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Medicine

प्राथमिक Sjögren सिंड्रोम रोगियों में मौखिक कैंडिडा संक्रमण की परीक्षा

Published: March 1, 2024 doi: 10.3791/66430
Automatic Translation
1,2,3, 4, 1, 5,6,7, 1, 8,9, 8,9, 1
1Department of Stomatology, Beijing Tiantan Hospital, Capital Medical University, 2Beijing Laboratory of Oral Health, Capital Medical University, 3Department of Biochemistry and Molecular Biology, School of Basic Medicine, Capital Medical University, 4Central Laboratory, National Engineering Laboratory for Digital and Material Technology of Stomatology, Beijing Key Laboratory of Digital Stomatology, Peking University School and Hospital of Stomatology, 5Clinical Diagnosis Laboratory of Beijing Tiantan Hospital, Capital Medical University, 6Key Laboratory for Quality Control of In Vitro Diagnostics, NMPA, 7Beijing Engineering Research Center of Immunological Reagents Clinical Research, 8School of Chinese Medicine, The University of Hong Kong, 9Department of Rheumatology and Clinical Immunology, Beijing Tiantan Hospital, Capital Medical University

Summary

यहां, हम प्राथमिक Sjögren सिंड्रोम वाले रोगियों में मौखिक कैंडिडा संक्रमण की जांच के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं, जिसका उपयोग समय पर उपचार के लिए किया जा सकता है और उसके बाद, संबंधित जटिलताओं से बचा जा सकता है।

Abstract

प्राथमिक Sjögren सिंड्रोम (pSS) एक ऑटोइम्यून बीमारी है जो शुष्क मुंह, सूखी आंखें और अन्य व्यवस्थित लक्षणों जैसे लक्षणों की विशेषता है। पीएसएस रोगियों द्वारा अनुभव किए गए हाइपोसैलिवेशन के कारण, मौखिक डिस्बैक्टीरियोसिस अक्सर होता है। पीएसएस की एक आम जटिलता मौखिक कैंडिडा संक्रमण है। इस लेख में, लेखक व्यवस्थित तरीकों का वर्णन करते हैं जो मौखिक कैंडिडा संक्रमण का प्रभावी ढंग से निदान कर सकते हैं और लार, मौखिक श्लेष्म स्वैब, या पीएसएस रोगियों से माउथवॉश का उपयोग करके कैंडिडा उपभेदों की पहचान कर सकते हैं। सबौरौद के डेक्सट्रोज अगर (एसडीए), हाइफल गठन परख, पोटेशियम हाइड्रॉक्साइड (केओएच) स्मीयर परीक्षण, और कैल्कोफ्लोर व्हाइट (सीएफडब्ल्यू) धुंधला परख का उपयोग मौखिक कैंडिडा संक्रमण के निदान के लिए किया जाता है। एक Candida निदान अगर Candida उपभेदों की पहचान के लिए प्रयोग किया जाता है. अंत में, उचित एंटिफंगल दवा उपचार निर्धारित करने के लिए एंटिफंगल संवेदनशीलता परीक्षण का उपयोग किया जाता है। यह मानकीकृत विधि पीएसएस से संबंधित मौखिक कैंडिडा संक्रमणों के निदान, उपचार और भविष्य के अनुसंधान को बढ़ा सकती है। प्रारंभिक निदान, इस पद्धति का उपयोग करके, उचित उपचार प्राप्त करने में देरी के कारण उत्पन्न होने वाली किसी भी जटिलता को भी रोक सकता है।

Introduction

कैंडिडिआसिस कैंडिडा एसपीपी के कारण होता है, जो अवसरवादी रोगजनक हैं। आम उपभेदों में कैंडिडा अल्बिकन्स, कैंडिडा क्रूसी, कैंडिडा ग्लबराटा, कैंडिडा पैराप्सिलोसिस और कैंडिडा डबलिनेसिस1 शामिल हैं। कैंडिडा एसपीपी के कारण होने वाले अवसरवादी संक्रमणों में सतही कैंडिडा संक्रमण और आक्रामक कैंडिडिआसिस शामिल हैं। आक्रामक कैंडिडिआसिस मुख्य रूप से इम्यूनोकॉम्प्रोमाइज्ड व्यक्तियों में होता है; उदाहरण के लिए, अधिग्रहित इम्यूनोडेफिशिएंसी सिंड्रोम (एड्स) वाले रोगियों में, आक्रामक कैंडिडिआसिस जीवन की गुणवत्ता या यहां तक कि जीवन काल2 को काफी खतरा हो सकता है। सतही कैंडिडा संक्रमण, जैसे कि श्लेष्म कैंडिडिआसिस, रोगियों में अधिक आम है3.

मौखिक कैंडिडिआसिस, एक सतही कैंडिडा संक्रमण, सबसे आम मानव फंगल संक्रमण है। कैंडिडा अल्बिकन्स मुंह का एक सामान्य कॉमेंसल है; कैंडिडा एसपीपी की कैरिज दर सामान्य आबादी में बिना किसी लक्षण के 20% से 75% तक बताई गईहै 4. कैंडिडा के अतिवृद्धि से रोगियों में स्थानीय असुविधा हो सकती है, जैसे सनसनी का बदला हुआ स्वाद, मुंह में जलन, खराब पोषण के कारण डिस्पैगिया, वसूली में देरी, और लंबे समय तक अस्पताल में रहना। लंबे समय तक मौखिक कैंडिडिआसिस गंभीर आक्रामक कैंडिडिआसिस का कारण बन सकता है, जिसके परिणामस्वरूप महत्वपूर्ण रुग्णता और मृत्यु दर5. ओरल कैंडिडिआसिस भी मौखिक कैंसर के खतरे को बढ़ा सकता है5. बिगड़ा हुआ लार ग्रंथि समारोह मौखिक कैंडिडिआसिस6 के लिए जोखिम कारकों में से एक है। संक्रमण की शुरुआत उपकला कोशिका की दीवारों के लिए कैंडिडा का आसंजन है। इसके बाद कैंडिडा का प्रसार और फिलामेंटेशन और बायोफिल्म7 का गठन और परिपक्वता होती है। बायोफिल्म को मिटाना बेहद मुश्किल है और पारंपरिक एंटिफंगल उपचार के लिए प्रतिरोधी हैं, जिससे नैदानिक उपचार बायोफिल्म से जुड़े मौखिक कैंडिडा संक्रमण के लिए एक चुनौती बन जाता है।

प्राथमिक Sjögren सिंड्रोम (pSS) एक ऑटोइम्यून बीमारी है जो शुष्क मुंह, शुष्क आंखों और अन्य व्यवस्थित लक्षणों की विशेषता है8. शुष्क मुंह पीएसएस का सबसे लगातार लक्षण है। लार में महत्वपूर्ण शारीरिक एंटिफंगल कार्य होते हैं। एक ओर, यह मुंह को पतला और परिमार्जन कर सकता है और उसके बाद म्यूकोसा से जीवों को हटा सकता है। दूसरी ओर, लार में रोगाणुरोधी प्रोटीन होते हैं, जैसे लैक्टोफेरिन, सियालोपरॉक्सीडेज, लाइसोजाइम, हिस्टिडीन युक्त पॉलीपेप्टाइड्स, और विशिष्ट एंटी-कैंडिडल एंटीबॉडी, जो मौखिक श्लेष्म के साथ बातचीत कर सकते हैं और कैंडिडा6 के अतिवृद्धि को रोक सकते हैं। कम लार प्रवाह पीएसएस रोगियों को मौखिक कैंडिडिआसिस के लिए प्रेरित कर सकता है। 61 पीएसएस रोगियों में किए गए एक अवलोकन पार-अनुभागीय अध्ययन में पाया गया कि पीएसएस रोगियों के 13.1% ने कैंडिडिआसिस और कॉलोनी बनाने वाली इकाई (सीएफयू)/ कैंडिडा अल्बिकन्स के एमएल के मौखिक संकेत प्रस्तुत किए, जो कि अस्थिर पूरे लार (यूडब्ल्यूएस) के स्तर के साथ महत्वपूर्ण और नकारात्मक रूप से सहसंबद्ध पाए गए और पूरे लार (एसडब्ल्यूएस)9को उत्तेजित किया।

इस पांडुलिपि में शुरू की विधियों प्रत्यक्ष धब्बा में या10 संवर्धन के बाद विशेषता रूपात्मक विशेषताओं (जैसे, hyphae और खमीर कोशिकाओं) के आधार पर मौखिक Candida संक्रमण की पहचान कर सकते हैं. एक कैंडिडा निदान अगर का उपयोग कर कैंडिडा के तनाव की पहचान विभिन्न आकारिकी के साथ विभिन्न रंगीन कालोनियों के गठन पर आधारित है, जो प्रजाति-विशिष्ट एंजाइमों11 द्वारा क्रोमोजेनिक सब्सट्रेट के दरार से उत्पन्न होता है। इस पांडुलिपि में, मौखिक कैंडिडा संक्रमण का पता लगाने के लिए व्यवस्थित तरीके पेश किए जाते हैं, जिसमें पारंपरिक मौखिक कैंडिडा संस्कृति और पोटेशियम हाइड्रॉक्साइड (KOH) स्मीयर परीक्षण और कैल्कोफ्लोर व्हाइट (CFW) धुंधला परख10 द्वारा तेजी से परीक्षा शामिल है। इसके अतिरिक्त, एंटिफंगल संवेदनशीलता परीक्षण, जो नैदानिक मौखिक कैंडिडा संक्रमण उपचार का मार्गदर्शन कर सकता है, पेश किया गया है। वास्तविक स्थितियों में, इस पांडुलिपि में सभी पेश किए गए तरीकों को करना आवश्यक नहीं है; मौखिक कैंडिडा डिटेक्शन विधि (ओं) को उद्देश्य के अनुसार चुना जा सकता है। मौखिक कैंडिडा संक्रमण की परीक्षा और पीएसएस रोगियों में कैंडिडा उपभेदों के निर्धारण से न केवल रोग के उपचार को लाभ होता है, बल्कि मौखिक कैंडिडिआसिस और प्रजातियों के प्रोफाइल के लक्षण वर्णन का आकलन करने में भी मदद मिलती है।

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Protocol

नीचे वर्णित सभी प्रक्रियाओं को बीजिंग तियानटन अस्पताल, कैपिटल मेडिकल यूनिवर्सिटी (संख्या KY2023-177-01) की नैतिक समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था, और इस अध्ययन में शामिल सभी रोगियों ने सूचित सहमति प्रदान की।

1. रोगी समावेश और बहिष्करण मानदंड

  1. समावेशन मानदंड: रोगियों को पीएसएस रोगियों के रूप में वर्गीकृत करें यदि वे 2016 अमेरिकन कॉलेज ऑफ रुमेटोलॉजी (एसीआर) / यूरोपीय लीग अगेंस्ट रूमेटिज्म (यूलर) मानदंड12 को पूरा करते हैं। विशेष रूप से, पांच मदों के भारित योग पर अंतिम वर्गीकरण मानदंड को आधार बनाएं: एंटी-एसएसए / आरओ एंटीबॉडी सकारात्मकता और फोकल लिम्फोसाइटिक सियालाडेनाइटिस ≥ 1 foci / 4 मिमी2 के फोकस स्कोर के साथ, प्रत्येक स्कोरिंग 3; ≥ 5 का एक असामान्य ओकुलर धुंधला स्कोर (या ≥ 4 का वैन बिजस्टरवेल्ड स्कोर), ≤ 5 मिमी/5 मिनट का एक शिमर का परीक्षा परिणाम और ≤ 0.1 एमएल/मिनट की एक अस्थिर लार प्रवाह दर, प्रत्येक स्कोरिंग 1. एसएस के संकेत और / या लक्षण वाले व्यक्ति जिनके पास उपरोक्त मदों के लिए ≥ 4 का कुल स्कोर है, पीएसएस के मानदंडों को पूरा करते हैं।
  2. बहिष्करण मानदंड: उन रोगियों को बाहर करें जो नमूना संग्रह में सहयोग नहीं कर सकते हैं और जो रोगी मौखिक कैंडिडा संक्रमण के लिए उपचार प्राप्त कर रहे हैं।
    नोट: यह ध्यान रखना आवश्यक है कि नीचे वर्णित विधियां माध्यमिक एसएस वाले व्यक्तियों में मौखिक कैंडिडा संक्रमण के व्यापक लक्षण वर्णन के लिए भी उपयुक्त हैं।
  3. संग्रह के दौरान संभावित संदूषण को रोकने के लिए, परिवहन, और Candida नमूनों की संस्कृति, सावधानीपूर्वक सावधानी बरतें. इसमें सावधानीपूर्वक प्रयोगात्मक तैयारी, एकल-उपयोग और बाँझ सामग्री का उपयोग, उचित लेबलिंग, नमूना ट्यूबों की सुरक्षित सील, और एक पेशेवर जैव सुरक्षा कैबिनेट में प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं का संचालन शामिल है।

2. नमूना संग्रह

  1. लार संग्रह: रोगियों को एक फ़नल के साथ ट्यूब को पकड़ने का निर्देश दें और लार को धीरे-धीरे निचले होंठ के साथ ट्यूब में प्रवाहित होने दें। संग्रह के अंत में, रोगी को मुंह में शेष सभी लार को ट्यूब में थूकने के लिए कहें। 15 मिनट के लिए लार ले लीजिए.
  2. माउथवॉश और स्वाब संग्रह: यदि रोगी के पास कोई या बहुत कम अस्थिर लार प्रवाह (0.03 एमएल / मिनट से कम) है, तो कम से कम 10x संदिग्ध मौखिक कैंडिडा संक्रमण के साथ मौखिक श्लेष्म क्षेत्र को स्वाब करें, फिर रोगी को 5 एमएल का उपयोग करने के लिए कहें फॉस्फेट-बफर खारा (पीबीएस; सामग्री की तालिकादेखें) 1 मिनट के लिए मुंह कुल्ला करने के लिए। माउथवॉश को 50 एमएल बाँझ ट्यूब में स्टोर करें और स्वाब को माउथवॉश ट्यूब में डालें।
    नोट: 0.03 एमएल / मिनट से अधिक के उत्तेजित लार प्रवाह वाले पीएसएस रोगियों के लिए, चरण 2.2 का उपयोग अभी भी मौखिक कैंडिडा संक्रमण का पता लगाने के लिए नमूने एकत्र करने के लिए किया जा सकता है।

3. नमूना प्रसंस्करण

  1. एकत्रित लार के लिए पीबीएस के 1 एमएल जोड़ें. पीबीएस के साथ माउथवॉश में पीबीएस न जोड़ें। 1 मिनट के लिए एक भंवर का उपयोग mouthwash ट्यूब कंपन.

4. कैंडिडा संस्कृति

  1. सबौरैंड के अगर (एसडीए) माध्यम बनाने के लिए, डबल आसुत जल के 1000 एमएल में 70 ग्राम एसडीए ( सामग्री की तालिकादेखें) को भंग कर दें।
  2. 15 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर एक आटोक्लेव के साथ बाँझ, एक 10 सेमी सूक्ष्मजीवविज्ञानी संस्कृति पकवान ( सामग्री की तालिकादेखें) में इस एसडीए माध्यम की प्लेट 10 एमएल और शांत हो जाओ।
  3. चरण 3 में तैयार नमूना के 200 माइक्रोन लें और इसे चरण 4.2 में एसडीए माध्यम के 10 एमएल के साथ तैयार 10 सेमी सूक्ष्मजीवविज्ञानी संस्कृति व्यंजनों पर लकीर दें।
  4. 37 डिग्री सेल्सियस पर 48 घंटे के लिए सेते हैं, और कैंडिडा कॉलोनी परिपक्व हो जाएगा। अस्थायी रूप से 4 डिग्री सेल्सियस पर Candida कालोनियों के साथ एसडीए पकवान की दुकान. एसडीए डिश पर सुसंस्कृत कैंडिडा कॉलोनियों को 2-4 सप्ताह तक संग्रहीत किया जा सकता है।

5. कैंडिडा तनाव पहचान

  1. माध्यम बनाने के लिए, कैंडिडा डायग्नोस्टिक अगर ( सामग्री की तालिकादेखें) पाउडर के 47.7 ग्राम बाहर निकालें, इसे डबल आसुत जल के 1000 एमएल में डालें, और इसे 100 डिग्री सेल्सियस तक गर्म करें।
  2. जब माध्यम थोड़ा उबल रहा है, एक 10 सेमी सूक्ष्मजीवविज्ञानी संस्कृति पकवान में प्लेट 10 एमएल और ठंडा करने के लिए अनुमति देते हैं.
  3. एसडीए माध्यम (चरण 4) के 500 माइक्रोन में कैंडिडा कॉलोनियों को भंग करें, पाइपिंग द्वारा निलंबित और अलग करें।
  4. चरण 5.2 में तैयार माध्यम पर कैंडिडा कालोनियों (चरण 5.3) के साथ नमूना के प्लेट 50 माइक्रोन। 37 डिग्री सेल्सियस पर 48 घंटे के लिए सेते हैं जब तक Candida कालोनियों परिपक्व हैं.
  5. कैंडिडा कॉलोनियों के रंग और पैटर्न के अनुसार, पीएसएस रोगियों से अधिग्रहित कैंडिडा के तनाव (ओं) का निर्धारण करें। निम्नलिखित कैंडिडा स्ट्रेन पहचान मानदंडों का उपयोग करें: पन्ना हरी कॉलोनी कैंडिडा अल्बिकन्स है, नीली-ग्रे कॉलोनी कैंडिडा ट्रॉपिकलिस है, फजी किनारों के साथ गुलाबी कॉलोनियां, और माइक्रोविली कैंडिडा क्रूसी हैं, बैंगनी लाल छोटी कॉलोनी कैंडिडा ग्लबराटा है, दूधिया सफेद कॉलोनी में कैंडिडा पैराप्सिलोसिस सहित कई उपभेद हैं।

6. कैंडिडा बायोफिल्म गठन परख

  1. यीस्ट नाइट्रोजन बेस (YNB)-50 ग्लूकोज (G) को मध्यम बनाने के लिए, 1.34 ग्राम YNB ( सामग्री की तालिकादेखें) और 1.98 g D (+)-ग्लूकोज ( सामग्री की तालिकादेखें) का वजन करें। उन्हें डबल आसुत जल के 200 एमएल में भंग.
  2. YNB-100G माध्यम बनाने के लिए, 1.34 g YNB और 3.96 g D (+)-ग्लूकोज निकालें और उन्हें 200 mL डबल डिस्टिल्ड वॉटर में घोलें।
  3. एक 0.22 माइक्रोन सिरिंज फिल्टर के साथ समाधान फ़िल्टर ( सामग्री की तालिकादेखें). फ़िल्टर्ड YNB-50G और YNB-100G माध्यम को 3 महीने के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया जा सकता है।
  4. चरण 5 में व्यंजन पर एक ही तनाव से 3 (या अधिक) कालोनियों उठाओ और उन्हें एक 96 अच्छी तरह से थाली ( सामग्री की तालिकादेखें) में YNB-50G माध्यम (6.1 और 6.3 कदम) के 200 माइक्रोन में हस्तांतरण. पकवान में देखे गए उपभेदों के लिए ऐसा करें। 200 आरपीएम पर झटकों के साथ 37 डिग्री सेल्सियस पर रात भर संस्कृति।
  5. कैंडिडा निलंबन को महाप्राण करें, पीबीएस के 1 एमएल जोड़ें, कमरे के तापमान पर 5 मिनट के लिए 1500 x ग्राम पर खमीर कोशिकाओं को अपकेंद्रित्र करें, और सतह पर तैरनेवाला त्यागें। एक ही ट्यूब में इस कदम 2x दोहराएँ.
  6. वाईएनबी-100जी माध्यम के 1 एमएल में कोशिकाओं को फिर से निलंबित करें और कोशिकाओं के विभिन्न कमजोर पड़ने (1:10, 1:100, और 1:1000) तैयार करें। ढाल सेल निलंबन के 200 माइक्रोन ले लो और सर्पिल प्लेट विधि13 द्वारा 10 सेमी एसडीए माध्यम पर यह प्लेट. चढ़ाना एक मशीन का उपयोग करके किया जाता है जो आर्किमिडीज सर्पिल के रूप में एक घूर्णन अगर प्लेट पर नमूने की एक ज्ञात मात्रा को एक घटती मात्रा में जमा करता है। 37 डिग्री सेल्सियस पर 24-48 घंटे के लिए संस्कृति।
  7. एक मानक विधि13 के आधार पर एसडीए प्लेट में सीएफयू की संख्या के अनुसार विभिन्न कमजोर पड़ने में कोशिकाओं की एकाग्रता की गणना. संक्षेप में प्रत्येक थाली पर अच्छी तरह से अलग कालोनियों गिनती. बाहरी किनारे से केंद्र की ओर एक अष्टक में कॉलोनियों की गणना करें जब तक कि कम से कम 25 कॉलोनियां न देखी जाएं। इसके अलावा, उस चाप के शेष भाग की गणना करें जहां 25वीं गणना हुई थी। कॉलोनी गिनती क्षेत्र जिस पर कॉलोनी गिनती प्राप्त किया गया था13 के लिए इसी तरल मात्रा से विभाजित करके कोशिकाओं की एकाग्रता की गणना. कोशिकाओं की एकाग्रता को 1 x 107 कोशिकाओं /
  8. YNB-100G में सेल निलंबन के 100 माइक्रोन को 96-अच्छी प्लेट में रखें और 200 आरपीएम पर मिलाते हुए 2 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट करें।
  9. सावधानी से सतह पर तैरनेवाला बाहर ले, पीबीएस के साथ 2x धो लें, और चल खमीर कोशिकाओं को दूर हो. कैंडिडा बायोफिल्म 96-वेल प्लेट के नीचे बनता है।

7. Hyphal गठन परख

नोट: केवल कैंडिडा जो हाइपहे (जैसे कैंडिडा अल्बिकन्स) बना सकता है, को हाइफल गठन के लिए प्रेरित किया जा सकता है। कैंडिडा के आगे लक्षण वर्णन के लिए चरण 8 पर जाएं जो हाइपहे नहीं बना सकता है (जैसे कैंडिडा ग्लबराटा)।

  1. चरण 6.6 में खमीर सेल निलंबन को फिर से निलंबित करें और सेल एकाग्रता को वाईएनबी-100जी माध्यम के साथ 1 x 106 कोशिकाओं/एमएल में समायोजित करें।
  2. आरपीएमआई 1640 पूर्ण विकास माध्यम तैयार करने के लिए, आरपीएमआई 1640 माध्यम के 450 एमएल में भ्रूण गोजातीय सीरम (सामग्री की तालिकादेखें) के 50 एमएल जोड़ें और आगे के प्रयोग के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।
  3. डीपीआरए सेल निलंबन के 2 माइक्रोन को आरपीएमआई 1640 के 200 माइक्रोन में पतला किया जाता है, जो हाइप और खमीर कोशिकाओं को बनाने के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर रात भर 96-अच्छी प्लेट और संस्कृति में पूर्ण विकास माध्यम को पूरा करता है।

8. KOH स्मीयर परीक्षण और CFW धुंधला परख

  1. एक सटीक ढाला पाश ( सामग्री की तालिकादेखें) का उपयोग कर चरण 3 या चरण 6 या चरण 7 से नमूनों के 1 माइक्रोन को बाहर निकालें और ग्लास स्लाइड पर 1 सेमी x 1 सेमी के क्षेत्र को धब्बा दें। कमरे के तापमान पर इसके सूखने की प्रतीक्षा करें।
  2. 10% KOH घोल बनाने के लिए, 10 ग्राम KOH पाउडर ( सामग्री की तालिकादेखें) का वजन करें और इसे 100 एमएल डबल-डिस्टिल्ड वॉटर में घोलें।
  3. एक अल्कोहल लैंप के साथ स्लाइड को थोड़ा गर्म करें जब तक कि नमूना घुल न जाए। 10% KOH (चरण 8.2) के साथ चरण 8.1 में तैयार स्लाइड दाग, और एक कवर पर्ची के साथ कवर. नमूना पारदर्शी बनाने के लिए कवर पर्ची को थोड़ा दबाएं।
  4. माइक्रोस्कोप के तहत हाइप और खमीर कोशिकाओं की कल्पना करें।
  5. सीएफडब्ल्यू की एक बूंद के साथ चरण 8.1 में तैयार दाग स्लाइड ( सामग्री की तालिकादेखें), एक कवरस्लिप के साथ कवर करें, और 1 मिनट तक प्रतीक्षा करें।
  6. 100x और 200x के आवर्धन पर एक प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप का उपयोग करके हाइपहे की कल्पना करें। सीएफडब्ल्यू 355 एनएम पर उत्साहित है और 300-440 एनएम पर पता चला है। एक्सपोज़र समय के तहत छवियों की तस्वीर लें। झूठे सकारात्मक परिणामों से बचने के लिए 3x दोहराएं।

9. एंटिफंगल संवेदनशीलता परीक्षण

नोट: यह परीक्षण खमीर की तरह फंगल संवेदनशीलता किट (माइक्रोडिल्यूशन; सामग्री की तालिकादेखें) के लिए निर्माता के निर्देशों के अनुसार किया जाता है।

  1. 0.85% NaCl ampule (सामग्री की तालिकादेखें) के साथ 4 दिनों से कम उम्र की कैंडिडा कॉलोनियों (चरण 4) को तैयार करें और 2 मैकफारलैंड के बराबर टर्बिडिटी वाले निलंबन का अधिग्रहण करें। मैकफारलैंड मानक किट के अनुसार मैलापन निर्धारित करें (सामग्री की तालिकादेखें)। तुरंत तैयार कैंडिडा सस्पेंशन का उपयोग करें।
  2. परीक्षण पट्टी में प्रत्येक कप्यूल में 3 x 104 खमीर कोशिकाओं/एमएल युक्त किट में एटीबी एफ 2 माध्यम के पिपेट 135 माइक्रोन और ढक्कन लगाएं। टेस्ट स्ट्रिप को एक सीलबंद कंटेनर में रखें। 35 डिग्री सेल्सियस पर 24 घंटे के लिए संस्कृति।
  3. दृश्य व्याख्या के साथ कैंडिडा के विकास का निरीक्षण करें (उपयोगकर्ता पुस्तिका देखें)। संदर्भ मान (संदर्भ श्रेणी) के लिए, उपयोगकर्ता पुस्तिका देखें। जांचें कि नियंत्रण छेद पर्याप्त रूप से बढ़ रहा है या नहीं। यदि नियंत्रण छिद्र की वृद्धि अपर्याप्त है या नहीं बढ़ती है, तो परिणाम नहीं पढ़े जा सकते हैं और 24 घंटे की खेती की आवश्यकता होती है।

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Representative Results

इस अध्ययन में, पीएसएस के साथ 12 रोगियों को प्रतिनिधि रोगियों के रूप में चुना गया और मौखिक कैंडिडा संक्रमण(तालिका 1)के लिए जांच की गई। इन रोगियों के बीच, कुछ रोगियों कोणीय cheilitis (मुंह, desquamation, और hyperemia, चित्रा 1 ए के कोनों पर दरारें द्वारा विशेषता), मसूड़े श्लेष्म पर चमकदार लाल शोफ, पीले रंग के सफेद कड़े छद्म झिल्ली सहित कैंडिडा संक्रमण के ठेठ मौखिक घावों का प्रदर्शन (चित्रा 1 बी), भाषाई papillae शोष और जीभ के उज्ज्वल लाल पृष्ठीय श्लेष्म (चित्रा 1C).

वर्तमान अध्ययन में शामिल इन 12 रोगियों में से, उनमें से 8 में मौखिक कैंडिडा संक्रमण था, जिसकी पुष्टि एसडीए व्यंजनों पर कैंडिडा कॉलोनियों के विकास से हुई थी (चित्र 2ए-सी और पूरक चित्र 1)। डायग्नोस्टिक अगर से पता चला है कि कैंडिडा अल्बिकन्स, कैंडिडा क्रूसी और कैंडिडा ग्लबराटा के मौखिक कैंडिडा संक्रमण इन पीएसएस रोगियों (चित्रा 2डी-एफ, पूरक चित्रा 2ए, बी) के बीच मौजूद हैं। कुछ मामलों में, कैंडिडा की एक से अधिक प्रजातियों का पता चला था, जैसे कि कैंडिडा अल्बिकन्स और कैंडिडा क्रूसी के साथ संयोजन संक्रमण, साथ ही कैंडिडा अल्बिकन्स और कैंडिडा ग्लबराटा (चित्रा 2 डी, पूरक चित्रा 2 ए, बी) के साथ एक संयोजन संक्रमण।

KOH स्मीयर परीक्षण और बाद में CFW धुंधला परख, रोगी लार या मौखिक श्लैष्मिक स्वाब नमूनों का उपयोग करके, तेजी से यह निर्धारित कर सकता है कि रोगी को मौखिक कैंडिडा संक्रमण है या नहीं। इस अध्ययन में, पीएसएस रोगियों (चित्रा 3 ए, बी) से दोनों मौखिक नमूनों में हाइप की उपस्थिति देखी गई थी। खोज को आगे सीएफडब्ल्यू धुंधला परख द्वारा मान्य किया गया था, जिसने हाइपहे(चित्रा 3सी,डी)के फ्लोरोसेंट सकारात्मक धुंधलापन का प्रदर्शन किया था। इसके अतिरिक्त, मौखिक कैंडिडा अल्बिकन्स से संक्रमित एक पीएसएस रोगी के हाइप हाइफल गठन परख (चित्रा 4ए)के माध्यम से प्रेरित थे, और प्रेरित हाइपहे सीएफडब्ल्यू धुंधला परख(चित्रा 4डी)में प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप के तहत देखे गए थे। इसके अलावा, केओएच स्मीयर परीक्षण और सीएफडब्ल्यू धुंधला परख ने कैंडिडा क्रूसी संक्रमण(चित्रा 4बी,ई)के साथ एक पीएसएस रोगी से सकारात्मक फंगल बीजाणुओं और स्यूडोहिफा का संकेत दिया, और कैंडिडा ग्लबराटा संक्रमण(चित्रा 4सी,एफ)के साथ एक पीएसएस रोगी से फंगल बीजाणुओं, कैंडिडा बायोफिल्म के गठन के बाद।

पीएसएस के रोगियों में मौखिक कैंडिडा संक्रमण के नैदानिक प्रबंधन का मार्गदर्शन करने में एंटिफंगल संवेदनशीलता परीक्षण महत्वपूर्ण है। यहां, तीन प्रतिनिधि रोगियों को पांच आमतौर पर निर्धारित एजेंटों के लिए एंटिफंगल संवेदनशीलता के लिए परीक्षण किया गया था: फ्लुकोनाज़ोल, इट्राकोनाज़ोल, एम्फोटेरिसिन बी, वोरिकोनाज़ोल और 5-फ्लुकोनाज़ोल। निर्माता के दिशानिर्देशों के अनुसार परिणामों की व्याख्या की गई थी। पीएसएस रोगियों 1 और 3 ने परीक्षण किए गए सभी एंटिफंगल एजेंटों (तालिका 1)14,15के प्रति संवेदनशीलता का प्रदर्शन किया। पीएसएस रोगी 2 ने फ्लुकोनाज़ोल और वोरिकोनाज़ोल के लिए एक खुराक पर निर्भर मध्यवर्ती प्रतिक्रिया का प्रदर्शन किया, एक खुराक पर निर्भर, इट्राकोनाज़ोल के प्रति प्रतिरोधी संवेदनशीलता के लिए मध्यवर्ती, 5-फ्लुकोनाज़ोल के प्रतिरोध, और एम्फोटेरिसिन बी उपचार के प्रति संवेदनशीलता (तालिका 2)14,15।

Figure 1
चित्रा 1: मौखिक कैंडिडा संक्रमण के प्रतिनिधि मौखिक अभिव्यक्तियाँ। (ए) कोणीय चीलाइटिस (मुंह के कोनों पर रैगेड्स, डिस्क्लेमेशन, और हाइपरमिया)। (बी) वायुकोशीय मसूड़े के श्लेष्म पर एडिमा के साथ एक एरिथेमेटस घाव, एक पीले-सफेद कड़े छद्म झिल्ली के साथ। (सी) छितरी हुई और अनियमित लाल और परिचालित एट्रोफिक एरिथेमा घाव के साथ लिंगुअल पैपिला का एट्रोफिक पृष्ठ। काले तीर घावों की ओर इशारा करते हैं। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 2
चित्रा 2: Sabouraud डेक्सट्रोज अगर (एसडीए) और कैंडिडा तनाव पहचान। (ए-सी) कैंडिडा संक्रमण के साथ 3 प्रतिनिधि पीएसएस रोगियों से मौखिक नमूने (लार, पीबीएस माउथवॉश, या मौखिक श्लेष्म स्वैप) की एसडीए संस्कृति। कैंडिडा डायग्नोस्टिक अगर का उपयोग करके कैंडिडा स्ट्रेन पहचान परख मौखिक (डी) कैंडिडा अल्बिकन्स प्लस कैंडिडा क्रूसी संक्रमण, (ई) कैंडिडा अल्बिकन्स संक्रमण, और (एफ) कैंडिडा ग्लबराटा संक्रमण के साथ पीएसएस रोगियों को दिखाती है। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 3
चित्रा 3: तत्काल पोटेशियम हाइड्रॉक्साइड (केओएच) धब्बा परीक्षण और कैल्कोफ्लोर सफेद (सीएफडब्ल्यू) धुंधला परख। परख 2 प्रतिनिधि पीएसएस रोगियों से मौखिक नमूने (लार, पीबीएस माउथवॉश, या मौखिक म्यूकोसा स्वैप) का उपयोग करके किया गया था। (ए) पीएसएस रोगी 1 और (बी) पीएसएस रोगी 2 से मौखिक नमूने का उपयोग करके केओएच स्मीयर परीक्षण। काले, खोखले तीर हाइप की ओर इशारा करते हैं। सीएफडब्ल्यू धुंधला परख (सी) पीएसएस रोगी 1 और (डी) पीएसएस रोगी 2 से मौखिक नमूने का उपयोग कर रहा है। सफेद खोखले तीर हाइप और फंगल बीजाणुओं की ओर इशारा करते हैं। स्केल बार = 50 माइक्रोन। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 4
चित्रा 4: पोटेशियम हाइड्रॉक्साइड (केओएच) स्मीयर परीक्षण, कैल्कोफ्लोर व्हाइट (सीएफडब्ल्यू) संस्कृति के बाद नमूनों की धुंधला परख है। (ए) कैंडिडा अल्बिकन्स संक्रमण, (बी) कैंडिडा क्रूसी संक्रमण के साथ पीएसएस रोगी से लार का उपयोग करके केओएच स्मीयर परीक्षण, (बी) कैंडिडा क्रूसी संक्रमण के साथ पीएसएस रोगी, और कैंडिडा ग्लबराटा संक्रमण के साथ (सी) पीएसएस रोगी। (डी) कैंडिडा अल्बिकन्स संक्रमण, फंगल बीजाणुओं, और छद्म हाइफा के साथ पीएसएस रोगी से प्रेरित हाइपहे की सीएफडब्ल्यू धुंधला परख कैंडिडा क्रूसी संक्रमण के साथ (ई) पीएसएस रोगी, और कैंडिडा ग्लबराटा संक्रमण के साथ (एफ) पीएसएस रोगी से फंगल बीजाणु। सफेद खोखले तीर हाइप की ओर इशारा करते हैं; सफेद ठोस तीर छद्म हाइफा की ओर इशारा करते हैं। स्केल बार = 50 माइक्रोन। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

अनुपूरक चित्रा 1: पीएसएस रोगी मौखिक नमूने (लार, पीबीएस माउथवॉश, या मौखिक श्लेष्म स्वैप) का उपयोग करके प्रतिनिधि सबौरौड डेक्सट्रोज अगर (एसडीए) संस्कृति। (ए-सी) 3 प्रतिनिधि पीएसएस रोगियों से मौखिक नमूनों का उपयोग करके कैंडिडा की एसडीए संस्कृति। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

अनुपूरक चित्रा 2: कैंडिडा तनाव की पहचान। से संभावित संक्रमित Candida की पहचान 12 एक Candida निदान अगर का उपयोग कर pSS रोगियों. (ए) पीएसएस रोगियों 1-6 से मौखिक नमूनों का उपयोग करके कैंडिडा तनाव की पहचान। पीएसएस रोगी 1: कैंडिडा अल्बिकन्स, 2: कैंडिडा अल्बिकन्स, 3: कैंडिडा अल्बिकन्स और कैंडिडा क्रूसी, 4: कैंडिडा अल्बिकन्स, 5: कैंडिडा अल्बिकन्स और कैंडिडा ग्लबराटा, 6: कोई मौखिक कैंडिडा संक्रमण नहीं। (बी) पीएसएस रोगियों 7-12 से मौखिक नमूनों का उपयोग कर कैंडिडा तनाव की पहचान. पीएसएस रोगी 7: कैंडिडा अल्बिकन्स, 8: कैंडिडा अल्बिकन्स और कैंडिडा ग्लाब्राटा, 9: कोई मौखिक कैंडिडा संक्रमण नहीं, 10: कैंडिडा अल्बिकन्स, 11: कोई मौखिक कैंडिडा संक्रमण नहीं, 12: कोई मौखिक कैंडिडा संक्रमण नहीं। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

तालिका 1: प्राथमिक Sjögren सिंड्रोम रोगियों की जानकारी। कृपया इस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

तालिका 2: रोगियों14,15 के एंटिफंगल संवेदनशीलता परीक्षण के परिणाम. संक्षिप्ताक्षर: एस = संवेदनशील, मैं = मध्यवर्ती, आर = प्रतिरोधी, एसडीडी = खुराक पर निर्भर संवेदनशील, सी = एकाग्रता। कृपया इस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

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Discussion

वर्तमान पांडुलिपि में, हम मौखिक कैंडिडा संक्रमण का पता लगाने, कैंडिडा उपभेदों की पहचान करने और पीएसएस के रोगियों में आमतौर पर इस्तेमाल की जाने वाली दवाओं की एंटिफंगल संवेदनशीलता का परीक्षण करने के लिए व्यवस्थित, सरल और व्यवहार्य तरीकों की एक श्रृंखला प्रदान करते हैं।

व्यावहारिक सेटिंग्स में, इस पांडुलिपि में पेश किए गए सभी तरीके आवश्यक नहीं हैं। मौखिक कैंडिडा डिटेक्शन विधि (ओं) को विशिष्ट उद्देश्य के आधार पर चुना जा सकता है। KOH स्मीयर परीक्षण और CFW धुंधला परख, संवर्धन के बिना नमूनों का उपयोग करके, तेजी से और प्रारंभिक रूप से pSS रोगियों में मौखिक कैंडिडा संक्रमण की उपस्थिति का निर्धारण कर सकते हैं। हालांकि, इन विधियों में अपेक्षाकृत उच्च झूठी-नकारात्मक दर16 है। यदि संक्रमण की पुष्टि करना मुश्किल है, तो कैंडिडा संवर्धन आवश्यक है। दवा प्रतिरोध एक कारक है जिसे उपचार के दौरान विचार किया जाना चाहिए; कुछ कैंडिडा उपभेद स्वाभाविक रूप से कुछ एंटिफंगल दवाओं के लिए प्रतिरोधी हैं, उदाहरण के लिए, कैंडिडा क्रूसी फ्लुकोनाज़ोल17 के साथ उपचार के लिए स्वाभाविक रूप से प्रतिरोधी है। इसलिए, कभी-कभी, कैंडिडा के तनाव की पहचान करने की आवश्यकता होती है। इस मामले में, कैंडिडा तनाव को कैंडिडा डायग्नोस्टिक अगर द्वारा पहचाना जा सकता है। वर्तमान में, दवा प्रतिरोधी Candida ध्यान बढ़ रही है18. एंटिफंगल संवेदनशीलता परीक्षण उपचार का मार्गदर्शन कर सकता है और इस तरह उपचार के दौरान जितना संभव हो दवा प्रतिरोध से बच सकता है। कैंडिडा बायोफिल्म गठन परख और हाइफल गठन परख मौखिक कैंडिडा संक्रमण से संबंधित अनुसंधान के लिए अनुकूल हैं।

ओरल कैंडिडा संक्रमण पीएसएस रोगियों में सबसे लगातार जटिलताओं में से एक है4, लक्षणों की सरणी के कारण उनके जीवन की गुणवत्ता को महत्वपूर्ण रूप से प्रभावित करता है। विशेष रूप से, पीएसएस रोगियों अत्यधिक इस संक्रमण के लिए अतिसंवेदनशील होते हैं, और प्रभावी उपचार अक्सर प्रणालीगत चिकित्सा और रोगी सहयोग19 की आवश्यकता होती है. नतीजतन, मौखिक कैंडिडा संक्रमण अक्सर इस आबादी में आवर्तक होते हैं। मौखिक कैंडिडिआसिस की पहचान करना और उपचार का मार्गदर्शन करने के लिए एंटिफंगल संवेदनशीलता परीक्षण करना महत्वपूर्ण है। इस पांडुलिपि में विस्तृत तरीकों में, कैंडिडा का पता लगाने और बाद में संवर्धन के लिए मौखिक नमूनों का संग्रह सबसे महत्वपूर्ण कदम हैं।

इसके अलावा, कैंडिडा जिसमें हाइफल गठन (जैसे कैंडिडा अल्बिकन्स) होता है, को आसानी से तेजी से केओएच स्मीयर परीक्षण और सीएफडब्ल्यू धुंधला परख द्वारा संवर्धन के बिना एकत्रित नमूनों का उपयोग करके पता लगाया जा सकता है। हालांकि अधिकांश मौखिक कैंडिडा संक्रमणों का पता लगाया जा सकता है और कैंडिडा उपभेदों को इस पांडुलिपि में पेश किए गए तरीकों के माध्यम से पहचाना जा सकता है, कुछ कैंडिडा उपभेदों को विशेष रूप से केवल एसडीए संस्कृति, कैंडिडा डायग्नोस्टिक अगर संस्कृति, कैंडिडा बायोफिल्म गठन परख, और हाइफल गठन परख जैसे तरीकों से दूसरों से पहचाना नहीं जा सकता है। इसके अतिरिक्त, कुछ कैंडिडा उपभेदों को हाइप का उत्पादन करने के लिए प्रेरित नहीं किया जा सकता है, जैसे कि कैंडिडा ग्लबराटा। 18s आरडीएनए आरटी-पीसीआर आधारित प्रजातियों की पहचान सही ढंग से उनके आनुवंशिक समानता 10,20,21 के आधार पर कैंडिडा प्रजातियों की पहचान कर सकते हैं. यदि आवश्यक हो, तो 18s rdna RT-PCR- आधारित प्रजातियों की पहचान का उपयोग किया जा सकता है, उदाहरण के लिए, PSS रोगियों में मौखिक कैंडिडा संक्रमण के बारे में शोध में।

इंट्राओरल रूप से, कैंडिडा संक्रमण की अभिव्यक्ति एरिथेमेटस म्यूकोसल घावों, डेन्चर स्टामाटाइटिस और जीभ के फिशरिंग के रूप में उपस्थित हो सकती है। पेरिओरल क्षेत्र में, कैंडिडा का उपनिवेशण एक सूखी, फटा और एरिथेमेटस उपस्थिति का कारण बनता है7. नैदानिक मौखिक कैंडिडिआसिस की रिपोर्ट की गई व्यापकता एसएस रोगियों में व्यापक रूप से भिन्न होती है, 0% से 80% तक। मौखिक कैंडिडिआसिस की बड़ी भिन्नता के संभावित कारणों में स्पष्ट रोगसूचकता की कमी शामिल है और, इससे भी महत्वपूर्ण बात, साहित्य 8,9,12 में मौखिक कैंडिडिआसिस के निदान के लिए उपयोग किए जाने वाले विभिन्न मानदंड। इसके अलावा, कैंडिडा संक्रमण वाले रोगियों को एसएस का उच्च जोखिम होने की सूचना है, और कैंडिडा संक्रमण बाद के एसएस22 के प्रारंभिक संकेत के रूप में कार्य कर सकता है। पीएसएस का प्रारंभिक निदान उपचार और रोग संबंधी अध्ययन के लिए महत्वपूर्ण है। इसलिए, पीएसएस रोगियों में मौखिक कैंडिडा संक्रमण की पहचान करने के लिए सार्वभौमिक, सुविधाजनक और व्यवहार्य तरीके प्रदान करना अनिवार्य है।

हालांकि पीएसएस रोगियों में आंत, मौखिक और योनि माइक्रोबायोम में डिस्बिओसिस अक्सर होता है, मौखिक नमूने माइक्रोबियल भिन्नता की सबसे बड़ी सीमा प्रदर्शित करतेहैं। सामान्य परिस्थितियों में, पूरे लार का औसत दैनिक प्रवाह 1 से 1.5 एल2 है। लार का 99% तक पानी से बना होता है, और शेष 1% प्रोटीन और आयनों से बना होता है। लार कोकई कारणों से मौखिक माइक्रोबायोटा की संरचना और गतिविधि के निर्धारण में महत्वपूर्ण भूमिका निभाने की सूचना है। लार न केवल दांतों को लगातार साफ करती है, स्वस्थ परिस्थितियों में महत्वपूर्ण मौखिक स्वच्छता कार्य करती है, बल्कि यह मौखिक सतहों पर एक कंडीशनिंग फिल्म भी बनाती है। यह फिल्म बैक्टीरिया लगाव के लिए रिसेप्टर्स प्रदान करती है, ग्लाइकोप्रोटीन से पोषक तत्वों के साथ आपूर्ति करके बैक्टीरिया के विकास में सहायता करती है और बैक्टीरिया के विकास के लिए उपयुक्त पीएच बनाए रखती है। इसके अतिरिक्त, लार में रोगाणुरोधी और एंटी-कैंडिडल कारक होते हैं जो माइक्रोबायोटा को विनियमित और आकार देते हैं। इसके अलावा, लार में रोगाणुरोधी और एंटी-कैंडिडल कारक होते हैं, जैसे एड्रेनोमेडुलिन, स्टैथरिन, हिस्टैटिन, α-डिफेंसिन, लाइसोजाइम, हिस्टैटिन, लैक्टोफेरिन और कैलप्रोटेक्टिन, जो माइक्रोबायोटा को विनियमित और आकार देतेहैं। पीएसएस को ऑटोइम्यून डेरेग्यूलेशन और ग्रंथियों के हाइपोफंक्शन की विशेषता है। हाइपोसैलिवेशन, लार प्रवाह में कमी, पीएसएस के सबसे प्रचलित लक्षणों में से एक है। कम लार पीएच स्तर और प्रवाह मौखिक कैंडिडा संक्रमण के लिए महत्वपूर्ण जोखिम कारक हैं5. इसके अलावा, कैंडिडा संक्रमण एसएस6 से जुड़ी दूसरी सबसे आम ओरोफेशियल जटिलता के रूप में रिपोर्ट किया जाता है। लेखकों का सुझाव है कि पीएसएस रोगियों में बढ़े हुए कैंडिडा संक्रमण को न केवल लार उत्पादन में कमी से जोड़ा जा सकता है, बल्कि एसएस में निहित प्रतिरक्षाविज्ञानी विनियमन से भी जोड़ा जा सकता है।

निष्कर्ष निकालने के लिए, मौखिक Candida संक्रमण और एंटिफंगल संवेदनशीलता परीक्षण के लिए व्यावहारिक और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य तरीकों इस पांडुलिपि में शुरू नैदानिक पहचान और Candida संक्रमण के उपचार को बढ़ाने के लिए वादा पकड़. इसके अलावा, ये मानकीकृत प्रक्रियाएं मौखिक कैंडिडिआसिस से संबंधित शोध अध्ययनों में विसंगतियों को कम कर सकती हैं।

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Disclosures

लेखकों के पास घोषित करने के लिए हितों का कोई टकराव नहीं है।

Acknowledgments

इस शोध को नेशनल नेचुरल साइंस फाउंडेशन ऑफ चाइना (82201084), चाइना पोस्टडॉक्टोरल साइंस फाउंडेशन (2022M722232), बीजिंग पोस्टडॉक्टोरल रिसर्च फाउंडेशन (2023-ZZ-020), बीजिंग तियानटन अस्पताल का मियाओपू प्रोजेक्ट, कैपिटल मेडिकल यूनिवर्सिटी (2023MP10) और जनरल रिसर्च फंड, हांगकांग रिसर्च ग्रांट काउंसिल (27111820 और 17116521) द्वारा समर्थित किया गया था।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
0.22 µm Syringe Filter MERCK SLGV004SL
1.5 mL Centrifuge Tube axygen MCT-150-C-S
10 cm Microbiological Culture Dishes Jet Bio-Filtration Co. Ltd TCD000100
15 mL Centrifuge Tube Jet Bio-Filtration Co., Ltd CFT011150
50 mL Centrifuge Tube Corning 430290
96-well Microplates Corning 3599
API 0.85% NaCl ampule BIOMERIEUX 20070
Calcofluor White Stain Sigma-Aldrich 18909-100ML-F
CHROMagar Candida CHROMagar P002860 Candida diagnostic agar
D(+)-Glucose Monohydrate Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd 10010518
Fetal Bovine Serum  Gibco 26170035
McFarland Standards Kit BIOMERIEUX 70900
Nunc precision molded loops  ThermoFisher Scientific 254399
Phosphate Buffered Saline Gibco C10010500BT
Potassium Hydroxide Aladdin P112284-500g
PowerSoil DNA Isolation Kit  MO BIO 12888-50
RPMI 1640 Medium Gibco 11875119
Sabourand's Agar Medium Solarbio S9710
Yeast Nitrogen Base Without Amino acids Solarbio Y8040
Yeast-like Fungal Susceptibility Kit (Microdilution) BIOMERIEUX 14204

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References

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चिकित्सा अंक 205
प्राथमिक Sjögren सिंड्रोम रोगियों में मौखिक <i>कैंडिडा</i> संक्रमण की परीक्षा
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Wang, X., Song, Y., Lou, X., Han, B., Wu, R., Xie, J., Lin, X., Wang, H. Examination of Oral Candida Infection in Primary Sjögren's Syndrome Patients. J. Vis. Exp. (205), e66430, doi:10.3791/66430 (2024).

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