マウス卵母細胞への核移転

Summary

この映画とプロトコルは、核移植を学習することを目的としています。

Abstract

未受精卵卵母細胞への核移植は、分化した細胞への発達の可能性を復元することができます。これは、開発、差別化と高齢化の根底にあるプロセスはむしろ遺伝的プロセスよりもエピジェネティックであることを示している。これらのプロセスの可逆性は、再生医療では、基礎研究に、そしてより遠い将来のエキサイティングな展望を開きます。マウスでは、胚性幹細胞は、クローニングされた着床前の段階の胚に由来することができます。このような胚性幹細胞は成体生物のすべての細胞型を生じさせる能力を持っている。重要なことは、これらの細胞は、ドナーと遺伝的に同一です。人間に適用する場合、これは患者から幹細胞の派生を可能​​にするであろう。これらの細胞は、患者の患部の細胞型に分化し、in vitroで研究、または破損または不足している細胞を置き換えるために使用することができる。それが核初期化の原理についての私達に知らせることができるようにマウスの核移植の研究は依然として重要である。この映画とそれに付随するプロトコルは、マウスで最初に教授柳町（和歌山ら、1998）のグループで開発された方法を核移植を学習することを目的としています。

Protocol

準備： 排卵とmicrodrop胚培養の詳細な説明は別の場所で2見つけることができます。 胚培養培地のmicrodrops（例えばKSOM、Chemicon社）を持つペトリ皿を準備します。鉱物油（ミネラルオイルのバッチが胚培養との互換性についてテストする必要がある）でカバー。 37平衡で空気プラス5％CO 2でC。 （サーモエレクトロン3110水ジャケットイン?…

Discussion

幸運を祈る！

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Cytochalastin B		Sigma		100x stock = 500 ug/mL Cytochalasin B in DMSO. Store at -20˚ C.
Strontium Chloride				10x stock = 100 mM SrCl2 in H2O. Store at room temperature.
MCZB Stock Salts				Filter sterilize 500 mL master salts (good for 3-4 months; store at 4˚ C)
HCZB Stock Salts				Start with 500 mL master salts. Add 50 mg PVA. Stir for 30-60 min and sterile filter (good for 3 months; store at 4˚ C).
PVA		Sigma	P-8136	cold-soluble
HCZB with 11% w/v PVP				Start with 20 ml HCZB medium in a 50 mL conical tube. Place 22g PVP on top of liquid. Close tube and store undisturbed at 4˚ C for 72 – 96 hrs, at which time the PVP will have entered solution. Filter sterilize through an 8 mm filter and store at 4˚ C.
PVP		ICN Biochemicals		MW 360000

Please check for additional buffers compositions in the Protocol part.