마우스 Oocytes에 핵 전송
Summary
이 영화와 프로토콜은 핵 이전을 학습 수 있도록 도와 드리기위한 것입니다.
Abstract
unfertilized oocyte에 핵 송금은 차별화된 세포로 발달 잠재력을 복원할 수 있습니다. 이것은 개발, 차별과 노화 기본 프로세스가 아니라 유전자 공정보다 epigenetic는 것을 보여줍니다. 이러한 프로세스의 안팎이 없게 짠 천성은 재생 의학에서 기초 연구에 흥미로운 관점을 열고, 그리고 더 먼 미래 인치 마우스에서 배아 줄기 세포는 복제 preimplantation 스테이지 배아에서 파생된 수 있습니다. 이러한 배아 줄기 세포는 성인 유기체의 모든 세포 유형을 일으키다 수있는 능력이 있습니다. 중요한 것은,이 세포는 기증자에게 유전자 동일합니다. 인간에 적용되는 경우,이 환자에서 줄기 세포의 파생을 허용합니다. 이러한 세포는 다음 환자의 영향을 세포 유형으로 차별하고 체외에서 공부하거나, 손상되었거나없는 세포를 대체하는 데 사용할 수 있습니다. 그것이 핵 프로그래밍의 원리에 대한 정보를 알려줄 수로 마우스에 핵 이전의 연구는 중요한 남아 있습니다. 이 영화와 함께 프로토콜이 마우스에 핵 이전을 학습 수 있도록 도와 드리기위한 것입니다, 처음에 교수 야나기 (와카야마 외. 1998)의 그룹에있는 방법을 개발했습니다.
Protocol
Discussion
행운을 빕니다!
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
DE는 프로토콜의 중요한 독서에 대한 그의 NT 트릭과 박사 스테판 설리번과 개렛 Birkhoff를 공유하기위한 박사 숨기기 아쿠쓰 감사하고 싶습니다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Cytochalastin B | Sigma | 100x stock = 500 ug/mL Cytochalasin B in DMSO. Store at -20˚ C. | ||
| Strontium Chloride | 10x stock = 100 mM SrCl2 in H2O. Store at room temperature. | |||
| MCZB Stock Salts | Filter sterilize 500 mL master salts (good for 3-4 months; store at 4˚ C) | |||
| HCZB Stock Salts | Start with 500 mL master salts. Add 50 mg PVA. Stir for 30-60 min and sterile filter (good for 3 months; store at 4˚ C). | |||
| PVA | Sigma | P-8136 | cold-soluble | |
| HCZB with 11% w/v PVP | Start with 20 ml HCZB medium in a 50 mL conical tube. Place 22g PVP on top of liquid. Close tube and store undisturbed at 4˚ C for 72 – 96 hrs, at which time the PVP will have entered solution. Filter sterilize through an 8 mm filter and store at 4˚ C. | |||
| PVP | ICN Biochemicals | MW 360000 |
References
- Eggan, K., Jaenisch, R., Pease, S., Lois, C. . Mammalian and Avian Transgenesis- New Approaches. , (2006).
- Nagy, A., Gertsenstein, M., Vintersten, K., Behringer, R., Press, C. S. H. L. . Manipulating the mouse embryo. , (2003).
- Wakayama, T., Perry, A. C., Zuccotti, M., Johnson, K. R., Yanagimachi, R. Full-term development of mice from enucleated oocytes injected with cumulus cell nuclei. Nature. 394, 369-374 (1998).
