העיקרית של תרבות האנושית שיווי המשקל schwannomas
Summary
שיווי המשקל schwannomas (VSS) הם גידולים לא ממאירים ממוצא שוואן תא (SC), הקשורים עם מוטציות בגן המדכא גידולי NF2. אנו מדווחים על פרוטוקול לשחזור, יעיל לאנושי ראשוני VS תרבית תאים המאפשר מניפולציה ניסויית מולקולרית ותאית וניתוח ומשחזר את האופי הטרוגנית של מחלות בבני אדם.
Abstract
schwannomas שיווי המשקל (VSS) מייצג תא שוואן גידולים (SC) של עצב שיווי המשקל, להתפשר 10% מכלל השאתות תוך גולגולתי. VSS להתרחש ב(, נוירופיברומטוזיס NF2 סוג 2) צורות או ספורדי או משפחתיות, שניהם קשורות עם מומי inactivating במדכאי סרטן NF2 גנים. טיפול VSS הוא בדרך כלל כריתה כירורגית או radiosurgery, עם זאת התחלואה של נהלים כאלה העלתה חקירות לטיפולים פחות פולשניים. מבחינה היסטורית, היעדר הגישה לדגימות רקמה טריות והעובדה שתאי schwannoma לא הונצחו יש הכביד באופן משמעותי את השימוש בתרבויות עיקריות לחקירה של tumorigenesis schwannoma. כדי להתגבר על ההיצע המוגבל של תרבויות עיקריות, שורת תאי HEI193 VS הונצחה נוצרה על ידי התמרה עם אונקוגנים HPV E6 ו-E7. התמרה בשעור זה הציגה שינויים מולקולריים ופנוטיפי משמעותיים לתאים, המגבילים את השימוש בם כמודל לשל אדםגידולי chwannoma. לפיכך, אנו מדגימים פרוטוקול פשוט יותר, לשחזור לתרבות אנושית ראשוני VS תאים. טכניקה לשלוט בקלות זה מאפשרת לחקירות מולקולריות ותאיות שיותר במדויק לשחזר את המורכבות של המחלה VS.
Introduction
schwannomas שיווי המשקל (VSS) מייצג תא שוואן גידולים (SC) של עצב שיווי המשקל, להתפשר 10% מכלל השאתות תוך גולגולתי 1-3. VSS להתרחש ב(, נוירופיברומטוזיס NF2 סוג 2) צורות או ספורדי או משפחתיות, שניהם קשורות עם מומי inactivating במדכאי סרטן NF2 גנים. טיפול VSS הוא בדרך כלל כריתה כירורגית או radiosurgery, עם זאת התחלואה של נהלים כאלה כוללת חירשות, נוירופתיה פנים, דליפת נוזל השדרה, חוסר איזון, וצמיחה מחודשת גידול 1. בנוסף לא כל החולים הם מועמדים ניתוחיים או קרינה מקובלים. תחלואה כה משמעותית, כמו גם חוסר טיפולים אלטרנטיביים העלתה חקירת הביולוגיה מולקולרית הייחודית של VSS בתקווה לפתח טיפולים חדשניים 3,4.
תרבית תאים מאפשרת ניתוח מהיר, קליל, ומעמיק בהתנהגות והקרנה מולקולריות ותאית של com הטיפולי הפוטנציאליקילו. מבחינה היסטורית, היעדר הגישה לדגימות רקמה טריות והעובדה שתאי schwannoma לא הונצחו יש הכביד באופן משמעותי את השימוש בתרבויות עיקריות לחקירה של tumorigenesis schwannoma. כדי להתגבר על ההיצע המוגבל של תרבויות עיקריות, שורת תאי HEI193 VS הונצחה נוצרה על ידי התמרה עם אונקוגנים HPV E6 ו E7 5. התמרה בשעור זה הציגה שינויים מולקולריים ופנוטיפי משמעותיים לתאים, המגבילים את השימוש בם כמודל לגידולי schwannoma אנושיים. תרבויות SC נגזרות מהקווים עכבר מהונדסים שאין גן NF2 פונקציונלי מייצגות אלטרנטיבה אחרת כדי לחקור tumorigenesis SC NF2 תלוי במבחנה. תרבויות אלה עם זאת יצליחו לשחזר את הטבע הטרוגנית של VSS או חשבון בבני אדם להתנהגות מסוימת של אדם. רוב טכניקות תרבות VS הקודמות נדרשות זמני עיבוד ארוכים יחסית וטכניקות תרבות סלקטיבית מסובכות 6-8.כאן אנו מציגים פרוטוקול פשוט, לשחזור לעיקרי VS תרבית תאים עם עיבוד מלא בפחות מ -3 שעות, עם 95% טוהר תאים סרטניים כפי שנקבע על ידי immunostaining.
Protocol
Representative Results
Discussion
היסטוריה של במבחנה תרבויות Schwannoma
מאמצים להקים בתרבויות schwannoma מבחנה החלו רק כמה עשרות שנים אחרי נוירומה אקוסטית הראשונית כריתה כירורגית פתוחה התרחשה בשינה 1894 12. התרבויות המתועדות הראשונות היו על יד?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
תמיכה: NIDCD R01DC009801, P30DC010362, 5T32DC000040-17
Materials
| Poly-L-Ornithine, 0.01% Solution | Sigma | P4957 | Cell Culture Surface Treatment |
| Laminin Mouse Protein | Gibco | 23017-015 / L2020 | Cell Culture Surface Treatment |
| 0.2% Collagenase (dissolved in HBSS -/-) | Sigma | C2674 | Dissociation Reagent |
| 0.25% Trypsin | Gibco | 25200-056 | Dissociation Reagent |
| TPS 100mm Round Culture Dish | Midwest Scientific | TP93100 | |
| Permanox 4 well slide | Fisher Scientific | 1256521 | |
| Permanox 8 well slide | Fisher Scientific | 1256522 | |
| Suction Filter Flask | Midwest Scientific | TP99500 | |
| 15ml Conical Tube | Midwest Scientific | TP91015 | |
| 50ml Conical Tube | Midwest Scientific | TP91050 | |
| 2mL Round Bottom Tube | USA Scientific | 1620-2700 | |
| Small Scissor | FST | 14058-11 | |
| Small Forceps | FST | 11251-20 | |
| Scalpel Handle | FST | 10004-13 | |
| #11 Scalpel Blade | Roboz | RS-9801-11 | |
| Non-Tissue Culture 100mm Round Petri Dish | Fisher Scientific | 50-820-904 | |
| P1000 Pipetteman | Bioexpress | P3963-1000 | |
| Serological Pipetteman | Bioexpress | R3073-2P | |
| Sterile, Non-Filtered P1000 Pipette Tips | Midwest Scientific | TD1250R | |
| Insulated Ice Cooler | |||
| Culture Hood | Baker | ||
| Centrifuge | Eppendorf -5810R | ||
| Hanks Balanced Salt Solution (HBSS) +/+ (w/ Ca2+, Mg2+) | Gibco | 24020-117 | Schwannoma Culture and Media Components |
| Hanks Balanced Salt Solution (HBSS) -/- (w/out Ca2+, Mg2+) | Gibco | 14170-112 | Schwannoma Culture and Media Components |
| Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM), High Glucose, w/ Phenol Red | Gibco | 11965-092 | Schwannoma Culture and Media Components |
| N2 Supplement | Gibco | 17502-048 | Schwannoma Culture and Media Components |
| Fetal Bovine Serum | Gibco | 26140-079 | Schwannoma Culture and Media Components |
| Penicillin – Streptomycin | Gibco | 15140-163 | Schwannoma Culture and Media Components |
| Bovine Insulin (1mg/ml 200x) | Sigma | I6634 | Schwannoma Culture and Media Components |
References
- Arthurs, B. J., et al. A review of treatment modalities for vestibular schwannoma. Neurosurg Rev. 34 (3), 265-277 (2011).
- Evans, G. R., Lloyd, S. K., Ramsden, R. T. Neurofibromatosis type 2. Adv Otorhinolaryngol. 70, 91-98 (2001).
- Fong, B., et al. The molecular biology and novel treatments of vestibular schwannomas. J Neurosurg. 115 (5), 906-914 (2011).
- Jacob, A., et al. Preclinical validation of AR42, a novel histone deacetylase inhibitor, as treatment for vestibular schwannomas. Laryngoscope. 122 (1), 174-189 (2012).
- Evans, D. G. Neurofibromatosis 2 [Bilateral acoustic neurofibromatosis, central neurofibromatosis. NF2, neurofibromatosis type II]. Genet Med. 11 (9), 599-610 (2009).
- Anniko, M., Noren, G. The Human Acoustic Neurinoma in Organ-Culture .1. Methodological Aspects. Acta Oto-Laryngologica. 91 (1-2), 47-53 (1981).
- Manent, J., et al. Magnetic cell sorting for enriching Schwann cells from adult mouse peripheral nerves. J Neurosci Methods. 123 (2), 167-173 (2003).
- Nair, S., et al. Primary cultures of human vestibular schwannoma: selective growth of schwannoma cells. Otol Neurotol. 28 (2), 258-263 (2007).
- Baur, A. M., et al. Laminin promotes differentiation, adhesion and proliferation of cell cultures derived from human acoustic nerve schwannoma. Acta Otolaryngol. 115 (4), 517-521 (1995).
- Cravioto, H., et al. Experimental neurinoma in tissue culture. Acta Neuropathol. 21 (2), 154-164 (1972).
- Kaasinen, S., et al. Culturing of acoustic neuroma–methodological aspects. Acta Otolaryngol Suppl. 520 Pt 1, 25-26 (1995).
- Kredel, F. E. Tissue Culture of Intracranial Tumors with a Note on the Meningiomas. Am J Pathol. 4 (4), 337-340 (1928).
- Murray, M. R., Stout, A. P., Bradley, C. F. Schwann cell versus fibroblast as the origin of the specific nerve sheath tumor: Observations upon normal nerve sheaths and neurilemomas in vitro. Am J Pathol. 16 (1), 41-60 (1940).
- Cravioto, H., Lockwood, R. The behavior of acoustic neuroma in tissue culture. Acta Neuropathol. 12 (2), 141-157 (1969).
- Lee, J. D., et al. Genetic and epigenetic alterations of the NF2 gene in sporadic vestibular schwannomas. PLoS One. 7 (1), 30418 (2012).
- Wippold, F. J., 2nd, , et al. Neuropathology for the neuroradiologist: Antoni A and Antoni B tissue patterns. AJNR Am J Neuroradiol. 28 (9), 1633-1638 (2007).
- Mennel, H. D. Short-term tissue culture observations of experimental primary and transplanted nervous system tumors. J Neuropathol Exp Neurol. 39 (6), 639-660 (1980).
- Rosenbaum, C., et al. Isolation and characterization of Schwann cells from neurofibromatosis type 2 patients. Neurobiol Dis. 5 (1), 55-64 (1998).
