Summary
Este filme eo protocolo são destinados a ajudar o aprendizado de transferência nuclear.
Abstract
Transferência nuclear para um ovócito não fertilizado pode restaurar potencial de desenvolvimento de uma célula diferenciada. Isso demonstra que os processos subjacentes de diferenciação, desenvolvimento e envelhecimento são epigenético ao invés de processos genéticos. A reversibilidade desses processos abre perspectivas interessantes na pesquisa básica, e no futuro mais distante, na medicina regenerativa. Em camundongos, as células-tronco embrionárias podem ser derivadas de embriões clonados estágio de pré-implantação. Tais células-tronco embrionárias têm a capacidade de dar origem a todos os tipos de células do organismo adulto. Importante, estas células são geneticamente idênticos ao doador. Se aplicável ao ser humano, isso permitiria que a derivação de células-tronco de um paciente. Essas células poderiam então ser diferenciados para o tipo de célula afetada do paciente e estudou in vitro, ou usado para substituir as células danificadas ou em falta. O estudo da transferência nuclear no mouse continua a ser importante, pois ele pode nos informar sobre os princípios da reprogramação nuclear. Este filme e que acompanha o protocolo se destinam a ajudar o aprendizado de transferência nuclear no mouse, um método desenvolvido inicialmente no grupo do Prof Yanagimachi (Wakayama et al. 1998).
Protocol
Discussion
Boa sorte!
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
DE gostaria de agradecer ao Dr. Esconder Akutsu para compartilhar suas NT truques e Dr. Stephen Sullivan e Garrett Birkhoff para a leitura crítica do protocolo.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Cytochalastin B | Sigma | 100x stock = 500 ug/mL Cytochalasin B in DMSO. Store at -20˚ C. | ||
| Strontium Chloride | 10x stock = 100 mM SrCl2 in H2O. Store at room temperature. | |||
| MCZB Stock Salts | Filter sterilize 500 mL master salts (good for 3-4 months; store at 4˚ C) | |||
| HCZB Stock Salts | Start with 500 mL master salts. Add 50 mg PVA. Stir for 30-60 min and sterile filter (good for 3 months; store at 4˚ C). | |||
| PVA | Sigma | P-8136 | cold-soluble | |
| HCZB with 11% w/v PVP | Start with 20 ml HCZB medium in a 50 mL conical tube. Place 22g PVP on top of liquid. Close tube and store undisturbed at 4˚ C for 72 – 96 hrs, at which time the PVP will have entered solution. Filter sterilize through an 8 mm filter and store at 4˚ C. | |||
| PVP | ICN Biochemicals | MW 360000 |
References
- Eggan, K., Jaenisch, R., Pease, S., Lois, C. . Mammalian and Avian Transgenesis- New Approaches. , (2006).
- Nagy, A., Gertsenstein, M., Vintersten, K., Behringer, R., Press, C. S. H. L. . Manipulating the mouse embryo. , (2003).
- Wakayama, T., Perry, A. C., Zuccotti, M., Johnson, K. R., Yanagimachi, R. Full-term development of mice from enucleated oocytes injected with cumulus cell nuclei. Nature. 394, 369-374 (1998).
