Transferencia nuclear en ovocitos de ratón
Summary
Esta película y el protocolo se pretende ayudar al aprendizaje de la transferencia nuclear.
Abstract
La transferencia nuclear en un ovocito no fertilizado puede restablecer el potencial de desarrollo de una célula diferenciada. Esto demuestra que los procesos que subyacen al desarrollo, la diferenciación y el envejecimiento son epigenéticos en lugar de los procesos genéticos. La reversibilidad de estos procesos se abre perspectivas interesantes en la investigación básica, y en el futuro más lejano, en la medicina regenerativa. En el ratón, las células madre embrionarias se pueden derivar de la clonación de embriones de preimplantación etapa. Estas células madre embrionarias tienen la capacidad de dar lugar a todos los tipos celulares del organismo adulto. Es importante destacar que estas células son genéticamente idénticos al donante. Si es aplicable a humanos, esto permitirá la obtención de células madre de un paciente. Estas células podrían entonces ser diferenciado en el tipo de células afectadas del paciente y estudio in vitro, o se utiliza para reemplazar las células dañadas o faltantes. El estudio de la transferencia nuclear en el ratón sigue siendo importante ya que nos puede informar acerca de los principios de la reprogramación nuclear. Esta película y el protocolo de acompañamiento están destinadas a ayudar al aprendizaje de la transferencia nuclear en el ratón, un método desarrollado inicialmente en el grupo del Prof. Yanagimachi (Wakayama et al. 1998).
Protocol
Discussion
¡Buena suerte!
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
DE gustaría agradecer al Dr. Ocultar Akutsu para compartir sus trucos NT y el Dr. Stephen Sullivan y Garrett Birkhoff para la lectura crítica del protocolo.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Cytochalastin B | Sigma | 100x stock = 500 ug/mL Cytochalasin B in DMSO. Store at -20˚ C. | ||
| Strontium Chloride | 10x stock = 100 mM SrCl2 in H2O. Store at room temperature. | |||
| MCZB Stock Salts | Filter sterilize 500 mL master salts (good for 3-4 months; store at 4˚ C) | |||
| HCZB Stock Salts | Start with 500 mL master salts. Add 50 mg PVA. Stir for 30-60 min and sterile filter (good for 3 months; store at 4˚ C). | |||
| PVA | Sigma | P-8136 | cold-soluble | |
| HCZB with 11% w/v PVP | Start with 20 ml HCZB medium in a 50 mL conical tube. Place 22g PVP on top of liquid. Close tube and store undisturbed at 4˚ C for 72 – 96 hrs, at which time the PVP will have entered solution. Filter sterilize through an 8 mm filter and store at 4˚ C. | |||
| PVP | ICN Biochemicals | MW 360000 |
References
- Eggan, K., Jaenisch, R., Pease, S., Lois, C. . Mammalian and Avian Transgenesis- New Approaches. , (2006).
- Nagy, A., Gertsenstein, M., Vintersten, K., Behringer, R., Press, C. S. H. L. . Manipulating the mouse embryo. , (2003).
- Wakayama, T., Perry, A. C., Zuccotti, M., Johnson, K. R., Yanagimachi, R. Full-term development of mice from enucleated oocytes injected with cumulus cell nuclei. Nature. 394, 369-374 (1998).
