मानव Vestibular Schwannomas के प्राथमिक संस्कृति
Summary
Vestibular Schwannomas (वीएसएस) NF2 ट्यूमर शमन जीन में परिवर्तन के साथ जुड़े श्वान सेल (अनुसूचित जाति) मूल के गैर घातक ट्यूमर, कर रहे हैं. हम आणविक और सेलुलर प्रयोगात्मक हेरफेर और विश्लेषण के लिए अनुमति देता है और मानव रोग की विषम प्रकृति का स्मरण दिलाता है कि सेल संस्कृति वी.एस. प्राथमिक मानव के लिए एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य, कुशल प्रोटोकॉल की रिपोर्ट.
Abstract
Vestibular schwannomas (वीएसएस) सभी अंतर्कपालीय अर्बुद का 10% से समझौता किए, श्वान सेल vestibular तंत्रिका की (अनुसूचित जाति) ट्यूमर का प्रतिनिधित्व करते हैं. वीएसएस दोनों NF2 ट्यूमर शमन में निष्क्रिय दोष के साथ जुड़े छिटपुट या पारिवारिक या तो (neurofibromatosis टाइप 2, NF2) रूपों में पाए जाते हैं जीन. वीएसएस के लिए उपचार हालांकि ऐसी प्रक्रियाओं की रुग्णता कम आक्रामक उपचार की जांच प्रेरित किया है, आम तौर पर शल्य लकीर या रेडियोसर्जरी है. ऐतिहासिक, ताजा ऊतक नमूनों के लिए उपयोग और schwannoma कोशिकाओं अमर नहीं कर रहे हैं कि तथ्य की कमी काफी schwannoma tumorigenesis की जांच के लिए प्राथमिक संस्कृतियों का उपयोग बाधा है. प्राथमिक संस्कृतियों की सीमित आपूर्ति पर काबू पाने, अमर HEI193 वी.एस. सेल लाइन एचपीवी E6 और E7 ओंकोजीन साथ पारगमन द्वारा उत्पन्न किया गया था. इस oncogenic पारगमन मानव के लिए एक मॉडल के रूप में उनके उपयोग की सीमा कोशिकाओं है, जो करने के लिए महत्वपूर्ण आणविक और प्ररूपी परिवर्तन की शुरुआत कीchwannoma ट्यूमर. इसलिए हम कोशिकाओं वी.एस. प्राथमिक मानव की संस्कृति के लिए एक सरल, प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य प्रोटोकॉल वर्णन. यह आसानी से महारत हासिल तकनीक और अधिक सही वी.एस. रोग की जटिलता पुनरावृत्ति कि आणविक और सेलुलर जांच के लिए अनुमति देता है.
Introduction
Vestibular schwannomas (वीएसएस) सभी अंतर्कपालीय अर्बुद 1-3 की 10% से समझौता किए, श्वान सेल vestibular तंत्रिका की (अनुसूचित जाति) ट्यूमर का प्रतिनिधित्व करते हैं. वीएसएस दोनों NF2 ट्यूमर शमन में निष्क्रिय दोष के साथ जुड़े छिटपुट या पारिवारिक या तो (neurofibromatosis टाइप 2, NF2) रूपों में पाए जाते हैं जीन. वीएसएस के लिए उपचार हालांकि ऐसी प्रक्रियाओं की रुग्णता बहरापन, चेहरे न्यूरोपैथी, रीढ़ की हड्डी में तरल पदार्थ लीक, असंतुलन, और ट्यूमर regrowth 1 शामिल हैं, आम तौर पर शल्य लकीर या रेडियोसर्जरी है. इसके साथ ही नहीं सभी रोगियों को स्वीकार्य शल्य चिकित्सा या विकिरण उम्मीदवार हैं. वैकल्पिक चिकित्सा के इस तरह के महत्वपूर्ण रुग्णता के साथ ही एक कमी उपन्यास उपचार 3,4 के विकास की उम्मीद में वीएसएस का अनूठा आणविक जीव विज्ञान में जांच को प्रेरित किया है.
सेल संस्कृति संभावित चिकित्सीय कॉम की आणविक और सेलुलर व्यवहार और स्क्रीनिंग की, तेजी से सुगम, और में गहराई से विश्लेषण के लिए अनुमति देता हैपाउंड. ऐतिहासिक, ताजा ऊतक नमूनों के लिए उपयोग और schwannoma कोशिकाओं अमर नहीं कर रहे हैं कि तथ्य की कमी काफी schwannoma tumorigenesis की जांच के लिए प्राथमिक संस्कृतियों का उपयोग बाधा है. प्राथमिक संस्कृतियों की सीमित आपूर्ति पर काबू पाने, अमर HEI193 वी.एस. सेल लाइन एचपीवी E6 और E7 ओंकोजीन 5 के साथ पारगमन द्वारा उत्पन्न किया गया था. इस oncogenic पारगमन मानव schwannoma ट्यूमर के लिए एक मॉडल के रूप में उनके उपयोग की सीमा कोशिकाओं है, जो करने के लिए महत्वपूर्ण आणविक और प्ररूपी परिवर्तन की शुरुआत की. एक कार्यात्मक NF2 जीन की कमी है कि ट्रांसजेनिक माउस लाइनों से व्युत्पन्न अनुसूचित जाति संस्कृतियों इन विट्रो में NF2 निर्भर अनुसूचित जाति tumorigenesis की जांच के लिए एक और विकल्प का प्रतिनिधित्व करते हैं. इन संस्कृतियों हालांकि मानव विशिष्ट व्यवहार के लिए मानव वीएसएस या खाते की विषम प्रकृति पुनरावृत्ति करने में विफल. हाल पिछले वी.एस. संस्कृति तकनीक अपेक्षाकृत लंबे समय प्रसंस्करण और जटिल चयनात्मक संस्कृति तकनीक 6-8 की आवश्यकता है.Immunostaining द्वारा निर्धारित रूप में यहाँ हम 95% ट्यूमर सेल शुद्धता के साथ 3 घंटा तहत में पूरा प्रसंस्करण के साथ सेल संस्कृति वी.एस. प्राथमिक के लिए एक सरल, प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य प्रोटोकॉल, उपस्थित थे.
Protocol
Representative Results
Discussion
इन विट्रो schwannoma संस्कृति का इतिहास
इन विट्रो schwannoma संस्कृतियों में स्थापित करने के प्रयासों खुला शल्य लकीर 1894 12 में हुई प्रारंभिक ध्वनिक न्युरोमा के बाद बस कुछ ही दशकों में…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
समर्थन: NIDCD R01DC009801, P30DC010362, 5T32DC000040 -17
Materials
| Poly-L-Ornithine, 0.01% Solution | Sigma | P4957 | Cell Culture Surface Treatment |
| Laminin Mouse Protein | Gibco | 23017-015 / L2020 | Cell Culture Surface Treatment |
| 0.2% Collagenase (dissolved in HBSS -/-) | Sigma | C2674 | Dissociation Reagent |
| 0.25% Trypsin | Gibco | 25200-056 | Dissociation Reagent |
| TPS 100mm Round Culture Dish | Midwest Scientific | TP93100 | |
| Permanox 4 well slide | Fisher Scientific | 1256521 | |
| Permanox 8 well slide | Fisher Scientific | 1256522 | |
| Suction Filter Flask | Midwest Scientific | TP99500 | |
| 15ml Conical Tube | Midwest Scientific | TP91015 | |
| 50ml Conical Tube | Midwest Scientific | TP91050 | |
| 2mL Round Bottom Tube | USA Scientific | 1620-2700 | |
| Small Scissor | FST | 14058-11 | |
| Small Forceps | FST | 11251-20 | |
| Scalpel Handle | FST | 10004-13 | |
| #11 Scalpel Blade | Roboz | RS-9801-11 | |
| Non-Tissue Culture 100mm Round Petri Dish | Fisher Scientific | 50-820-904 | |
| P1000 Pipetteman | Bioexpress | P3963-1000 | |
| Serological Pipetteman | Bioexpress | R3073-2P | |
| Sterile, Non-Filtered P1000 Pipette Tips | Midwest Scientific | TD1250R | |
| Insulated Ice Cooler | |||
| Culture Hood | Baker | ||
| Centrifuge | Eppendorf -5810R | ||
| Hanks Balanced Salt Solution (HBSS) +/+ (w/ Ca2+, Mg2+) | Gibco | 24020-117 | Schwannoma Culture and Media Components |
| Hanks Balanced Salt Solution (HBSS) -/- (w/out Ca2+, Mg2+) | Gibco | 14170-112 | Schwannoma Culture and Media Components |
| Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM), High Glucose, w/ Phenol Red | Gibco | 11965-092 | Schwannoma Culture and Media Components |
| N2 Supplement | Gibco | 17502-048 | Schwannoma Culture and Media Components |
| Fetal Bovine Serum | Gibco | 26140-079 | Schwannoma Culture and Media Components |
| Penicillin – Streptomycin | Gibco | 15140-163 | Schwannoma Culture and Media Components |
| Bovine Insulin (1mg/ml 200x) | Sigma | I6634 | Schwannoma Culture and Media Components |
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