Fare Oosit içine Nükleer Transfer
Summary
Bu film ve protokol nükleer transfer öğrenmeye yardımcı olmayı amaçlamaktadır.
Abstract
Döllenmemiş bir oosit içine Nükleer transfer farklılaşmış hücre gelişim potansiyeli geri yükleyebilirsiniz. Bu gelişme, farklılaşma ve yaşlanma altında yatan süreçlerin genetik süreçleri yerine epigenetik olduğunu göstermektedir. Bu süreçlerin reversibilite rejeneratif tıp, temel araştırma heyecan verici perspektifler açılır ve daha uzak bir gelecekte. Fare embriyonik kök hücreleri, klonlanmış preimplantasyon aşamasında embriyolardan elde edilebilir. Bu embriyonik kök hücreleri, yetişkin organizmanın tüm hücre tiplerinin yol vermek için yeteneği var. Önemlisi, bu hücrelerin genetik donör aynıdır. Varsa insan, bu, bir hastadan alınan kök hücrelerin türetme izin verecek. Bu hücreler daha sonra hastanın etkilenen hücre tipi içine farklılaştırılmış ve in vitro okudu veya zarar görmüş veya kaybolmuş hücreler değiştirmek için kullanılan olabilir. Nükleer yeniden programlama ilkeleri hakkında bizi bilgilendirmek gibi fare nükleer transfer çalışmaları önemini korumaktadır. Bu film ve beraberindeki protokol, fare nükleer transfer öğrenme yardımcı olmak için tasarlanmıştır, başlangıçta grup Prof. Yanagimachi (Wakayama ve ark 1998) bir yöntem geliştirdi.
Protocol
Discussion
İyi şanslar!
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
DE Dr. Gizle Akutsu protokol eleştirel okuma onun NT hile ve Dr. Stephen Sullivan ve Garrett Birkhoff paylaşımı için teşekkür etmek istiyorum.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Cytochalastin B | Sigma | 100x stock = 500 ug/mL Cytochalasin B in DMSO. Store at -20˚ C. | ||
| Strontium Chloride | 10x stock = 100 mM SrCl2 in H2O. Store at room temperature. | |||
| MCZB Stock Salts | Filter sterilize 500 mL master salts (good for 3-4 months; store at 4˚ C) | |||
| HCZB Stock Salts | Start with 500 mL master salts. Add 50 mg PVA. Stir for 30-60 min and sterile filter (good for 3 months; store at 4˚ C). | |||
| PVA | Sigma | P-8136 | cold-soluble | |
| HCZB with 11% w/v PVP | Start with 20 ml HCZB medium in a 50 mL conical tube. Place 22g PVP on top of liquid. Close tube and store undisturbed at 4˚ C for 72 – 96 hrs, at which time the PVP will have entered solution. Filter sterilize through an 8 mm filter and store at 4˚ C. | |||
| PVP | ICN Biochemicals | MW 360000 |
References
- Eggan, K., Jaenisch, R., Pease, S., Lois, C. . Mammalian and Avian Transgenesis- New Approaches. , (2006).
- Nagy, A., Gertsenstein, M., Vintersten, K., Behringer, R., Press, C. S. H. L. . Manipulating the mouse embryo. , (2003).
- Wakayama, T., Perry, A. C., Zuccotti, M., Johnson, K. R., Yanagimachi, R. Full-term development of mice from enucleated oocytes injected with cumulus cell nuclei. Nature. 394, 369-374 (1998).
