Nuclear Transfer in Maus-Oozyten
Summary
Dieser Film und das Protokoll sollen helfen, das Lernen Kerntransfer.
Abstract
Nuclear Transfer in eine unbefruchtete Eizelle kann Entwicklungspotenzial zu einer differenzierten Zelle wiederherzustellen. Dies zeigt, dass die zugrunde liegenden Prozesse Entwicklung, Differenzierung und Alterung epigenetische anstatt genetische Prozesse sind. Die Reversibilität dieser Prozesse eröffnet spannende Perspektiven in Grundlagenforschung und in der ferneren Zukunft, in der regenerativen Medizin. In der Maus können embryonale Stammzellen aus geklonten Embryonen Präimplantationsstadium abgeleitet werden. Solche embryonalen Stammzellen haben die Fähigkeit, sich zu allen Zelltypen des erwachsenen Organismus zu geben. Wichtig ist, dass diese Zellen genetisch identisch mit dem Spender. Wenn für Menschen, würde dies ermöglichen die Gewinnung von Stammzellen aus einem Patienten. Diese Zellen könnten dann in das betroffene Zelltyp des Patienten differenziert werden und studiert in vitro oder verwendet werden, um die beschädigte oder fehlende Zellen zu ersetzen. Das Studium der Kerntransfer bei der Maus bleibt wichtig, da sie uns über die Prinzipien der nuklearen Umprogrammierung informieren können. Dieser Film und die begleitenden Protokoll sollen helfen Lernen Kerntransfer bei der Maus, eine Methode, zunächst in der Arbeitsgruppe von Prof. Yanagimachi (Wakayama et al. 1998) entwickelt.
Protocol
Discussion
Viel Glück!
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
DE möchte Dr. ausblenden Akutsu für die gemeinsame Nutzung seiner NT Tricks und Dr. Stephen Sullivan und Garrett Birkhoff für die kritische Durchsicht des Protokolls zu danken.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Cytochalastin B | Sigma | 100x stock = 500 ug/mL Cytochalasin B in DMSO. Store at -20˚ C. | ||
| Strontium Chloride | 10x stock = 100 mM SrCl2 in H2O. Store at room temperature. | |||
| MCZB Stock Salts | Filter sterilize 500 mL master salts (good for 3-4 months; store at 4˚ C) | |||
| HCZB Stock Salts | Start with 500 mL master salts. Add 50 mg PVA. Stir for 30-60 min and sterile filter (good for 3 months; store at 4˚ C). | |||
| PVA | Sigma | P-8136 | cold-soluble | |
| HCZB with 11% w/v PVP | Start with 20 ml HCZB medium in a 50 mL conical tube. Place 22g PVP on top of liquid. Close tube and store undisturbed at 4˚ C for 72 – 96 hrs, at which time the PVP will have entered solution. Filter sterilize through an 8 mm filter and store at 4˚ C. | |||
| PVP | ICN Biochemicals | MW 360000 |
References
- Eggan, K., Jaenisch, R., Pease, S., Lois, C. . Mammalian and Avian Transgenesis- New Approaches. , (2006).
- Nagy, A., Gertsenstein, M., Vintersten, K., Behringer, R., Press, C. S. H. L. . Manipulating the mouse embryo. , (2003).
- Wakayama, T., Perry, A. C., Zuccotti, M., Johnson, K. R., Yanagimachi, R. Full-term development of mice from enucleated oocytes injected with cumulus cell nuclei. Nature. 394, 369-374 (1998).
