Transfert nucléaire dans des ovocytes de la souris

Summary

Ce film et le protocole sont destinées à aider l'apprentissage du transfert nucléaire.

Abstract

Le transfert de noyau dans un ovocyte non fertilisé peut restaurer le potentiel de développement à une cellule différenciée. Cela démontre que le processus sous-jacents de développement, la différenciation et le vieillissement sont épigénétiques plutôt que les processus génétiques. La réversibilité de ces processus ouvre des perspectives passionnantes dans la recherche fondamentale, et dans un avenir plus lointain, dans la médecine régénérative. Chez la souris, les cellules souches embryonnaires peuvent être dérivées de cloner des embryons stade préimplantatoire. Ces cellules souches embryonnaires ont la capacité de donner naissance à tous les types cellulaires de l'organisme adulte. Fait important, ces cellules sont génétiquement identique au donneur. Si applicable aux humains, cela permettrait la dérivation de cellules souches d'un patient. Ces cellules pourraient alors être différenciés dans le type de cellules touchées du patient et étudié in vitro, ou utilisés pour remplacer les cellules endommagées ou manquantes. L'étude du transfert nucléaire chez la souris reste importante car elle peut nous informer sur les principes de la reprogrammation nucléaire. Ce film et le protocole d'accompagnement sont destinées à aider l'apprentissage du transfert nucléaire chez la souris, une méthode initialement développée dans le groupe du Prof Yanagimachi (Wakayama et al. 1998).

Protocol

Préparatifs: Une description détaillée de la superovulation et la culture d'embryons microgoutte peuvent être trouvés ailleurs 2. Préparez une boîte de Pétri avec des microgouttes de milieu de culture embryonnaire (par exemple KSOM, Chemicon). Couvrir avec de l'huile minérale (lots d'huile minérale doivent être testés pour la compatibilité avec la culture d'embryons). S'équilibrer à 37 ° C dans l'air, plus 5% de C…

Discussion

Bonne chance!

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Cytochalastin B		Sigma		100x stock = 500 ug/mL Cytochalasin B in DMSO. Store at -20˚ C.
Strontium Chloride				10x stock = 100 mM SrCl2 in H2O. Store at room temperature.
MCZB Stock Salts				Filter sterilize 500 mL master salts (good for 3-4 months; store at 4˚ C)
HCZB Stock Salts				Start with 500 mL master salts. Add 50 mg PVA. Stir for 30-60 min and sterile filter (good for 3 months; store at 4˚ C).
PVA		Sigma	P-8136	cold-soluble
HCZB with 11% w/v PVP				Start with 20 ml HCZB medium in a 50 mL conical tube. Place 22g PVP on top of liquid. Close tube and store undisturbed at 4˚ C for 72 – 96 hrs, at which time the PVP will have entered solution. Filter sterilize through an 8 mm filter and store at 4˚ C.
PVP		ICN Biochemicals		MW 360000

Please check for additional buffers compositions in the Protocol part.