एक कार्बनिक विलायक के इस्तेमाल के बिना Triclosan का प्रभाव: आरबीएल-2H3 मस्त सेल degranulation पर रासायनिक प्रभाव का आकलन करने के लिए एक microplate परख

Summary

मस्त सेल degranulation, एलर्जी मध्यस्थों की रिहाई, एलर्जी, अस्थमा, और परजीवी रक्षा में महत्वपूर्ण है. यहाँ हम degranulation पर दवाओं और विषैले पदार्थ के प्रभाव का आकलन करने के लिए तकनीक ¹ का प्रदर्शन, कार्यप्रणाली हाल ही में जीवाणुरोधी एजेंट triclosan ² के शक्तिशाली निरोधात्मक प्रभाव प्रदर्शन करने के लिए उपयोग किया.

Abstract

मस्त कोशिकाओं एलर्जी रोग और परजीवी के खिलाफ प्रतिरक्षा रक्षा में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं. एक बार (एक allergen द्वारा जैसे) सक्रिय है, वे degranulate, एक प्रक्रिया है कि एलर्जी मध्यस्थों के एक्सोसाइटोसिस में परिणाम है. दवाओं और विषैले पदार्थ से मस्तूल सेल degranulation की मॉड्यूलेशन मानव स्वास्थ्य पर सकारात्मक या प्रतिकूल प्रभाव पड़ सकता है. मस्त सेल समारोह चूहे basophilic ल्यूकेमिया मस्तूल कोशिकाओं के उपयोग (आरबीएल-2H3), ^3-5 मानव श्लैष्मिक मस्तूल कोशिकाओं की एक व्यापक रूप से स्वीकार मॉडल के साथ विस्तार से विच्छेदित कर दिया गया है. ⁶ मस्तूल कोशिकाओं से histamine के साथ मिलकर में रैखिक जारी की है जो मस्त सेल दाना घटक और एलर्जी मध्यस्थ β-hexosaminidase, आसानी से और मज़बूती से करने के लिए उत्तरदायी है कि एक microplate परख में औसत दर्जे का प्रतिदीप्ति तीव्रता उपज, एक fluorogenic सब्सट्रेट के साथ प्रतिक्रिया के माध्यम से मापा जा सकता है उच्च throughput पढ़ाई ^1. मूलतः नाल एट अल. ¹ द्वारा प्रकाशित, हम स्क्रीनिंग ओ के लिए इस degranulation परख ढाल लियाच दवाओं और विषैले पदार्थ और यहाँ इसके उपयोग के प्रदर्शन.

Triclosan कई उपभोक्ता उत्पादों में मौजूद है और इस आशय के लिए तंत्र अज्ञात है, हालांकि, मानव एलर्जी त्वचा रोग ^7-11 में एक चिकित्सकीय सहायता होना पाया गया है कि एक व्यापक स्पेक्ट्रम एंटीबायोटिक एजेंट है. यहाँ हम मस्तूल सेल degranulation पर triclosan के प्रभाव के लिए एक परख प्रदर्शित करता है. हमने हाल ही में triclosan जोरदार मस्तूल सेल समारोह ² को प्रभावित करता है कि पता चला है. एक कार्बनिक विलायक के उपयोग से बचने के प्रयास में, triclosan गर्मी और सरगर्मी के साथ जलीय बफर में सीधे भंग कर रहा है, और उसके एवज में एकाग्रता ¹² (ε ₂₈₀ = 4200 एल / एम / सेमी का उपयोग) यूवी विज़ स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री का उपयोग करने की पुष्टि की है. इस प्रोटोकॉल, अधिक मोटे तौर पर उनके एलर्जी की संभावित मस्तूल सेल degranulation पर उनके प्रभाव का निर्धारण करने के लिए रसायनों की एक किस्म के साथ इस्तेमाल किया जा करने की क्षमता है, और.

Introduction

मस्त कोशिकाओं अत्यधिक अस्थमा में प्रमुख मध्यस्थों के रूप में सेवा है कि प्रतिरक्षा effector कोशिकाओं, एलर्जी, परजीवी रक्षा और carcinogenesis ^13-16 दानेदार रहे हैं. Degranulate को सक्रिय जब तक वे सुरक्षित साइटोप्लाज्मिक कणिकाओं में एलर्जी और सूजन मध्यस्थों की दुकान है, जहां वे लगभग हर vascularized ऊतक ¹⁵ में रहते हैं. Degranulation ऐसे हिस्टामाइन, tryptase, और leukotrienes ¹⁵ pharmacologically सक्रिय मध्यस्थों की रिहाई में जो परिणाम झिल्ली ही सीमित कणिकाओं की एक्सोसाइटोसिस है. प्रकार की दीक्षा में इस प्रक्रिया का परिणाम मैं परजीवी के खिलाफ रक्षा बढ़ते के साथ ही, एलर्जी दमा, और कासीनजन प्रतिक्रियाओं ¹⁵ की शुरुआत में महत्वपूर्ण हैं कि hypersensitivity प्रतिक्रियाओं.

मस्त कोशिकाओं और बेसोफिल FcεRI रिसेप्टर्स, immunoglobulin ई (IgE) ¹⁷ के लिए उच्च आत्मीयता रिसेप्टर्स व्यक्त करते हैं. एक allergen या प्रतिजन के संपर्क में कई आईजीई वाली FcεRI रिसेप्टर्स ¹⁷ के एकत्रीकरण का कारण बनता है, और यह इस s हैटाइरोसीन फास्फोरिलीकरण घटनाओं, आंतरिक दुकानों से phospholipase सी, कैल्शियम की तपका की सक्रियता, और सेल ¹⁸ में कैल्शियम की आमद के एक झरना: degranulation प्रक्रिया शुरू की है कि आईजीई वाली एफसी रिसेप्टर्स की "तिर्यक" ओ कहा जाता है. यह कैल्शियम बाढ़ degranulation के लिए आवश्यक है, और, आगे, दाना एक्सोसाइटोसिस ¹⁵ कारण पहले झिल्ली के साथ दाना संलयन का संकेत है. प्रयोगात्मक, एक कैल्शियम ionophore नदी के ऊपर जा रहा है या नीचे की ओर के रूप में एक विषैला द्वारा एक मार्ग लक्ष्य की पहचान के लिए अनुमति देता है, सीधे अनिवार्य रूप से सभी संकेत पारगमन कैल्शियम बाढ़ कदम ²⁰ के लिए पहले कदम नजरअंदाज जो कोशिका झिल्ली ¹⁹ के पार, शटल कैल्शियम के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है कैल्शियम ²⁰ संकेतन.

Degranulation हिस्टामाइन ⁶ साथ कणिकाओं से रैखिक जारी की है जो सेल तैरनेवाला, में β-hexosaminidase की रिहाई की निगरानी के द्वारा तेजी से और प्रभावी ढंग से मापा जा सकता, लेकिन मैंहै बहुत आसान परख फ्लोरोसेंट उत्पाद के लिए एक सरल एंजाइम सब्सट्रेट प्रतिक्रिया और एक microplate रीडर का उपयोग पता लगाने के लिए. के रूप में प्रोटोकॉल अनुभाग में विस्तृत इस microplate परख,, द्वारा β-fluorogenic सब्सट्रेट की दरार 4 methylumbelliferyl-N-acetyl-β-डी glucosaminide quantifies जो मूल रूप से नाल एट अल द्वारा विकसित की है. एक मजबूत विधि ^1, पर आधारित है hexosaminidase. Triclosan यहाँ पर प्रकाश डाला साथ हम दवाओं और विषैले पदार्थ का परीक्षण प्रभाव को परख संशोधित किया है. इस विधि मज़बूती degranulation quantifies, उदाहरण के लिए, प्रवाह cytometric आधारित तरीकों का पता लगाने ^21, के लिए एक सस्ता विकल्प है, और विरोधी एलर्जी दवाओं की एक विस्तृत विविधता के उच्च throughput स्क्रीनिंग के लिए अच्छी तरह से खुद को उधार देने की क्षमता है, साथ ही immunotoxic या एलर्जी रसायनों. यह पिछले अंक 21 ^वीं सदी में 2007 राष्ट्रीय अनुसंधान परिषद की रिपोर्ट "विषाक्तता परीक्षण के प्रकाश में विशेष रूप से महत्वपूर्ण है: एक दृष्टि और एक प्रारंभegy "( http://www.nap.edu/openbook.php?record_id=11970 चूहों जैसे पारंपरिक प्रयोगशाला पशुओं के महंगा उपयोग को कम करने के लिए सेल संस्कृति का उपयोग कि उच्च throughput विष विज्ञान परीक्षणों के विकास के लिए अधिवक्ताओं जो),. नाल एट अल. ¹ द्वारा विकसित की है और हमें ² से संशोधित degranulation प्रोटोकॉल, मुताबिक़ मानव श्लैष्मिक मस्तूल कोशिकाओं या बेसोफिल ^3-5 करने के लिए एक अच्छी तरह से स्वीकार मॉडल है जो आरबीएल-2H3 सेल लाइन का इस्तेमाल करता है. (संवर्धन आरबीएल-2H3 कोशिकाओं के लिए तरीके हचिंसन एट अल में विस्तृत रहे हैं. ^22). इस परख की संभावना किसी भी संलग्न मस्तूल सेल प्रकार के लिए अनुकूलित किया जा सकता है.

Triclosan (टीसीएस) अस्पतालों, व्यक्तिगत देखभाल उत्पादों, और उपभोक्ता वस्तुओं ^23,24 में 30 से अधिक वर्षों के लिए इस्तेमाल किया गया है कि एक व्यापक स्पेक्ट्रम रोगाणुरोधी है. टीसीएस के रोगाणुरोधी विशेषता के लिए कार्रवाई की विधा बाधा enoyl-एसाइल से अधिक संभावना है, फैटी एसिड biosynthesis के निषेध हैवाहक प्रोटीन रिडक्टेस ^25,26. यह ऐसी जेल स्नान, हाथ लोशन, टूथपेस्ट, माउथवॉश, और 0.3% या 10 मिमी ²⁴ से ऊपर सांद्रता में हाथ साबुन के रूप में उपभोक्ता उत्पादों की एक विस्तृत श्रृंखला में दुनिया भर में पाया जाता है. टीसीएस के व्यापक उपयोग मनुष्यों ^27-29 में और नदियों और धाराओं ³⁰ में detectable स्तर में हुई है. Allmyr एट अल द्वारा किए गए एक अध्ययन. ²⁷ टीसीएस और इसके चयापचयों प्लाज्मा और नर्सिंग माताओं से दूध दोनों में मौजूद हैं कि प्रदर्शन किया. महत्वपूर्ण बात है, टीसीएस आसानी से त्वचा ^31-37 में लीन है. Queckenberg एट अल. ³⁷ मस्तूल कोशिकाओं रहते हैं जहां त्वचा में महत्वपूर्ण एकाग्रता, जिसके परिणामस्वरूप 12 घंटे के भीतर मानव त्वचा में एक ~ 70 मिमी टीसीएस क्रीम की ~ 10% अवशोषण पाया.

टीसीएस के मानव एलर्जी त्वचा रोग ^7-11 प्रबंधन करने के लिए चिकित्सकीय दिखाया गया है, लेकिन टीसीएस एलर्जी त्वचा रोगों को दूर व्यवस्था है जिसके द्वारा ³⁸ अज्ञात दिया गया है. फ्लोरोसेंट microplate परख detaile का प्रयोगघ इस वीडियो में, हम हाल ही में 2 माइक्रोन के रूप में कम सांद्रता में टीसीएस, काफी इन क्लिनिकल डेटा ² के लिए एक संभावित व्याख्या उपलब्ध कराने, मस्तूल सेल समारोह और degranulation dampens कि प्रदर्शन किया. इन क्लिनिकल डेटा के लिए एक विवरण प्रदान करने के अलावा, पामर एट अल में हमारे निष्कर्ष बताते हैं. ² टीसीएस कैल्शियम बाढ़ के बहाव संकेतन अणुओं है कि लक्ष्य का सुझाव है. कई प्रतिरक्षाविज्ञानी और अन्य जैविक प्रक्रियाओं में संकेत कैल्शियम के महत्व के कारण, टीसीएस संभावित आवश्यक जैविक प्रक्रियाओं की एक विस्तृत विविधता पर प्रतिकूल प्रभाव हो सकता है. वास्तव में, Udoji एट अल. ³⁹ टीसीएस एक और महत्वपूर्ण सहज प्रतिरक्षा समारोह, मानव प्राकृतिक हत्यारा सेल अपघट्य गतिविधि को दबा पता चला है कि.

एलर्जी त्वचा रोग (या, इसके विपरीत, एक immunotoxicant) के रूप में एक चिकित्सकीय सहायता के रूप में अपनी क्षमता से परे, टीसीएस भी disruptor ^40-49 एक ​​endocrine हो सकता है. इस प्रकार, समाधान में इस रसायन तैयार करने के बारे में एक स्पष्ट प्रक्रिया मैंtoxicologists के लिए ब्याज की है. टीसीएस के एक छोटे हाइड्रोफोबिक अणु है, क्योंकि जैविक वाहनों अक्सर पानी में अधिक घुलनशील बनाने के लिए उपयोग किया जाता है. टीसीएस का परीक्षण किया गया है, जहां सबसे विषाक्तता अध्ययन में, तैयारी जैसे इथेनॉल, एसीटोन, या तेल ^2,50,51 के रूप में एक कार्बनिक विलायक की सहायता से पानी में विघटन शामिल किया गया है. हालांकि, कई बार इन सॉल्वैंट्स बार इस तरह का परीक्षण रासायनिक डेटा ⁵¹ की व्याख्या उलझी, खुद को जैविक रूप से सक्रिय हैं. वास्तव में, Rufli एट अल के अनुसार. ⁵² और दूसरों को ^53, यह जलीय विषाक्तता प्रयोगों के लिए परीक्षण समाधान विषाक्तता कलाकृतियों को बनाने के लिए रासायनिक विलायकों की क्षमता के कारण, रासायनिक तरीकों पर भौतिक तरीकों का उपयोग कर तैयार कर रहे हैं की सिफारिश की है. हम पहले टीसीएस 0.24% इथेनॉल / पानी (/ खंड खंड) में भंग कर दिया और 30 मिनट dampens आरबीएल मस्तूल सेल degranulation ² के लिए sonicated दिखाया है. 0.24% की तुलना में अधिक मात्रा में इथेनॉल मस्तूल सेल DEGRA को तर करने के लिए दिखाया गया हैnulation ^{54,55-उदाहरण} विषाक्तता अध्ययन पर कार्बनिक विलायकों की संभावित confounding प्रभाव की.

इतना ही नहीं यह जीव या अध्ययन के लिए इस्तेमाल किया कोशिकाओं पर विलायकों के प्रभाव पर विचार करने के लिए महत्वपूर्ण है, लेकिन यह भी परीक्षण रासायनिक पर ही एक विलायक के प्रभाव पर नजर रखने के लिए महत्वपूर्ण है. उदाहरण के लिए, Skaare एट अल. ⁵¹ तेलों में विघटन समारोह का एक पूरा नुकसान का कारण बना है, जबकि पॉलीथीन ग्लाइकोल में टीसीएस (सामान्यतः टूथपेस्ट और माउथवॉश में पाया जाता है) भंग स्वस्थ महिला महिलाओं में एंटी बैक्टीरियल और विरोधी पट्टिका प्रभाव कमजोर हो पाया. इसलिए, विभिन्न विलायकों की क्षमता टीसीएस सहित, विषैला और दवा मिलाना, प्रभाव परख डिजाइन में विचार किया जाना चाहिए. तेल या स्वाद additives के उपयोग के विभिन्न उत्पादों ^50,51 में टीसीएस के प्रभाव के साथ हस्तक्षेप कर सकते हैं.

कार्बनिक विलायकों का उपयोग करने की आवश्यकता को समाप्त करने के प्रयास में, हम एक कार्बनिक प के उपयोग को नष्ट करने से टीसीएस ² भंग करने के लिए हमारे विधि पर सुधारउतारना. वर्तमान प्रोटोकॉल में, हम गर्मी (≤ 50 डिग्री सेल्सियस) के साथ जलीय बफर में सीधे टीसीएस कणिकाओं भंग, और तब यूवी विज़ स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री द्वारा इस टीसीएस के शेयर की एकाग्रता को सत्यापित. टीसीएस 40 माइक्रोन (अप करने के लिए पानी में घुलनशील है क्योंकि ये सुधार संभव हैं http://www.epa.gov/oppsrrd1/REDs/2340red.pdf ) और 50 डिग्री सेल्सियस (पर गरम जब गिरावट का विरोध करने के लिए दिखाया गया है http:/ / oehha.ca.gov/prop65/public_meetings/052909coms/triclosan/ciba3.pdf ) ^56,57. टीसीएस भी दृढ़ता से 4200 एल / मोल सेमी / ¹² के एक दाढ़ विलुप्त होने गुणांक के साथ 280 एनएम ⁵⁸ को अवशोषित करने के लिए जाना जाता है के रूप में हम भी, यूवी विज़ स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री का जोड़ा लाभ है.

इस प्रोटोकॉल कम लागत और तेजी से सत्यापन सहित, एक कार्बनिक विलायक की सहायता के बिना एक बफर में टीसीएस कणिकाओं भंग करने के लिए एक सरल, अभी तक प्रभावी तरीका प्रदान करता हैएकाग्रता की, और मस्तूल सेल degranulation पर रासायनिक प्रभाव की निगरानी के लिए एक शक्तिशाली फ्लोरोसेंट microplate परख का वर्णन करता है.

Protocol

सभी बफर व्यंजनों प्रोटोकॉल पाठ के अंत में एक तालिका में शामिल हैं जो ध्यान दें. दिन 1: 1. कक्ष की तैयारी बढ़त के प्रभाव से बचने के लिए लेआउट पर परीक्षण के नमूने एकत्रित करना, 96 …

Representative Results

50 को जब गरम डिग्री सेल्सियस 90 मिनट के लिए, टीसीएस के लिए यूवी विज़ absorbance के स्पेक्ट्रम के रूप में चित्र 1 में दिखाया 280 एनएम पर एक चोटी के साथ ~ 260 और 300 एनएम के बीच एक मजबूत, चिकनी वक्र, पैदा करता है. 280 एनएम पर प्रकाश?…

Discussion

2004 में, नाल एट अल. ¹ degranulation के उच्च throughput के परीक्षण के लिए एक मस्तूल सेल biosensor है विकसित. यह हम अपने टीसीएस पढ़ाई के लिए अनुकूल है और इस वीडियो में विस्तृत है कि एक मजबूत परख है. पिछले नाल एट अल. ¹ परख, मस्तूल ?…

Materials

RBL-2H3 Cells	ATCC	CRL-2256	The cells we used were a gift, but they are also available from ATCC
Triclosan/Irgasan	Sigma	72779 CAS# 3380-34-5	Should be stored in a low humidity environment
Trypsin	Gibco	25300-054 CAS# 3380-34-5
EMEM	Lonza	12-611F
Fetal Bovine Serum	Atlanta Biologicals	S11150
Gentamycin Sulfate	Lonza Biological Sciences	17-518
Albumin, Bovine Serum	Calbiochem	12659 CAS# 9048-46-8
Surfact-Amps X-100 (Triton X-100; 10% solution)	Pierce	28314 CAS# 9002-93-1
HEPES	J.T Baker	4153-01 CAS# 75277-39-3
Magnesium Chloride	VWR	BDH0244-500G CAS# 7791-18-6
D-(+)-Glucose	Biomedicals	152527 CAS# 50-99-7
Potassium Chloride Crystal	J.T Baker	3046-01 CAS# 7447-40-7
Calcium chloride dihyrdate	Acros Organics	207780010 CAS# 10035-04-8
Glycine	Sigma	G8898 CAS# 56-40-6
4-Methylumbelliferyl-N-acetyl-β-D-glucosaminide (4-MU)	EMD Biosciences	474502-250MG CAS # 37067-30-4	Wrap in foil – is light-sensitive
Anti-DNP Mouse IgE	Sigma	D8406	Reagent has concentration of 1 mg/ml. Aliquot 25 µl of reagent into separate microcentrifuge tubes and Parafilm. Store aliquots at -20 °C that are not being used and store aliquot that is being used at 2-8 °C for no longer than 1 month.
DNP-BSA	Gift from Dr. David Holowka and Dr. Barbara Baird, Cornell University		Suggest: life technologies DNP-BSA catalog# A23018
Calcium Ionophore A23187	Sigma	C75-22-1mg	Ionophore was made from a powder by adding 400 µl of fresh 100% DMSO into the ionophore vial and is kept at -20 °C Note: we have used the ionophore past its 3 month expiration date successfully
DMSO	Sigma	D2650 CAS# 67-68-5
Acetic Acid	VWR	BDH3094-2 CAS# 64-19-7
Anhydrous Sodium Carbonate	Sigma	222321 CAS# 497-19-8
Sodium Chloride	Sigma	71376 CAS# 7647-14-5
Hydrochloric Acid	VWR	BDH3026 CAS# 7647-01-0
Reference Buffer, pH 7	VWR	BDH5046
Reference Buffer, pH 10	VWR	BDH5072
Reference Buffer, pH 4	VWR	BDH5018
pH electrode storage solution	VWR	14002-828
			Equipment:
Material Name	Company	Catalogue Number	Comments (optional)
DU 7500 Spectrophotometer	Beckmann	No longer sold
Synergy 2 plate reader Uses Gen5 Microplate Data Collection and Analysis Software	BioTek	Module S
Hematocytometer	Hausser Scientific	3110
7 x 7 CER HOT/STIR 120 V Combination hot plate/magnetic stir plate	VWR	97042-634
Centrifuge	Eppendorf	5430
Tissue culture water bath	VWR	Model# 89032-206
Tissue Culture biological safety cabinet SafeGARD (TC hood)	The Baker Company	Model# SG403A-HE
Tissue culture incubator	ThermoScientific	Model# 3598
Pipetman	VWR		Range: P2-P1000
Balance	Mettler Toledo	Model# AG204
pH meter	Symphony/VWR	Model# SB70P
Pipet-Aid	Drummond Scientific	4-000-100
Combitip dispenser	Eppendorf	4981 000.019
			Recipes:
Name	Recipe	Notes
Acetate Buffer, pH 4.4	Make 0.12 M acetic acid and titrate to pH 4.4 with 10 N NaOH. This is 5.3 ml glacial acetic acid into 1 L of MilliQ water: (1 L)*(0.12 mol/L)*(60 g/mol)*(ml/1.37 g) = 5.3 ml because density of glacial is 1.37 g/ml	Sterile Filter into autoclaved glass bottle
Substrate (4-MU)	Sigma M-2133, 250 mg, C18H21NO8, FW 379.4 CAS (37067-30-4) Store in -20°C Stock: 0.12 M in DMSO (46 mg in 1 ml DMSO), warm to 37 °C, vortex, sonicate 10 min. in water-bath sonicator with warm water, vortex again	For each experiment, make fresh solution of substrate in acetate buffer (100x dilution), for final concentration of 1.2 mM in acetate buffer
Glycine Carbonate Buffer, pH 10	26.7 g glycine 47.1 g anhydrous sodium carbonate Add deionized water for 1 L, and adjust pH to 10	Sterile filter into autoclaved glass bottle
Tyrodes (2 L), pH 7.4	135 mM NaCl: 15.78 g (or 270 ml of 1 M) 5 mM KCl: 10 ml of 1 M stock 1.8 mM CaCl2: 7.20 ml of 0.5 M stock 1 mM MgCl2: 4.00 ml of 0.5 M stock 5.6 mM glucose: 2.02 g (11.2 ml of 1 M) 20 mM HEPES: 40 ml of 1 M stock Using concentrated HCl pH from ~9.7-7.4	Sterile filter into autoclaved glass bottle
RBL Cell Media	Thaw fetal bovine serum (FBS, stored at -20 °C) for about 4 hours in 37 °C water bath Follow standard sterile technique Get out 1 L minimum essential medium (MEM) with L-glutamine (with Earle’s salts) Pour off some MEM to have 800 ml MEM, add 200 mL warm FBS Add 1 ml gentamicin sulfate antibiotic to 1 L of media with sterile pipette Only use media bottles that have been autoclaved and marked for cell culture use only.	Sterile filter (0.2 mm) into autoclaved glass bottle
			Plastic material used:
Material Name	Company	Catalogue Number	Type of Plastic
200 µl Disposable sterile pipet tips with graduations in 96 rack	VWR	53509-009	polypropylene
1,000 µl Sterile aerosol pipet tips with HighRecovery	VWR	89003-420	polyethylene
10 µl micro tip low binding sterile	VWR	14217-704	polypropylene
Disposable/conical Microcentrifuge tubes for high G-force	VWR	20170-038	polypropylene
Disposable/graduated/conical/sterile 50 ml centrifuge tubes with screw caps	VWR	21008-178	polypropylene
Disposable/graduated/conical/sterile 15 ml centrifuge tubes with screw caps	VWR	21008-103	polypropylene
CELLSTAR Tissue Culture Treated T-25 Flask w/ Filter Cap	Greiner Bio One	690175	polystyrene
CELLSTAR Tissue Culture Treated T-75 Flask w/ Filter Cap	Greiner Bio One	658175	polystyrene
CELLSTAR 10 ml Paper/Plastic Wrapped Serological Pipette	Greiner Bio One	607180	polystyrene
CELLSTAR 2 ml Paper/Plastic Wrapped Serological Pipette	Greiner Bio One	710180	polystyrene
CELLSTAR 5 ml Paper/Plastic Wrapped Serological Pipette	Greiner Bio One	606180	polystyrene
CELLSTAR 25 ml Paper /Plastic Wrapped Serological Pipette	Greiner Bio One	760180	polystyrene
1 cm cuvettes	N/A	N/A	polystyrene
CELLSTAR, 96W Microplate, Tissue-Culture Treated, Black, with Lid 96-well Plate	Greiner Bio One	655086	polystyrene
Combitips	Eppendorf	022266501	Polypropylene/ polyethylene