نقل النووي في البويضات ماوس
Summary
والمقصود من هذا الفيلم والبروتوكول للمساعدة في نقل التعلم النووية.
Abstract
يمكن نقل النووي في بويضة غير مخصبة استعادة التنموية المحتملة للخلية متمايزة. هذا يدل على أن عمليات التنمية الأساسية ، والتمايز والشيخوخة هي اللاجينية بدلا من العمليات الجينية. على عكس هذه العمليات تفتح آفاقا مثيرة في البحوث الأساسية ، وأكثر في المستقبل البعيد ، في مجال الطب التجديدي. في الماوس ، يمكن اشتقاق خلايا جذعية جنينية من أجنة مستنسخة المرحلة سابق للانغراس. مثل الخلايا الجذعية الجنينية لديها القدرة على أن تؤدي إلى جميع أنواع الخلايا للكائن أخلاقي. الأهم من ذلك ، هذه الخلايا متطابقة وراثيا إلى الجهة المانحة. إذا كان ينطبق على الإنسان ، وهذا من شأنه أن يسمح للاشتقاق الخلايا الجذعية من المريض. ويمكن عندئذ أن تكون هذه الخلايا المتمايزة في نوع من الخلايا المتضررة للمريض ، ودرس في المختبر ، أو استخدامها لتحل محل الخلايا التالفة أو المفقودة. دراسة نقل النووي في الفأر لا يزال هاما لأنها يمكن أن تبلغنا عن مبادئ برمجة النووية. والمقصود من هذا الفيلم والبروتوكول المرافق له للمساعدة في تعلم نقل النووي في الفأر ، وهو أسلوب وضعت في البداية في مجموعة من Yanagimachi الأستاذ (اكاياما وآخرون 1998).
Protocol
Discussion
حظا سعيدا!
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأود أن أشكر DE الدكتور إخفاء Akutsu لتقاسم له NT الحيل والدكتور ستيفن وسوليفان غاريت Birkhoff لقراءة نقدية للبروتوكول.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Cytochalastin B | Sigma | 100x stock = 500 ug/mL Cytochalasin B in DMSO. Store at -20˚ C. | ||
| Strontium Chloride | 10x stock = 100 mM SrCl2 in H2O. Store at room temperature. | |||
| MCZB Stock Salts | Filter sterilize 500 mL master salts (good for 3-4 months; store at 4˚ C) | |||
| HCZB Stock Salts | Start with 500 mL master salts. Add 50 mg PVA. Stir for 30-60 min and sterile filter (good for 3 months; store at 4˚ C). | |||
| PVA | Sigma | P-8136 | cold-soluble | |
| HCZB with 11% w/v PVP | Start with 20 ml HCZB medium in a 50 mL conical tube. Place 22g PVP on top of liquid. Close tube and store undisturbed at 4˚ C for 72 – 96 hrs, at which time the PVP will have entered solution. Filter sterilize through an 8 mm filter and store at 4˚ C. | |||
| PVP | ICN Biochemicals | MW 360000 |
References
- Eggan, K., Jaenisch, R., Pease, S., Lois, C. . Mammalian and Avian Transgenesis- New Approaches. , (2006).
- Nagy, A., Gertsenstein, M., Vintersten, K., Behringer, R., Press, C. S. H. L. . Manipulating the mouse embryo. , (2003).
- Wakayama, T., Perry, A. C., Zuccotti, M., Johnson, K. R., Yanagimachi, R. Full-term development of mice from enucleated oocytes injected with cumulus cell nuclei. Nature. 394, 369-374 (1998).
