחיד, מה שהופך את הניתוח של המורפולוגיה המורכבת שלהם מאתגר ברמה התאית. הפרוטוקול המסופק כאן משתמש בתיוג צבעוני המבוסס על אלקטרופורציה ברחם כדי לבודד אסטרוציטים קליפתיים ולנתח את נפחם ומורפולוגיה שלהם עם צינור ניתוח תמונה ידידותי למשתמש.

Abstract

אסטרוציטים פרוטופלזמיים (PrA) הממוקמים בקליפת המוח של העכבר הם צמודים זה בזה, ויוצרים מטריצה תלת מימדית רציפה לכאורה בשלבים למבוגרים. עד כה, שום אסטרטגיה חיסונית לא יכולה לבודד אותם ולחלק את המורפולוגיה שלהם בבעלי חיים בוגרים ובמהלך הקורטיקורטיקוס. מקורו של PrA קליפת המוח מאבות הממוקמים בפאליום הגבי וניתן לכוון אותו בקלות לשימוש באלקטרופורציה של וקטורים אינטגרטיביים ברחם. פרוטוקול מוצג כאן כדי לתייג תאים אלה עם צבע רב תכליתי שילוב הגנום (MAGIC) סמנים אסטרטגיה, המסתמך על piggyBac / Tol2 טרנספוזיציה ו Cre /lox recombination כדי לבטא stochastically חלבונים פלואורסצנטיים נפרדים (כחול, ציאן, צהוב, ואדום) ממוען לתאים תת תאיים ספציפיים. אסטרטגיית מיפוי גורל צבעונית זו מאפשרת לסמן באתרו אבות קליפתיים סמוכים עם שילובים של סמני צבע לפני תחילת הגליוגנזה ולעקוב אחר צאצאיהם, כולל אסטרוציטים, החל בשלבים עובריים ועד בוגרים ברמת התא הבודד. תיוג דליל למחצה שהושג על ידי התאמת הריכוז של וקטורים אלקטרופולציה וניגודי צבע המסופקים על ידי סמני צבע משולבי גנום רב-תכליתיים (סמני MAGIC או MM) מאפשרים להתאים אישית אסטרוציטים ולבודד את הטריטוריה והמורפולוגיה המורכבת שלהם למרות הסידור האנטומי הצפוף שלהם. להלן זרימת עבודה ניסיונית מקיפה הכוללת את פרטי הליך האלקטרופורציה, רכישת ערימות תמונה רב-ערוציות על ידי מיקרוסקופיה קונפוקלית ופילוח תלת מימדי בסיוע מחשב שיאפשר לניסוי להעריך נפח PrA ומורפולוגיה בודדים. לסיכום, אלקטרופולציה של סמני MAGIC מספקת שיטה נוחה לתייג בנפרד אסטרוציטים רבים ולקבל גישה לתכונות האנטומיות שלהם בשלבים התפתחותיים שונים. טכניקה זו תהיה שימושית כדי לנתח תכונות מורפולוגיות אסטרוציטים קליפת המוח במודלים שונים של העכבר מבלי להזדקק צלבים מורכבים עם קווי כתב מהונדסים.

Introduction

אסטרוציטים לשחק פונקציות חיוניות רבות בהתפתחות המוח ופיזיולוגיה1. לצד תפקידם במחסום הדם – מוח שבו הם מווסתים את ספיגת החומרים המזינים ואת זרימת הדם, הם תורמים באופן פעיל להיווצרות ותפקוד הסינפסה תוך הפקת נוירומודולטורים שיכולים לשנות פעילות עצבית והתנהגות2. יתר על כן, תפקוד לקוי של אסטרוציטים תורם למגוון הפרעות נוירולוגיות3. אסטרוציטים הממוקמים בקליפת המוח מציגים מורפולוגיה משוכללת המאפשרת מגע נרחב עם תהליכים עצביים. מגעים אלה, חיוני לתפקוד מעגלי, שולטים גם במורפוגנזה אסטרוציטים ובסינפטוגנזה באמצעות חלבוני הידבקות בתאים4. מדעני מוח זקוקים לכלים נוחים וחזקים כדי לחקור התפתחות אסטרוציטים ומורפוגנזה במודלים הנוירולוגיים שלהם של עניין. עם זאת, בשל ההחמרה הקרובה של אסטרוציטים לשכניהם וריצוף תלת מימדי אחיד שלהם, זה מאתגר לבודד אסטרוציטים קליפת המוח ולהעריך באופן מקיף את המורפולוגיה שלהם באמצעות immunomarkers.

נכון לעכשיו, שתי אסטרטגיות הנדסה גנטית עיקריות מאפשרות תיוג ואינדיבידואליזציה של אסטרוציטים קליפת המוח במקום: הפעלת כתב דליל בקווי עכבר מהונדסים או טרנסגנזה סומטית באמצעות אלקטרופורציה של פלסמידים כתב. האסטרטגיה הראשונה מסתמכת על הרבייה של קו עכבר כתב floxed עם עכברים המבטאים צורה בלתי ניתנת להסבר של Recombinase Cre המופעל במיוחד אסטרוציטים על משלוח טמוקסיפן (למשל, Aldh1l1-CreERT25). מספר חסרונות קשורים לאסטרטגיה זו. ראשית, הרבייה של עכברים מהונדסים דורשת מספר רב של בעלי חיים ובדרך כלל יש צורך במבחנים מרובים כדי לקבוע את המינון הנכון של טמוקסיפן כדי לספק תיוג דליל כראוי של אסטרוציטים קליפת המוח. ניתוח פנוטיפים אסטרוציטים קליפת המוח במודל עכבר גנטי של עניין ידרוש אפילו יותר רבייה וצריכת עכבר. יתר על כן, בהזרקת טמוקסיפן הרחם ידוע להפריע parturition, מה שהופך אסטרטגיה זו קשה ליישם את המחקר של השלבים המוקדמים ביותר של התפתחות אסטרוציטים. In vivo DNA electroporation היא אסטרטגיה חלופית ללא טמוקסיפן המסתמכת על מספר מינימלי של בעליחיים 6. גישה זו, המבוצעת בשלבים עובריים או לאחר לידה, מורכבת מהזרקת פלסמידים עיתונאיים בחדרים הצדדיים של מכרסמים ואחריו פולסים חשמליים היוצרים נקבוביות בקרום התא, ומכאן מאפשרים לדנ”א להיכנס לתאי אב המצפים את החדר. לאחר מכן, transgenes הכתב נישא על ידי פלסמידים electroporated מעובדים על ידי מכונות התא ממוקד והביע7. שתי שיטות electroporation תוארו בעבר לתייג אסטרוציטים קליפת המוח של העכבר: 1) תיוג אסטרוציטים לאחר הלידה על ידי Electroporation (PALE), המסתמך על electroporation של 1-2 פלסמידים כתב אפיזומלי צבע יחיד בשלבים מוקדמים לאחר הלידה4; 2) האסטרטגיה StarTrack מבוסס על electroporation הרחם (IUE) של פלסמידים כתב אינטגרטיבי צבע יחיד מרובים8,9,10. למרות שתי טכניקות אלה ביעילות תווית PrA בקליפת המוח, הם גם מציגים כמה מגבלות. בגרסה הראשונית שלהם, שתי השיטות מסתמכות על חלבון חומצי פרפור גליה (GFAP) מקדם לנהוג ביטוי אסטרוציטים, אשר עשוי להטות את התיוג לכיוון גליה רדיאלי, כמו גם אסטרוציטים פייאל תגובתי המבטאים GFAP חזק יותר מאשר מנוחה רגילה PrA11,12. לגבי PALE, חסרונות אחרים הם השלב המאוחר של electroporation, אשר מונע תיוג של פרה בגיל הרך (או אלה שמקורם אבות delaminating מוקדם) וניתוח של שלבים מוקדמים של התפתחות אסטרוליה, ושימוש וקטורים אפיזומליים שהופכים מדוללים באמצעות חטיבות רצופות במהלך התפשטות מסיבית כי פרה לעבור במהלך השבוע הראשון לאחר הלידה13,14. בניגוד ל- PALE, StarTrack מבוסס על אלקטרופוציה עוברית של פלסמידים עיתונאיים אינטגרטיביים המאפשרים מעקב אחר תרומתם של אבות עוברים ואחרי לידה ל- PrA. תוכנית StarTrack מעודכנת המסתמכת על מקדם Ubiquitin C (UbC-StarTrack) משיגה ביטוי רחב יותר של כתבים פלואורסצנטיים הן בירידה העצבית והן בירידה הגלית (כולל אסטרוציטים) של אבות עצביים15,16,17. עם זאת, בגרסתה הנוכחית, יישום גישה זו הוא מורכב, שכן הוא מסתמך על תערובת שווה של 12 פלסמידים נפרדים המבטאים שישה חלבונים פלואורסצנטיים (FP) עם עירור חלקי וחפיפת ספקטרום פליטה.

מוצג כאן הוא פשוט בשיטת תיוג multicolor מבוססי אלקטרופורציה הרחם באמצעות מבני כתב אינטגרטיבי מונע על ידי מקדם חזק ופעיל באופן נרחב כדי לבודד אסטרוציטים קליפת המוח14. בנוסף, צינור ניתוח תמונה קל באמצעות מורשה (למשל, Imaris) וגישה פתוחה (Vaa3D18,19,20) תוכנת ניתוח תמונה מסופקת לפלח נפח טריטוריאלי אסטרוציטים ו arborization, בהתאמה. בהשוואה לשיטות שתוארו לעיל, אסטרטגיה זו מסתמכת אך ורק על 1-2 טרנסגנים אינטגרטיביים צבעוניים מרובי סמני צבע משולבי גנום (סמני MAGIC או MM21) המופנים לתא התא הגרעיני הציטופלסמי (אופציונלי) שביטויו מונע על ידי מקדם CAG סינתטי המורכב משפר ציטומגלווירוס, מקדם העוף β-actin, ואתר מקבל β-גלוביןsplice 22. זה מאפשר תיוג ומעקב של אסטרוציטים קליפת המוח, מעובר לשלבים מאוחרים לאחר הלידה, ללא תלות ביטוי GFAP14,23. כל אחד מהטרנג’ינים האלה נושא את ארבעת ה-FP השונים הבאים: eBFP, mTurquoise2/mCerulean, EYFP ו- tdTomato/mCherry, המציגים חפיפה ספקטרלית מינימלית שניתן לעקוף בקלות עם 1) רכישת ערוצים רציפים; 2) כוח עירור ממוטב ורווח איסוף; ו-3) מסננים דיכריים ספציפיים לאיסוף חלונות פליטת FP צרים. אסטרטגיית MM משתמשת רקומבינציה Cre /lox עם recombinase Cre עצמית excisable (seCre) כדי להניע ביטוי סטוכסטי של FP באוכלוסייה הסלולר. עותק יחיד של MM transgene מבטא את ה-FP באופן בלעדי הדדית, בעוד שטרנסג’ינים מרובים יוצרים שילובי FP ויוצרים עשרות גוונים שונים. אינטגרציה גנומית של הטרנסגנס מונעת על ידי מערכת טרנספוזיציה PB (PB) או Tol224,25,26. לכן, באמצעות electroporation הרחם, ערכת הכלים MM ואת “פסיפס” צבעוני שהיא מייצרת לאפשר סימון בו זמנית של אבות קליפת המוח הסמוכים מרובים ואת המעקב אחר הירידה הגלית שלהם, כולל אסטרוציטים קליפת המוח, על פני תקופות ארוכות. ניגודי צבעים הנובעים מהביטוי של חלוקה ברורה של FP היתר מתאר של קווי המתאר של PrA ולאחר מכן לחלץ מידע מפתח על נפח טריטוריאלי שלהם (באמצעות IMARIS) ומורפולוגיה מורכבת (באמצעות Vaa3D). האסטרטגיה הצבעונית המוצגת בפירוט כאן היא שיטה נוחה וחזקה המעניקה גישה מהירה וקלה למשטח האסטרוציטים הקליפתיים והמורפולוגיה בעכברים מסוג בר בשלבים התפתחותיים שונים, וקל להסתגלה לחקירת תכונות אנטומיות אסטרוציטים במודלים של עכברים של מחלות נוירולוגיות מבלי להשתמש בקווי כתב מהונדסים.

Protocol

כל ההליכים בבעלי חיים המתוארים כאן בוצעו בהתאם להנחיות המוסדיות. פרוטוקולים של בעלי חיים אושרו על ידי המועצה האתית לניסויים בבעלי חיים של צ’ארלס דרווין (CEEACD / N ° 5). 1. הכנת פלסמידים נטולי אנדוטוקסין לסמני MAGIC באלקטרופורציה של הרחם טרנספורמציה חיידקית על הקרח, להפשיר…

Representative Results

אלקטרופולציה של סמני MAGIC באבות קליפת המוח העוברית מאפשרת תיוג של אסטרוציטים מהשלבים המוקדמים עד המאוחרים של התפתחות קליפת המוח (איור 1). אסטרוציטים אלה נמצאו בכל שכבות קליפת המוח בשלבים שונים לאחר הלידה (P4, P7, P21) כפי שהם התפזרו נרחב לתוך קליפת המוח כולה. הם הוערכו באמצעות תמו…

Discussion

באלקטרופורציה של הרחם (IUE) של סמני MAGIC באבות קליפת המוח (איור 1) אפשר תיוג של אסטרוציטים לאורך קליפת המוח לאחר הלידה בשלבים שונים לאחר הלידה (P4-P7-P21, איור 2). מעניין, השלב של IUE אינו קריטי, כמו electroporation שבוצעו מ E13.5 כדי E15.5 מניב דפוסי תיוג דומים לגבי אסטרוציטים קליפת…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

אנו מודים ל- S. Fouquet ולמתקני ההדמיה וליבת בעלי החיים של מכון דה לה ויז’ן ומכון דס מדעי המוח דה מונפלייה (MRI ו- RAM) על סיוע טכני. עבודה זו נתמכה על ידי מלגות מ Région Ile-de-France ו Fondation ARC לשפוך la Recherche sur le Cancer כדי S.C, ומאוניברסיטת פריז-Saclay (יוזמות דוקטורטים Interdisciplinaires) ללוס אנג’לס, על ידי מימון ממועצת המחקר האירופית (ERC-SG 336331, PI J. Valette) כדי E.H., על ידי סוכנות לאומית דה לה Recherche תחת חוזים ANR-10-LABX-65 (LabEx LifeSenses), ANR-11-EQPX-0029 (Equipex Morphoscope2), ANR-10-INBS-04 (צרפת BioImaging) על ידי פונדציה לשפוך la Recherche Médicale (Ref. DBI20141231328), על ידי מועצת המחקר האירופית (ERC-CoG 649117, PI J. Livet) ועל ידי תוכנית ATIP-Avenir (PI K. Loulier).

Materials

1.1 Bacteria transformation
Ampicillin Euromedex EU0400-C
DH5 alpha competent cells Fisher Scientitic 11563117
Ice box Dutscher 139959
Kanamycin Sigma 60615
LB Agar Sigma L2897
SOC medium Fisher Scientitic 11563117
Sterile petri dish- 10 cm Thermo Fisher 150350
Water bath VWR 462-0556H
1.2 Plasmid culture
14 ml culture tube Dutscher 187262
Glass erlenmeyer- 2L Fisher Scientitic 11383454
LB medium Sigma L3522
1.3 Plasmid DNA preparation
NucleoBond Xtra Maxi Plus EF Macherey-Nagel 740426.10
2.1 Preparation of the solutions
26 G x 1/2 needle Terumo 8AN2613R1
30 G x 1/2 needle Terumo 8AN3013R1
Fast Green Sigma Aldrich F7272
NaCl VWR 27810.295
Single-use polypropylene syringe, 1 mL Dutscher 50002
2.2 Preparation of the surgery material
Adson Forceps – DeBakey Pattern- 12.5 cm FST 11617-12
Arched tip Forceps- 10 cm FST 11071-10
Glass bead sterilizer Steri 250 Sigma Z378569
Glass micropipette 1 mm diameter FHC 10-10-L
Graefe Forceps – Titanium 1 mm Tips Slight Curve- 10 cm FST 11651-10
Graefe Forceps – Titanium 1 mm Tips Straight- 10 cm FST 11650-10
Iris Scissors – Delicate Straight- 9 cm FST 14060-09
Laboratory tape Fisher Scientitic 11730454
Microinjector INJECT+MATIC No catalog number
Olsen-Hegar Needle Holder – 12 cm FST 12002-12
Optical fiber VWR 631-1806
Plastic-coated white paper Distrimed 700103
Signagel electrode gel Free-Med 15-60
Sterile Petri dish- 35 mm Dutscher 056714
Sterilizer, glass dry bead, Steri 250 Sigma Z378569
2.3 Preparation of the pregnant female mouse
Alcohol pad Alcomed 1731000
Buprecare Axience 0.3 mg/ml
Compress tRAFFIN 70189
Ketamine Merial Imalgene 1000
Ocular gel tvm lab Ocry-gel
RjOrl:SWISS mice Janvier Labs
Vetadine, 10% solution Vetoquinol 4337400113B
Warming pad Harvard Apparatus 72-0493
Xylazine Bayer Rompun 2%
3.2 Electroporation
Absorbable suture Size 4-0 45 cm Suture 1-Needle 19 mm Length 3/8 Circle Reverse Novosyn C0068220
Electroporateur Sonidel Sonidel NEPA 21
Sterile transfer pipets (individually wrapped) Dutscher 043202S
Tweezers with 3 mm platinium disk electrodes Sonidel CUY650P3
4.1 Tissue harvesting and sectioning
24-well plate Falcon 353047
Agarose Lonza 50004
Antigenfix Microm Microtech U/P0014
Coverslip Dutscher 100266
Dolethal Vetoquinol DOL202
DPBS (10X), no calcium, no magnesium Fisher Scientific 11540486
Nail polish EMS 72180
Slide Dutscher 100001
Vectashield Vectorlabs H-1000
Vibratome Leica VT1000S
5. Multichannel confocal imaging
20X oil NA 0.85 Olympus
Confocal Laser Scanning Microscope Carl Zeiss LSM880
Confocal Laser Scanning Microscope Olympus FV1000
Plan Apochromat 20x/0.8 M27 Carl Zeiss
6. Astrocyte territorial volume segmentation
IMARIS 8.3 and later versions Bitplane
7. Astrocyte arborization tracing
3D Visualization-Assisted Analysis software suite (Vaa3D) HHMI – Janelia Research Campus /Allen Institute for Brain Science

References

  1. Clarke, L. E., Barres, B. A. Emerging roles of astrocytes in neural circuit development. Nature Reviews Neuroscience. 14 (5), 311-321 (2013).
  2. Ma, Z., Stork, T., Bergles, D. E., Freeman, M. R. Neuromodulators signal through astrocytes to alter neural circuit activity and behaviour. Nature. 539 (7629), 428-432 (2016).
  3. Blanco-Suárez, E., Caldwell, A. L. M., Allen, N. J. Role of astrocyte-synapse interactions in CNS disorders: Astrocyte-synapse disease. The Journal of Physiology. 595 (6), 1903-1916 (2017).
  4. Stogsdill, J. A., et al. Astrocytic neuroligins control astrocyte morphogenesis and synaptogenesis. Nature. 551 (7679), 192-197 (2017).
  5. Srinivasan, R., et al. New Transgenic Mouse Lines for Selectively Targeting Astrocytes and Studying Calcium Signals in Astrocyte Processes in Situ and In Vivo. Neuron. 92 (6), 1181-1195 (2016).
  6. Tabata, H., Nakajima, K. Efficient in utero gene transfer system to the developing mouse brain using electroporation: visualization of neuronal migration in the developing cortex. Neuroscience. 103 (4), 865-872 (2001).
  7. Shimogori, T., Ogawa, M. Gene application with in utero electroporation in mouse embryonic brain. Development, Growth & Differentiation. 50 (6), 499-506 (2008).
  8. García-Marqués, J., López-Mascaraque, L. Clonal Identity Determines Astrocyte Cortical Heterogeneity. Cerebral Cortex. 23 (6), 1463-1472 (2013).
  9. Martín-López, E., García-Marques, J., Núñez-Llaves, R., López-Mascaraque, L. Clonal Astrocytic Response to Cortical Injury. PLoS ONE. 8 (9), 74039 (2013).
  10. Gutiérrez, Y., et al. Sibling astrocytes share preferential coupling via gap junctions. Glia. 67 (10), 1852-1858 (2019).
  11. Lee, Y., Messing, A., Su, M., Brenner, M. GFAP promoter elements required for region-specific and astrocyte-specific expression. Glia. 56 (5), 481-493 (2008).
  12. Yoon, H., Walters, G., Paulsen, A. R., Scarisbrick, I. A. Astrocyte heterogeneity across the brain and spinal cord occurs developmentally, in adulthood and in response to demyelination. PloS One. 12 (7), 0180697 (2017).
  13. Ge, W. P., Miyawaki, A., Gage, F. H., Jan, Y. N., Jan, L. Y. Local generation of glia is a major astrocyte source in postnatal cortex. Nature. 484 (7394), 376-380 (2012).
  14. Clavreul, S., et al. Cortical astrocytes develop in a plastic manner at both clonal and cellular levels. Nature Communications. 10 (1), 4884 (2019).
  15. Figueres-Oñate, M., García-Marqués, J., López-Mascaraque, L. UbC-StarTrack, a clonal method to target the entire progeny of individual progenitors. Scientific Reports. 6 (1), 33896 (2016).
  16. Figueres-Oñate, M., García-Marqués, J., Pedraza, M., De Carlos, J. A., López-Mascaraque, L. Spatiotemporal analyses of neural lineages after embryonic and postnatal progenitor targeting combining different reporters. Frontiers in Neuroscience. 9, 87 (2015).
  17. Figueres-Oñate, M., Sánchez-Villalón, M., Sánchez-González, R., López-Mascaraque, L. Lineage Tracing and Cell Potential of Postnatal Single Progenitor Cells In Vivo. Stem Cell Reports. 13 (4), 700-712 (2019).
  18. Peng, H., Ruan, Z., Long, F., Simpson, J. H., Myers, E. W. V3D enables real-time 3D visualization and quantitative analysis of large-scale biological image data sets. Nature Biotechnology. 28 (4), 348-353 (2010).
  19. Peng, H., Bria, A., Zhou, Z., Iannello, G., Long, F. Extensible visualization and analysis for multidimensional images using Vaa3D. Nature Protocols. 9 (1), 193-208 (2014).
  20. Peng, H., et al. Virtual finger boosts three-dimensional imaging and microsurgery as well as terabyte volume image visualization and analysis. Nature Communications. 5 (1), 4342 (2014).
  21. Loulier, K., et al. Multiplex Cell and Lineage Tracking with Combinatorial Labels. Neuron. 81 (3), 505-520 (2014).
  22. Niwa, H., Yamamura, K., Miyazaki, J. Efficient selection for high-expression transfectants with a novel eukaryotic vector. Gene. 108 (2), 193-199 (1991).
  23. Abdeladim, L., et al. Multicolor multiscale brain imaging with chromatic multiphoton serial microscopy. Nature Communications. 10 (1), 1662 (2019).
  24. Chen, F., LoTurco, J. A method for stable transgenesis of radial glia lineage in rat neocortex by piggyBac mediated transposition. Journal of Neuroscience Methods. 207 (2), 172-180 (2012).
  25. Siddiqi, F., et al. Fate Mapping by PiggyBac Transposase Reveals That Neocortical GLAST+ Progenitors Generate More Astrocytes Than Nestin+ Progenitors in Rat Neocortex. Cerebral Cortex. 24 (2), 508-520 (2014).
  26. Yoshida, A., et al. Simultaneous expression of different transgenes in neurons and glia by combining in utero electroporation with the Tol2 transposon-mediated gene transfer system. Genes to Cells. 15 (5), 501-502 (2010).
  27. LoTurco, J., Manent, J. B., Sidiqi, F. New and Improved Tools for In Utero Electroporation Studies of Developing Cerebral Cortex. Cerebral Cortex. 19, 120-125 (2009).
  28. Pacary, E., et al. Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using in utero Electroporation. Journal of Visualized Experiments. (65), e4163 (2012).
check_url/61110?article_type=t

Play Video

Cite This Article
Dumas, L., Clavreul, S., Durand, J., Hernandez-Garzon, E., Abdeladim, L., Barry-Martinet, R., Caballero-Megido, A., Beaurepaire, E., Bonvento, G., Livet, J., Loulier, K. In Utero Electroporation of Multiaddressable Genome-Integrating Color (MAGIC) Markers to Individualize Cortical Mouse Astrocytes. J. Vis. Exp. (159), e61110, doi:10.3791/61110 (2020).

View Video