İnsan Vestibüler Schwannomalar İlköğretim Kültürü
Summary
Vestibüler Schwannomalar (VSS) TNF2 tümör baskılayıcı gen mutasyonu ile ilişkili Schwann hücre (SC) kökenli olmayan habis tümörler vardır. Biz, moleküler ve hücresel deneysel manipülasyon ve analiz için izin verir ve insan hastalığının heterojen doğası tekrarıdır hücre kültürü VS birincil insan için yeniden üretilebilir ve etkili protokolü sunulmaktadır.
Abstract
Vestibüler schwannomalar (VSS) tüm intrakraniyal tümörlerin% 10 taviz, Schwann hücresi vestibüler sinirin (SC) tümörler temsil eder. Vss hem TNF2 tümör baskılayıcı olarak inaktive kusurları ile ilişkili sporadik veya ailesel ya (Nörofibromatozis tip 2, NF2) formlar, meydana Gen. VSS tedavisi ancak bu tür prosedürlerin morbidite daha az invaziv tedaviler soruşturmaları tahrik olan, genellikle cerrahi rezeksiyon veya radyocerrahi olduğunu. Tarihsel olarak, taze doku örneklerinin erişim ve schwannoma hücreler immortalize değildir gerçeğinin olmaması önemli schwannoma Tümörgenez araştırılması için primer kültürlerinde kullanımını engellemiştir. Primer kültürlerin sınırlı kaynağı üstesinden gelmek için, ölümsüz kılınmış hücre kuşağı HEI193 VS HPV E6 ve E7 onkogenler ile transdüksiyonu ile üretilmiştir. Bu onkojenik transdüksiyon insan s için bir model olarak, kullanımlarını sınırlayan hücrelere, önemli moleküler ve fenotipik değişiklikler ortayachwannoma tümörler. Bu nedenle hücreler VS primer insan kültürü için basitleştirilmiş, tekrarlanabilir bir protokol göstermektedir. Bu kolayca hakim teknik daha doğru VS hastalığın karmaşıklığı özetlemek moleküler ve hücresel incelemeler için izin verir.
Introduction
Vestibüler schwannomalar (VSS) tüm intrakraniyal tümörlerin 1-3 10% ödün, Schwann hücresi vestibüler sinirin (SC) tümörler temsil eder. Vss hem TNF2 tümör baskılayıcı olarak inaktive kusurları ile ilişkili sporadik veya ailesel ya (Nörofibromatozis tip 2, NF2) formlar, meydana Gen. VSS tedavisi ancak bu tür prosedürlerin morbidite sağırlık, yüz nöropatlien omurilik sıvısı kaçağı, dengesizlik, ve tümör büyütme 1 içerir, genellikle cerrahi rezeksiyon veya radyocerrahi olduğunu. Buna ek olarak her hasta olarak kabul edilebilir bir cerrahi veya radyasyon adaylardır. Alternatif tedaviler gibi önemli morbidite yanı sıra bir eksikliği yeni tedaviler 3,4, gelişmekte umuduyla VSS eşsiz moleküler biyoloji soruşturma tahrik vardır.
Hücre kültürü potansiyel tedavi com moleküler ve hücresel davranış ve tarama, hızlı kolay ve derinlemesine analiz sağlarlira. Tarihsel olarak, taze doku örneklerinin erişim ve schwannoma hücreler immortalize değildir gerçeğinin olmaması önemli schwannoma Tümörgenez araştırılması için primer kültürlerinde kullanımını engellemiştir. Primer kültürlerin sınırlı kaynağı üstesinden gelmek için, ölümsüz kılınmış hücre kuşağı HEI193 VS HPV E6 ve E7 onkogenler 5 ile transdüksiyonu ile üretilmiştir. Bu onkojenik transdüksiyon schwannoma, insan tümörleri için bir model olarak, kullanımlarını sınırlayan hücrelere, önemli moleküler ve fenotipik değişiklikler getirmiştir. Fonksiyonel NF2 geni eksik transgenik fare hatları türetilen SC in vitro kültürler NF2 bağımlı SC tümörogenez araştırmak için başka bir alternatif oluşturmaktadır. Bu kültürler, ancak insan belirli bir davranış insan VSS veya hesabın heterojen doğasını özetlemek için başarısız. Çoğu önceki VS kültür teknikleri nispeten uzun işlem süreleri ve karmaşık seçici kültür teknikleri 6-8 gereklidir.Immun boyama ile saptandığı haliyle Burada% 95 tümör hücresi saflıkta altında, 3 saat içinde tam bir işlem ile hücre kültürü VS primer için basit ve tekrarlanabilir bir protokol, mevcut.
Protocol
Representative Results
Discussion
In vitro Schwannom Kültürleri Tarihi
Vitro schwanom kültürlerde kurmak için çabalar açık cerrahi rezeksiyon 1894 12 yılında meydana gelen ilk akustik nöroma sonra sadece bir kaç yıl başladı. İlk kaydedilen kültürleri başarısız "asılı damla yöntemiyle" 12 ile kıyılmış tümör büyümeye çalışmış 1920'lerde Kredel tarafından vardı . Daha sonra, Dr. Murray ve Stout pıhtılaşmış…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Destek: NIDCD R01DC009801, P30DC010362, 5T32DC000040-17
Materials
| Poly-L-Ornithine, 0.01% Solution | Sigma | P4957 | Cell Culture Surface Treatment |
| Laminin Mouse Protein | Gibco | 23017-015 / L2020 | Cell Culture Surface Treatment |
| 0.2% Collagenase (dissolved in HBSS -/-) | Sigma | C2674 | Dissociation Reagent |
| 0.25% Trypsin | Gibco | 25200-056 | Dissociation Reagent |
| TPS 100mm Round Culture Dish | Midwest Scientific | TP93100 | |
| Permanox 4 well slide | Fisher Scientific | 1256521 | |
| Permanox 8 well slide | Fisher Scientific | 1256522 | |
| Suction Filter Flask | Midwest Scientific | TP99500 | |
| 15ml Conical Tube | Midwest Scientific | TP91015 | |
| 50ml Conical Tube | Midwest Scientific | TP91050 | |
| 2mL Round Bottom Tube | USA Scientific | 1620-2700 | |
| Small Scissor | FST | 14058-11 | |
| Small Forceps | FST | 11251-20 | |
| Scalpel Handle | FST | 10004-13 | |
| #11 Scalpel Blade | Roboz | RS-9801-11 | |
| Non-Tissue Culture 100mm Round Petri Dish | Fisher Scientific | 50-820-904 | |
| P1000 Pipetteman | Bioexpress | P3963-1000 | |
| Serological Pipetteman | Bioexpress | R3073-2P | |
| Sterile, Non-Filtered P1000 Pipette Tips | Midwest Scientific | TD1250R | |
| Insulated Ice Cooler | |||
| Culture Hood | Baker | ||
| Centrifuge | Eppendorf -5810R | ||
| Hanks Balanced Salt Solution (HBSS) +/+ (w/ Ca2+, Mg2+) | Gibco | 24020-117 | Schwannoma Culture and Media Components |
| Hanks Balanced Salt Solution (HBSS) -/- (w/out Ca2+, Mg2+) | Gibco | 14170-112 | Schwannoma Culture and Media Components |
| Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM), High Glucose, w/ Phenol Red | Gibco | 11965-092 | Schwannoma Culture and Media Components |
| N2 Supplement | Gibco | 17502-048 | Schwannoma Culture and Media Components |
| Fetal Bovine Serum | Gibco | 26140-079 | Schwannoma Culture and Media Components |
| Penicillin – Streptomycin | Gibco | 15140-163 | Schwannoma Culture and Media Components |
| Bovine Insulin (1mg/ml 200x) | Sigma | I6634 | Schwannoma Culture and Media Components |
References
- Arthurs, B. J., et al. A review of treatment modalities for vestibular schwannoma. Neurosurg Rev. 34 (3), 265-277 (2011).
- Evans, G. R., Lloyd, S. K., Ramsden, R. T. Neurofibromatosis type 2. Adv Otorhinolaryngol. 70, 91-98 (2001).
- Fong, B., et al. The molecular biology and novel treatments of vestibular schwannomas. J Neurosurg. 115 (5), 906-914 (2011).
- Jacob, A., et al. Preclinical validation of AR42, a novel histone deacetylase inhibitor, as treatment for vestibular schwannomas. Laryngoscope. 122 (1), 174-189 (2012).
- Evans, D. G. Neurofibromatosis 2 [Bilateral acoustic neurofibromatosis, central neurofibromatosis. NF2, neurofibromatosis type II]. Genet Med. 11 (9), 599-610 (2009).
- Anniko, M., Noren, G. The Human Acoustic Neurinoma in Organ-Culture .1. Methodological Aspects. Acta Oto-Laryngologica. 91 (1-2), 47-53 (1981).
- Manent, J., et al. Magnetic cell sorting for enriching Schwann cells from adult mouse peripheral nerves. J Neurosci Methods. 123 (2), 167-173 (2003).
- Nair, S., et al. Primary cultures of human vestibular schwannoma: selective growth of schwannoma cells. Otol Neurotol. 28 (2), 258-263 (2007).
- Baur, A. M., et al. Laminin promotes differentiation, adhesion and proliferation of cell cultures derived from human acoustic nerve schwannoma. Acta Otolaryngol. 115 (4), 517-521 (1995).
- Cravioto, H., et al. Experimental neurinoma in tissue culture. Acta Neuropathol. 21 (2), 154-164 (1972).
- Kaasinen, S., et al. Culturing of acoustic neuroma–methodological aspects. Acta Otolaryngol Suppl. 520 Pt 1, 25-26 (1995).
- Kredel, F. E. Tissue Culture of Intracranial Tumors with a Note on the Meningiomas. Am J Pathol. 4 (4), 337-340 (1928).
- Murray, M. R., Stout, A. P., Bradley, C. F. Schwann cell versus fibroblast as the origin of the specific nerve sheath tumor: Observations upon normal nerve sheaths and neurilemomas in vitro. Am J Pathol. 16 (1), 41-60 (1940).
- Cravioto, H., Lockwood, R. The behavior of acoustic neuroma in tissue culture. Acta Neuropathol. 12 (2), 141-157 (1969).
- Lee, J. D., et al. Genetic and epigenetic alterations of the NF2 gene in sporadic vestibular schwannomas. PLoS One. 7 (1), 30418 (2012).
- Wippold, F. J., 2nd, , et al. Neuropathology for the neuroradiologist: Antoni A and Antoni B tissue patterns. AJNR Am J Neuroradiol. 28 (9), 1633-1638 (2007).
- Mennel, H. D. Short-term tissue culture observations of experimental primary and transplanted nervous system tumors. J Neuropathol Exp Neurol. 39 (6), 639-660 (1980).
- Rosenbaum, C., et al. Isolation and characterization of Schwann cells from neurofibromatosis type 2 patients. Neurobiol Dis. 5 (1), 55-64 (1998).
